t**********8
发帖数: 223 | 1 谁有经验吗？真是晕死了。因为准备回国了，有几盒质粒通过fedex寄回去。以前听说
寄干冰有问题，以为寄普通的应该没问题。箱子里面有几支用剩的抗体，所以放了冰袋
。通过institute邮寄的。
现在东西已经到中国了，fedex通知说需要报关才能送到，报关程序大约需要两个月。
我让他们退回来算了，但可笑的是，退回来还得申请出关，至少需要十天的时间。
别人劝过我点在滤纸上，我嫌麻烦，谁知道会出这种事。 |
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w****e
发帖数: 536 | 2 寄质粒还用冰袋？
我们都是平信，滴在纸上就完了。 |
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t**********8
发帖数: 223 | 3 可是如果几百个质粒滴在纸上，那得一个一个分别用袋子装好，很麻烦啊 |
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s*****g
发帖数: 7857 | 4 真麻烦！我就用100microliter的过滤的双蒸水，泡小滤纸片在室温下30分钟到一小时，中间用
枪头吹吸一两次。
洗下来质粒放-20C冷冻。想做transformation，再拿出来。1-2microliter就管事
nbio (Panbiocn) 的大作中提到: 】 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 5 小心 HOME SEC or FBI/ CIA 看到了 这楼上的几楼记述
还有盖达的人 看了 偷带非洲新病毒的plasmid vector 进美帝内部
Cross US Custom boarder should be serious by US Law and Regulations.
回复]
[ 12 ]
发信人: wuxiang (无人相无我相无众生相无寿者相), 信区: Biology
标 题: Re: 寄质粒被扣在海关怎么办
发信站: BBS 未名空间站 (Sat May 5 22:37:45 2012, 美东)
样品可以直接寄的？还是要办理什么手续
过段时间要从美国以外带个样品回美国，有人建议直接放行李箱，不知可行不 |
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h**********r
发帖数: 671 | 6 向一个professor要了质粒，很爽快地答应给。拖拖拉拉地签了MTA。然后就没下文了。
FEDEX帐号也给了。着急上火啊～～
有啥好办法没？ |
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p******d
发帖数: 3737 | 7 没有这方面的经验。正在构建一个病毒质粒，启动子不强，需要把表达基因水平提高，
想试试加intron。问题是⒈怎么得到合适的intron片段，因为要包装病毒，最好还是小
一点的。⒉ 装这种片段要注意什么，怎么设计插入的方法？两头多几个少几个碱基影
响大吗？ |
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e****s
发帖数: 1125 | 8 觉得你提的更可能是Trash，不是你的目标质粒。
重新来吧。 |
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h**********r
发帖数: 671 | 9 你可以去E. coli Genetic Stock Center request一套做e. coli gene deletion的
lamda red菌株加质粒(7个左右吧) |
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C********4
发帖数: 308 | 10 猜不出来我要的那个质粒在谁手里啊。能同时给3个人写信，都放在收件人里面吗？
还是挨个写、同时发？
还是先给一个写，他不回，再给下一个写？
谢谢！ |
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C********4
发帖数: 308 | 11 我一个一个的分开同时写了，结果有一个老板很客气的回信说可以给；很开心。
然后又收到另两个老板的回信，都cc给那个刚回过信的老板，说他们没有这个质粒，希
望第三个老板会回信。
这样是不是不好啊？ |
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c**i
发帖数: 265 | 12 请问大家要质粒一定要PI自己发信么，学生写信要可不可以？我老板上次写信两次对方
都没回，心里留下阴影了。 |
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K**R
发帖数: 193 | 13 求助各位大侠两个问题，很着急，谢谢了！
1 我提取原代细胞后 加入5% DMSO 和medium 放入-80 冰箱过夜，在放入液氮，这样方
法对吗？应为样品及其宝贵
2 第二部有个逆转录载体质粒，我不想包装了，可以用普通lipofectamiane2000 等试
剂来转染吗？
效率一般是多少，
多谢大家了！ |
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j***y
发帖数: 1640 | 14 俺lab 有个原核 730aa 的蛋白， 以前在是克隆在pET3 vetor 中表达的，产率不
是很好，老板想把它重新clone 到 pBBR 质粒中去表达，据说产率很高，俺们lab没有
那些内切酶，也没有做construction 的经验， 当然 PCR，电泳那些东东还是有的,
所以俺估计自己弄很麻烦。
不知道那个公司做这个比较好， 大概要多少$ 呢？ |
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t******n
发帖数: 354 | 15 进入未名形象秀
我的博客
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0
[ 2 ]
发信人: sunnyday (胖头鱼。按斤卖就赚了), 信区: Biology
标 题: Re: 请大虾们推荐一个构建质粒的公司吧
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Dec 4 09:46:37 2012, 美东)
Genscript or Genwiz
大概200 美元 |
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b**********8
发帖数: 349 | 16 从别人那里要了点带flag标签的pcDNA3.1质粒，有map，看附件，插入的FLAG序列带
stop codon，是不是只能在KpnI上游插入target gene coding sequence了，而且
要把stop codon去掉？ |
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e****s
发帖数: 1125 | 18 试试看纯化和浓缩质粒的小柱子，把5ml LB浓缩到5-10ul,然后转化。
不行的话，你就只能重新要了。 |
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p******b
发帖数: 379 | 19 好像BL21不适合用于质粒扩增， 一般表达才用BL21 |
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e****s
发帖数: 1125 | 20 其实大部分质粒没问题。我就遇见过一个BL21不行的pMal。 |
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t**********a
发帖数: 14 | 21 跟别人要质粒，发了email对方没有回信。是不想给吗？
我是否该再发一次？ |
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c**i
发帖数: 265 | 22 今天早上收到一封邮件问我质粒还要不要了，一查，原来是一个月前12.3号发信要的
，对方刚刚看到才回，看来是有可能没看到。楼主再发一次吧。 |
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t**********a
发帖数: 14 | 23 发email跟别人要质粒，发了2次emiall, 对方不回复.
我是不是该向对方说明我愿意支付邮寄费，这样会好些。
如果我支付邮费的话，该怎么支付？ |
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a****k
发帖数: 1130 | 24 向别人要质粒或是别的什么都向来是在第一封email里就把自己的fedex account给了。。 |
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t**********a
发帖数: 14 | 25 点在滤纸片上的质粒风干后常温下最长能保存多久？ 注意是常温下。
我想理论上可以永久保存，但是不知会不会产生突变或断裂。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 26 关键是质粒都用错了，那么原来的那片文章是怎么个写出来的？那些结果都怎么来的？ |
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s******s
发帖数: 13035 | 27 人家可以argue没用错，是写materials的人写错了。
看这个质粒的篇幅多大了 |
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n****0
发帖数: 696 | 28 为什么单酶切产物比未酶切的质粒对照跑的快呢？双酶切倒是得到了想要的大小的产物
。谢谢。 |
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y*******i
发帖数: 42 | 30 我没有一次max prep的环状质粒不是2条带的，晕。难道我一次也没提好过？？？ |
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n****0
发帖数: 696 | 31 是啊，按说是环状没被切跑的快啊，我以前做的也是这样的。可是这次我的结果是有一
条非常非常浅的线状大小的条带（可能质粒没提好断开了），还有一条或多条（有点
smear的感觉）跑的很慢的带，但是没有超螺旋那条带（应该跑的比线性的快才对），
这怎么回事呢？我只是做个酶切确定下自己的构建，双酶切倒是也有我的那个大小的片
段。不知道碍不碍事啊？之前subcloning的时候已经sequence过了，再克隆到donor
vector时就不用再sequence了吧？ |
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z*******6
发帖数: 679 | 32 为啥不贴张图上来看看。。。感觉就是miniprep没做好吧，我没做好的时候就是smear
。。。以前我都会从新做一次就好了。。。
保险起见都会sequence，主要是现在sequence太方面，要是以前手动测序这种情况就不
用sequence了。。。
所以我觉得我会从新做质粒，仅个人建议，以前我做克隆的时候经常会遇到诡异的问题
，但是绝大部分重做一次就没事了。。。我总觉得分子和微生物学方面很多东西其实我
们现在根本不明白是怎么回事，只知道简单的使用。。。 |
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g*r
发帖数: 2116 | 33 感觉你的质粒提的不纯 估计有蛋白污染 吸的时候是不是黏糊糊的感觉？
测个OD看看吧 |
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g*****n
发帖数: 250 | 34 你如果用Qiagen kit提的，不可能有蛋白污染。倒可能，你上柱的样太浓，带来细菌
DNA污染，影响电泳游动。从图上看，更大的可能性是质粒nicked。 |
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s******s
发帖数: 13035 | 35 你phenol抽一下。
btw，还有个可能是你的质粒复制的时候喜欢环套环，变成二聚三聚一类的，
所以看着大了 |
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g***s
发帖数: 30 | 37 我在蛋白PA 的c-term接了个GFP， 得到PA-GFP， 转染果蝇细胞系Kc,用GFP作对照，可
以看到，control组形态正常，圆形。PA-GFP组细胞像长出了触角。PA可能是一个
transporter，没听说与细胞骨架有关系。各位认为一般什么样的基因可能会引起类似
的变化？ 或者，有没有可能是我的质粒质量不好，引起细胞的应激反应？？ |
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g*******e
发帖数: 156 | 38 请问谁有yeast 2-um质粒
可不可以给寄点？
谢谢！ |
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y******y
发帖数: 3 | 39 大家好，有一个问题请教大家，如何使用addgene购买质粒，需要通过学校的MTA吗？具
体的过程是什么？谢谢！ |
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s*****u
发帖数: 407 | 40 怎么会克隆的时候把质粒的5‘和3’倒过来，请教牛牛们解惑，为了这个好几天没有睡
好觉了，thx！ |
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b****r
发帖数: 17995 | 41 据说质粒有时候会和人染色体一样倒位，不知道这么小的片段是不是也可能这样
如果不是core promoter，顺序很多也不重要 |
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s*****u
发帖数: 407 | 43 质粒的lab给的序列说是reversed，没有说是reverse and complementary，然后联系他
们的人，一直都是没有解释这个问题，所以困惑了好一段。
祝大家research都顺顺利利！ |
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m****M
发帖数: 360 | 44 非常感谢提供这么个信息。有RNA提取的柱子吗？如果有的话，RNA样品中也不含洗液吗
？我先定个质粒的看看。 |
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t****t
发帖数: 86 | 45 请问您这评论有conflict of interest吗？
楼主虽然写的是转化(transformation),但说的应该是转染(transfection).这个kit提
的质粒能用来做转染吗？产品介绍上反正是没说。 |
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L*****t
发帖数: 56 | 46 Amp抗型的bla基因是分泌型beta内酰胺酶, Studier的文章里提到过菌液OD=0.2-0.3的
时候培养基里的Amp已经没有了，补加也会马上被消化掉，唯一的办法是把菌液离心后
用新培养基重旋，否则肯定会掉质粒。 |
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d****h
发帖数: 46 | 47 不知扩增的目的是什么？
如果是要插入大的片段的话，可以用一对反向无重叠反向primer，一步PCR扩增整个
plasmid。如果是点突变，可以把突变位点加入到这对primer两端。不需要切质粒。
---forward primer
5‘-----------------------------------------------
3’-----------------------------------------------
reverse---- |
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b*******n
发帖数: 38 | 48 实验中要测试ATF/CREB family members对一个promoter的影响，版上的达人能否告知
哪个实验室我能要到几个主要ATF/CREB family members的表达质粒呢？多谢！ |
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a*******a
发帖数: 1240 | 49 我也想问同样的问题。
一个质粒，如何同时表达两个ORF？ |
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g*****3
发帖数: 5 | 50 看过的文献里用电转化。但这里没有电转仪。
谁实际做过35 kb及以上的质粒（连接产物）化学转化导入普通大肠杆菌菌株如TOP10？
是否可行？
谢谢。 |
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