g***j 发帖数: 40861 | 1 正在构建一个质粒,挺简单,就是把这个质粒上的gfp换成同样大小的dsRed,质粒的骨
干不变。
连接,转化以后,有不少菌落。
第一天挑了4个菌落,长在LB里,amp浓度100ug/ml.结果只长了一个。试剂盒提质粒,
solution3 以后离心,结果上清非常浑浊,白色的东西离不下去。继续做,提完,跑胶
,没质粒。
第二天,又挑了4个菌落,长在LB里,amp浓度50ug/ml。4个都长了,试剂盒提质粒。同
样,solution3 以后离心,结果上清非常浑浊,白色的东西离不下去。继续做,提完,
跑胶,都有质粒。质粒大小和原质粒dimer 一样大。单切,跑胶,3个切不开,1个切开
后和原质粒单切大小一样。更加确定是形成dimer了。
问题一,为啥会形成dimer呢?
问题二,我是重新做连接,转化呢?还是把那个能切开的切一下,然后稀释,连接,再
转化呢? |
e****s 发帖数: 1125 | 2 觉得你提的更可能是Trash,不是你的目标质粒。
重新来吧。
【在 g***j 的大作中提到】 : 正在构建一个质粒,挺简单,就是把这个质粒上的gfp换成同样大小的dsRed,质粒的骨 : 干不变。 : 连接,转化以后,有不少菌落。 : 第一天挑了4个菌落,长在LB里,amp浓度100ug/ml.结果只长了一个。试剂盒提质粒, : solution3 以后离心,结果上清非常浑浊,白色的东西离不下去。继续做,提完,跑胶 : ,没质粒。 : 第二天,又挑了4个菌落,长在LB里,amp浓度50ug/ml。4个都长了,试剂盒提质粒。同 : 样,solution3 以后离心,结果上清非常浑浊,白色的东西离不下去。继续做,提完, : 跑胶,都有质粒。质粒大小和原质粒dimer 一样大。单切,跑胶,3个切不开,1个切开 : 后和原质粒单切大小一样。更加确定是形成dimer了。
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g***j 发帖数: 40861 | 3 谢谢,是要重做。
另外我想问是不是dimer既有可能是形成一个大环,也有可能形成两个小环套在一起?
不过要是后者,感觉没法一直复制了啊。
【在 e****s 的大作中提到】 : 觉得你提的更可能是Trash,不是你的目标质粒。 : 重新来吧。
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