j***y
发帖数: 1640 | 1 俺好不容易从比别人那里讨来了一个vector, 一看是滴在 一个小圆形的 filter
paper 上的， 俺是新手误以为该质粒是在Ecoli 菌内， 就把它放到 5ml LB 管内一小
时后， 取50 uL 上清 涂平板， 过夜什么都没有涨出来。 俺才意识到，别人寄过来的
是质粒， 不是菌株。
俺把这小块滤纸融在5mL LB 里面了， 这个还有补救的办法么？ |
y****i
发帖数: 2194 | 2 直接拿1ml出来 加competent cell转化涂板
【在 j***y 的大作中提到】
: 俺好不容易从比别人那里讨来了一个vector, 一看是滴在 一个小圆形的 filter
: paper 上的， 俺是新手误以为该质粒是在Ecoli 菌内， 就把它放到 5ml LB 管内一小
: 时后， 取50 uL 上清 涂平板， 过夜什么都没有涨出来。 俺才意识到，别人寄过来的
: 是质粒， 不是菌株。
: 俺把这小块滤纸融在5mL LB 里面了， 这个还有补救的办法么？
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a********k
发帖数: 2273 | 3 should be 1-5ul
【在 y****i 的大作中提到】
: 直接拿1ml出来 加competent cell转化涂板
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j***y
发帖数: 1640 | 4 1-5 uL 是不是太少了？
【在 a********k 的大作中提到】
: should be 1-5ul
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y****i
发帖数: 2194 | 5 我是说直接扔细菌到LB里面去直接涂板 不是说取1ml转化。。。
【在 a********k 的大作中提到】
: should be 1-5ul
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d********m
发帖数: 3662 | |
j***y
发帖数: 1640 | 7 唉， 俺Lab以前是不做clone这些东西的，分子生物基本靠自摸，呵呵
【在 d********m 的大作中提到】
: LZ是怎么混到开国大老的？
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m****n
发帖数: 91 | 8 笑死了，哈哈哈哈哈
【在 j***y 的大作中提到】
: 唉， 俺Lab以前是不做clone这些东西的，分子生物基本靠自摸，呵呵
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e****s
发帖数: 1125 | 9 试试看纯化和浓缩质粒的小柱子，把5ml LB浓缩到5-10ul,然后转化。
不行的话，你就只能重新要了。
【在 j***y 的大作中提到】
: 唉， 俺Lab以前是不做clone这些东西的，分子生物基本靠自摸，呵呵
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I*****y
发帖数: 6402 | 10 你不会是在巴黎吧？ 我最近ship了一个plasmid，就是这么寄的。哈哈……
【在 j***y 的大作中提到】
: 唉， 俺Lab以前是不做clone这些东西的，分子生物基本靠自摸，呵呵
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p******b
发帖数: 379 | 11 好像BL21不适合用于质粒扩增， 一般表达才用BL21 |
y**u
发帖数: 7459 | 12 。。。我就一个都没有做过
【在 m****n 的大作中提到】
: 笑死了，哈哈哈哈哈
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e****s
发帖数: 1125 | 13 其实大部分质粒没问题。我就遇见过一个BL21不行的pMal。
【在 p******b 的大作中提到】
: 好像BL21不适合用于质粒扩增， 一般表达才用BL21
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s*****g
发帖数: 7857 | |
r****r
发帖数: 36 | 15 這用一般heat shock的應該是沒救了，至少要用電的。 |
j***y
发帖数: 1640 | 16 是的
俺后来用 stratagene mutagenesis kit 带来的 XL1-blue heat shock 转化什么都没
有涨，再改用用电转化 就有蓝色菌株在 X-gal板涨出来 (vector 是带 Lacz alpha的）
【在 r****r 的大作中提到】
: 這用一般heat shock的應該是沒救了，至少要用電的。
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s*****g
发帖数: 7857 | 17 和你一起开心。电转的条件是什么啊？用那个公司的仪器？以前只做动物细胞的电转。
没有做过competent cell的点转。。。 |
