C*******e
发帖数: 4348 | 1 借楼说个题外话
用质粒做模板，做标准曲线的话
应该用单酶切、线性化的质粒
因为不cDNA模板都是线性的
环状的模板扩增跟线性有所不同
（不过我不是做这个动力学的。。。。无法详细说明）
所以建议还是质粒线性化再用 |
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H*******i
发帖数: 196 | 2 我意思就是要看具体做什么灵活选择，而不是单纯比较策略好坏
比如构建A+B+C
其中A有x个 B有y个 C有Z个，我会在连接位置给三个酶切位点（个人觉得就算少量突
变也是值得的）。
如果是关键区域的组合，比如A-B中间是确定的序列，我会选择BsaI
如果是把一个片段加到所有质粒里（比如加tag），我会用Gibson assembly/CPEC（根
据插入片段长度，原质粒序列复杂度，当然也可以选择overlap PCR+酶切连接做）
构建新质粒，从时间上来说各个方法都差不多，因为Gibson对于多片段连接相对容易，
所以应该是最快的（不过片段太多也需要先PCR连起来），CPEC我只用两片段连接（有
时需要一次额外的overlapping PCR），酶切连接（三片段最多了）大概比CPEC多用1.
5h时间。 不过无论哪种方法，拿到引物后基本当天都能做完。。所以一般只考虑成功
率和后续实验设计问题。 |
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t******k
发帖数: 599 | 3 主要是最近想做个体外实验，利用cre-flox来标记细胞。一个方法是把floxed的质粒转
到本身有promoter-creert2的细胞里，另外一个方法是把cre质粒转到本身带有floxed-
reporter的细胞里面去，再有就是把两种质粒一起转到wt细胞里。然后就想到这个有
promoter-creert2的细胞不加tamoxifen是不是也可以起作用了。 |
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H****N
发帖数: 997 | 4 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: mingxiaot (laoghost), 信区: Military
标 题: 崔永元又在转基因上显宝，特发介绍转基因。原创啊
关键字: 转基因,崔永元
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Jun 19 15:41:29 2014, 美东)
算科普，但都是十年前的知识，这十多年转基因的技术发展很快，我说的一些问题应该
可以有改进了。
要获得转基因植物需要两个技术：一是植物组织培养，二是外源基因导入技术。
首先，你没法扛着注射器给老榆树疙瘩扎针吧？所以要转基因得先用激素让植物组织生
长得比较松散。对这种松散的植物组织，你可以大致理解为皮薄，外源基因容易进入。
但这种松散的组织有个大问题，就是它们还能不能重新生成完整的植物。你做半天转基
因，不能拿一堆开不了花结不了果的糟面团子去喂猪吧。所以植物组织培养中最考人的
就是所谓的植物再生。这不奇怪，世间任何事物都是破坏容易建设难，造谣容易辟谣难。
有网友说：美国只做玉米转基因不做小麦转基因，因为小麦是美国佬的主食，他们怕祸
害自己所以不做小麦转基因。但在我看来，更主要的原因恐怕还... 阅读全帖 |
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L****T
发帖数: 169 | 5 1，把shRNA质粒送去测一下序列（国内公司一般测不出来不收钱），很可能在你把质粒
带回国重新转化抽质粒过程搞混了。
2，另外，你puromycin杀了几天？有些shRNA筛选时间长了虽然细胞还耐受puromycin但
U6会被silence。
3，自己重新再做几个shRNA呗，国内引物合成便宜。 |
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s******s
发帖数: 13035 | 6 有点疑点，不过并不是完全不符合逻辑。
有些实验室比较变态，就是material 和 method 里面给你漏点细节，不让别人做。
这点特别恶心。当然，这个领域更恶心的有的是，包括某大牛实验室出来的质粒
里面插入特殊二级结构不让你测序，包括不愿意给别人质粒又被催急了，寄送假
质粒，错误序列，等等，不一而足。
至于十几个人重复300多遍很正常，有了效果，大家都用这个方法做，不一定是
为了重复，可能就是接下去做其他的实验。 |
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p**********s
发帖数: 29 | 7 1. 张生家在挪威到底是不是独立PI?
很多人都认为张在挪威的group leader职位是独立PI，其实稍微细想一下就知道不合常
理。张一直说自己夫妇为Moser拿诺奖做出了重大贡献，然后关掉自己的挪威的实验室
回中国做研究。只要看看张在清华为了一个所谓“2025年的诺奖”与鲁白之间的争斗，
就能反推出来，如果他真的在挪威是独立PI，哪里能容忍Moser夫妇利用他和叶的贡献
去拿2014年的诺奖？恐怕连杀掉Moser的心都有了。所以，所谓独立PI，所谓为诺奖做
贡献，一多半是张生家在为自己脸上贴金。那么，这个group leader究竟是个什么职位
？只要对欧系和美系的科研系统有点了解，就知道这个职位其实就是美国的research
professor级别，也有的地方叫scientist。
2. 鲁白和张生家到底谁先抢谁？
很明显，这两人都在抢，只不过是一个人先动手抢别人的，另一个是后动手要抢回来。
两人互相指责对方抢，都没有说错，但明显其中一个是在混淆视听，硬把自己先动手辩
护成是自卫。那么关键的证据在哪里呢？就在谢灿和鲁白手里。三方公认的一点是张生
家与鲁
白学生去见谢灿是张谢二人... 阅读全帖 |
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b****r
发帖数: 17995 | 8 第二条严重不同意
同事之间给个质粒算啥？我相信板上很多人都有过找同事要质粒的事情。质粒这东西大
家都知道，不是未知序列的基因的话，自己做也根本不费多少功夫，最多3，5周到顶了
。同单位同事，又有个认识的有点背景的人带路介绍，拿不到其实反而才奇怪 |
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T*****e
发帖数: 247 | 9 最近一段时间似乎质量非常差。所有的结果都是no priming。我的质粒浓度用nanodrop
测过，也根据他们的要求调整了。还是大批大批的no priming。
要知道，primer是在质粒上的universal primer。而且因为怀疑我的primer有问题，是
让genewiz加的primer。他们如果不会加错，这些primer位点又是在life technologies
topo clone试剂盒直接提供的质粒上的，也不会错。那我只能怀疑是genewiz的问题了
。特别是测错的地方大部分都是把G读错。让我怀疑他们的机器最近出了问题。
有没有哪位最近一两周内碰到相似的问题？还是我自己多心了？ |
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T*****e
发帖数: 247 | 10 最近一段时间似乎质量非常差。所有的结果都是no priming。我的质粒浓度用nanodrop
测过，也根据他们的要求调整了。还是大批大批的no priming。
要知道，primer是在质粒上的universal primer。而且因为怀疑我的primer有问题，是
让genewiz加的primer。他们如果不会加错，这些primer位点又是在life technologies
topo clone试剂盒直接提供的质粒上的，也不会错。那我只能怀疑是genewiz的问题了
。特别是测错的地方大部分都是把G读错。让我怀疑他们的机器最近出了问题。
有没有哪位最近一两周内碰到相似的问题？还是我自己多心了？ |
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B***v
发帖数: 113 | 11 Transformation的时候，一个E.coli只能吃掉一个质粒吗？原理是什么？
我如果transfrom一个质粒library，一个E.coli会不会吞掉>=2个质粒？打算做个
screen |
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B***v
发帖数: 113 | 12 Transformation的时候，一个E.coli只能吃掉一个质粒吗？原理是什么？
我如果transfrom一个质粒library，一个E.coli会不会吞掉>=2个质粒？打算做个
screen |
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l***y
发帖数: 638 | 13 去读当时签的MTA吧，deposit质粒和从addgene弄别人质粒肯定都签了MTA的，他家本身
的格式MTA好像规定的还可以，但是broad的质粒额外要签一个他们自己搞的，记得好像
限制非常多 |
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发帖数: 1 | 14 在做人的干细胞基因组编辑的时候，由于效率非常的低，我试了一下同时给细胞提供两
个模板质粒，分别带有不同的颜色，比如绿色和红色，然后用guideRNA和Cas9引入双链
断裂，通过同源重组，两份模板分别进入两个allelle，这样通过流式细胞筛选理论上
就能得到homozygous编辑了的细胞。大家觉得这个idea能够发一篇什么样的文章？为了
排除模板质粒的随机整合，我打算在质粒的骨架上引入一个蓝色荧光蛋白，那么每次我
做流式细胞筛选的时候，可以排除掉带有蓝色光的细胞，而只收集带有红光和绿光的细
胞。欢迎大家给点建议，我觉得由于在实际操作过程中，让细胞进行了多次的荧光紫外
线照射，富集细胞的时候照三次，然后在移除筛选荧光而只留下所想要的突变的时候，
还要做一次筛选，又要进行两次荧光照射，感觉这样得到的细胞，质量不可控。 |
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s*****i
发帖数: 315 | 15 又做了一次，没有成功。我认识有个公司的人（CRISPR高手）也在试，试了两次没有成
功，我们分别独立设计的质粒
质粒是 pcDNA3.1-Flag-SV40NLS-NgAgo. C端没有tag， N端跟韩paper的primer序列完
全一样
用了IDT的5'phopspho-G10，用了韩的条件，也用了号称可以共转oligo和plasmid DNA非
常牛的mirus x2
转了1/10的GFP plasmid，FACS的转染效率 Lipo 2000 40%~50%， X2 转染效率 90%
拿到了韩放到 addgene的质粒
下周再试一次 |
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发帖数: 1 | 16 不知道大家发现没有，HAN文章里的质粒与ADDGENE里是不一样的。
对于Supplementary Figure 4第一张图，想知道他是用的什么抗体。
因为ADDGENE 里面的NLS-NGAGO质粒是没有标签的。
而且文章里面说nls-ngago质粒的骨架是pcDNA3.1，但是ADDGENE里面的骨架是pEGFP-N1
。 |
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发帖数: 1 | 17 发信人: samalli (小米), 信区: Biology
标 题: Re: 韩春雨的NgAgo效率怎么样？有人试过么？
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Jun 10 21:21:26 2016, 美东)
又做了一次，没有成功。我认识有个公司的人（CRISPR高手）也在试，试了两次没有成
功，我们分别独立设计的质粒
质粒是 pcDNA3.1-Flag-SV40NLS-NgAgo. C端没有tag， N端跟韩paper的primer序列完
全一样
用了IDT的5'phopspho-G10，用了韩的条件，也用了号称可以共转oligo和plasmid DNA非
常牛的mirus x2
转了1/10的GFP plasmid，FACS的转染效率 Lipo 2000 40%~50%， X2 转染效率 90%
拿到了韩放到 addgene的质粒
下周再试一次 |
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g*****n
发帖数: 250 | 18 韩春雨的论文这么火，我这个外行也忍不住要拜读一下。外行就看图识字，直接奔图版
。可没想到，第一张图（Fig. 1a) 就给我一棍。图标说“(a) Electrophoresis of
GST-NgAgo expressed in E. coli, purified by Sephrose-4B, digested by protein
kinase K, and treated with the indicated exonucleases.” 这显然是用激酶磷酸
化的蛋白了（虽然“digested"这个词怪点）。可图上是“Single Strand （DNA）
molecular weight marker”。？？？ 只好到文字里看看。啊，原来是作者粗心，审稿
粗心，编辑粗心。
第一张图算是连猜带蒙过去了。看第二张图 (Fig. 1b) 吧，更糊涂了。一个quide在,
只切质粒的一条链 (OC)。只有两个quide同时在时, 才切质粒的两条链 (LIN)。可作者
在摘要里声称一个quide就能切质粒的两条链啊。看来我不仅是外行，而且又笨。算了
，不往下看了。 |
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g*****n
发帖数: 250 | 19 回来看Figure 2。NgAgo的表达质粒和guide一起转染到细胞里，48小时后提纯NgAgo蛋
白，然后走胶测guide （Figure 2a)。转染100-300ng guide，转染率不会是100%，回
收率也不会是100%，经过这么多的步骤还能看到guide?
更惊人的是，先转染质粒，12-24小时后再转染guide (Figure 2b)。这些guide 有多少
能恰好进到含有质粒的细胞里。经过这么多的步骤还能看到guide? |
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发帖数: 1 | 20 你说：”其实从他在这听说了C端带tag Ago没活性，做贼心虚把不带tag的Ago质粒，而
不是自己
用来做实验的Ago质粒发到Addgene，谜底就已经揭晓了。。。坐等看结局吧“
他给300个实验室的质粒不是原件？ |
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发帖数: 1 | 21 质疑是科学研究不断前进的动力
作者：熊丙奇
2016-08-01北京青年报
河北科技大学副教授韩春雨震惊全球学术界的新基因编辑技术NgAgo-gDNA，
正遭遇越来越多的质疑。从5月2日他的论文发布在《自然-生物技术》网络版之
后，到现在为止，全球仍没有一家实验室对外宣布，能够完全成功重复韩春雨的
实验。现在已有多国科学家要求《自然-生物技术》介入调查，并公开韩春雨实
验中的所有原始数据和实验条件。
一项新技术诞生，同行对其可行性进行重复实验，并根据实验效果对技术进
行质疑，这是太正常不过的事。这样的质疑在科学研究中屡见不鲜，有的质疑推
进了技术的完善、进步，而有的质疑，则发现研究者学术造假、伪造数据，不管
是哪一种结果，这都对学术研究有利无弊。前者推进科学研究进步，后者则纯净
学术研究的环境。
韩春雨和其所在学校应该有直面质疑的常识和勇气。据报道，面对质疑，韩
春雨把质粒信息上传到一家全球科学家质粒共享的非盈利组织——addgene，在
协和讲座发放质粒，“对自己实验的重复性还是很有胆气的”，而之前，他还针
对方舟子的质疑文章，进行了较为详细的回应，强调NgAgo系统对污染特别敏感，... 阅读全帖 |
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x****6
发帖数: 4339 | 22 “ 这篇文章最恶心的地方就是注射受精卵同时用了Cas9的质粒和Cas9 蛋白”
多加一个Cas9来源等于提高其表达水平，如果这都能make a huge difference,那本来
就证明这个系统不可靠。
蛋白在细胞里的寿命和从质粒上表达的多少是有很大波动空间的，纯质粒表达或者纯蛋
白注射在细胞里的浓度方差应该是不小的，那么也存在off target的风险。
比如两个一起用造成1000个突变和单个使用造成500个突变，在临床上都是不可靠。 |
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发帖数: 1 | 23 我一直用Clontech In-fusion，曾经一次将三个GFP tandem链接到一个10kb载体，一次
成功。In-fusion效率几乎100%，以至于我现在克隆所有片段都是用Phusion PCR出来，
In-fusion后挑一个菌落抽质粒直接测序。
用Infusion的时候最重要的两点是overlapping区域一定要是15bp，另外就是insertion
和vector的比例。如果你是克隆到8kb载体中，其他3kb,1kb,2kb与8kb的molar ratio应
该为1：1：1：0.5。你可以用clontech的infusion MOLAR ratio calculator。可惜的
是clontech被TaKaRa买了，网站变得奇差。你可以自己算。8kb vector以为200ng为准
，那么3kb是150ng，1kb是50ng，2kb是100ng。建议所有片段PCR，然后跑胶纯化，
nanodrop测浓度。如果浓度不高，那么可以整体scale down，但是ratio一定要是1：1
：1：0.5。
等有了8kb这个克隆，你就可以直接PCR中间3kb-1kb-2kb，然后... 阅读全帖 |
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J******y
发帖数: 1442 | 24 植物细胞的转染不一样的，要用农杆菌介导，感染愈伤组织，非常困难。而且这种质粒
普通细菌不能复制，更何况是被线性化的。
不同物种间的基因交流是概率非常低的一件事情，你说的这种“胃里的细菌接受了质粒
”不能说完全没有可能，但是概率低到可以忽略。更何况任何食物的DNA都有这种可能
，和转不转基因没有关系。
，结
全没 |
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c***s
发帖数: 70028 | 25 昨天，一个结合“无人机”和“消雾霾”两大高端概念的“消雾霾无人机”在网络上再度热传。之所以“再度”，是因为去年差不多这个时候，这个“柔翼无人机”新产品就已经出现。它到底是什么玩意儿？能不能消雾霾呢？
网上是怎么说的？
新型无人机携带催化剂消雾
[原文回放]
两会期间（这个时间让人容易误以为就是前几天，其实是去年两会期间，编者注）全国人大代表、中航工业航宇公司董事长马永胜透露说，由中航工业研制的新型柔翼无人机即将在机场、港口进行首轮消雾试验。据介绍，这种柔翼无人机是我国首批翼伞无人机，由中航工业下属航宇宏伟航空器公司自主研发，最多可搭载700公斤消雾催化剂，飞行高度可达5000米，在5公里范围内进行消雾作业。
不少媒体评价该机“可有效消除雾霾”，“可有效遏制和消除雾霾天气带来的危害”。
这是款什么无人机？
“降落伞”能让它载重更大
从图片上看，这款柔翼无人机最吸引人的便是飞机上空的“降落伞”。南京航空航天大学航空宇航学院郑祥明副教授告诉记者，飞机上的“降落伞”其实并不是普通的“降落伞”，它有一定的厚度，至少是双层的。这样的结构有助于提高无人机的升力。
“在‘降落伞’的翼型厚度的‘帮助’下... 阅读全帖 |
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c***s
发帖数: 70028 | 26 基因双螺旋结构CG模型图。（图片源于网络）
中国是全世界最大的农用和兽用粘菌素生产国和使用国之一。在中国进行的研究中，从2011年到2014年，研究人员从4个省份的屠宰猪体内以及广州市30个露天市场和27个超市销售的猪肉和鸡肉中采集了细菌样本。
11月20日报道 英媒称，研究人员11月18日说，在从中国人和猪体内采集的细菌（包括具有传染性的细菌样本）中，发现了一种能对终极抗生素产生强耐药性的新基因。
路透社11月18日报道称，科学家称这一发现“令人担忧”，并呼吁紧急限制多粘菌素的使用。多粘菌素是一种包含药用粘菌素并在畜牧业中广泛使用的抗生素。英国伯明翰大学微生物学教授劳拉·皮多克说：“所有多粘菌素的使用都必须尽快降至最低限度，并停止一切不必要的使用。”
以中国华南农业大学的刘华（音）为首的研究人员，在英国《柳叶刀·传染病》杂志上发表了他们的研究成果。他们在质粒上发现了这种名为mcr-1的基因。质粒是容易被复制并在不同细菌间转移的可移动DNA。
他们说，这说明该基因具有在细菌种群间传播和变化的“令人担忧的潜力”。
这个研究团队已发现了mcr-1基因在常见细菌之间转移的证据，比如在引发尿道... 阅读全帖 |
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m********5
发帖数: 17667 | 27 全国人大代表、中航工业航宇公司董事长马永胜8日在北京透露，为有效遏制和消除雾
霾天气带来的危害，中航工业集团旗下的中航工业航宇公司研制出可以消除雾霾的柔翼
无人机，该机于2月26日在襄北试验基地试飞成功。
马永胜描述，在测试中，柔翼无人机通过汽车拖曳起飞，人工遥控控制飞行，飞翔灵活
，落地平稳，证明了该机良好的操控性，同时也证明新型人工影响天气作业平台消雾系
统试飞成功。
马永胜介绍，柔翼无人机具备消除冷雾和暖雾两项功能。该产品通过将盐、尿素等吸湿
质粒安装在柔翼无人机机舱内，飞行到指定雾区，播撒盐、尿素等吸湿质粒作催化剂，
产生大量凝结核，水汽在凝结核上凝结长成大水滴，雾滴会蒸发并在大水滴上凝结，使
暧雾消失；同时还能将干冰、液化丙烷等催化剂播撒到雾中，产生大量冰晶，它们通过
贝吉龙冰水转化过程，夺取原雾滴的水分、雾滴便蒸发而冰晶不断长大降落地面，使冷
雾消失。
马永胜指出，柔翼无人机在新型动力冲压翼伞、自主导航飞控和发射技术的设计上有多
个创新和突破，它的飞行高度已达5000米，具有巡航时间长、范围广、体积小、重量轻
、使用便捷等优点。目前国内尚无同类产品。 |
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a******s
发帖数: 267 | 28 这两件事没有可比性，你说得是一家制药公司，为利益驱动，完全可能而且也有条件干
得出这种事，因为这药是他自己设计的。
而利用农杆菌质粒转化植株是现代生物学实验室的常规技术，到处都在用，快30年了，
没啥秘密可言。目前市场上两种主要的转基因蛋白，BT蛋白和抗除草剂蛋白的机理最早
也是基础的生物学实验室发现的，也有30多年了，关于它们的研究论文非常的多，而且
发表这些论文的研究机构都是互相独立的，散布在全世界，通常都是各个大学的实验室。
这么多互相独立的研究机构的研究结果互相印证，时间又这么长，是可以排除数据造假
或者有意掩盖副作用的担心的。
其实BT蛋白和抗除草剂蛋白二十多年前我读本科时已经是生物系教科书上的内容了。
孟山都只是利用了这些已经成为公共知识的研究成果把蛋白相应的基因用农杆菌质粒转
入农作物中进行产业化卖钱而已。他或许有动机，但是很难有条件掩盖什么。 |
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s******y
发帖数: 17729 | 29 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: salvinorin (就这样吧), 信区: Biology
标 题: 来自学生的倾诉：我所经历的清华大学张生家事件 (zz)
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Nov 10 12:23:23 2015, 美东)
◇◇新语丝(www.xys.org)(xys8.dxiong.com)(xys.ebookdiy.com)◇◇
来自学生的倾诉：我所经历的清华大学张生家事件
尊敬的老师，您好！
您不认识我，但这次我决定冒昧打扰您。我是清华大学张生家老师的学生龙
晓阳，也是最近因为“抢发”风波争议很大的磁遗传学文章的第一作者。这一系
列争端实质上是鲁白老师作为与张生家老师独立发起的磁遗传学课题不相关的第
三者，在8月份参与并企图篡夺我们实验室的研究成果，而单方面挑起的争端。
鲁老师在要求通讯作者被拒绝后，使张老师的合作者北大谢灿老师突然倒戈，并
重新在相同的课题上合作，在他们自己实验室快速复制和我们一样的实验结果；
同时，他利用强大的行政人脉资源影响学术委员会和人事处，撕毁了张老师的劳
动合同。如果您花十分钟的时间阅读下面的经过... 阅读全帖 |
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f**********r
发帖数: 18251 | 30 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: salvinorin (就这样吧), 信区: Biology
标 题: 来自学生的倾诉：我所经历的清华大学张生家事件 (zz)
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Nov 10 12:23:23 2015, 美东)
◇◇新语丝(www.xys.org)(xys8.dxiong.com)(xys.ebookdiy.com)◇◇
来自学生的倾诉：我所经历的清华大学张生家事件
尊敬的老师，您好！
您不认识我，但这次我决定冒昧打扰您。我是清华大学张生家老师的学生龙
晓阳，也是最近因为“抢发”风波争议很大的磁遗传学文章的第一作者。这一系
列争端实质上是鲁白老师作为与张生家老师独立发起的磁遗传学课题不相关的第
三者，在8月份参与并企图篡夺我们实验室的研究成果，而单方面挑起的争端。
鲁老师在要求通讯作者被拒绝后，使张老师的合作者北大谢灿老师突然倒戈，并
重新在相同的课题上合作，在他们自己实验室快速复制和我们一样的实验结果；
同时，他利用强大的行政人脉资源影响学术委员会和人事处，撕毁了张老师的劳
动合同。如果您花十分钟的时间阅读下面的经过... 阅读全帖 |
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d***o
发帖数: 7006 | 31 核心提示：中国是全世界最大的农用和兽用粘菌素生产国和使用国之一。在中国进行的
研究中，从2011年到2014年，研究人员从4个省份的屠宰猪体内以及广州市30个露天市
场和27个超市销售的猪肉和鸡肉中采集了细菌样本。
11月20日报道 英媒称，研究人员11月18日说，在从中国人和猪体内采集的细菌（
包括具有传染性的细菌样本）中，发现了一种能对终极抗生素产生强耐药性的新基因。
路透社11月18日报道称，科学家称这一发现“令人担忧”，并呼吁紧急限制多粘菌
素的使用。多粘菌素是一种包含药用粘菌素并在畜牧业中广泛使用的抗生素。英国伯明
翰大学微生物学教授劳拉·皮多克说：“所有多粘菌素的使用都必须尽快降至最低限度
，并停止一切不必要的使用。”
以中国华南农业大学的刘华（音）为首的研究人员，在英国《柳叶刀·传染病》杂
志上发表了他们的研究成果。他们在质粒上发现了这种名为mcr-1的基因。质粒是容易
被复制并在不同细菌间转移的可移动DNA。
他们说，这说明该基因具有在细菌种群间传播和变化的“令人担忧的潜力”。
这个研究团队已发现了mcr-1基因在常见细菌之间转移的证据，比如在引发尿道及
其他类型感染的... 阅读全帖 |
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D**s
发帖数: 6361 | 32 来源：科学网丁广进博客、BioArt微信公众号
引言：《韩非子·喻老》一文中曾有言曰：“楚庄王莅政三年，无令发，无政为也。右
司马御座而与王隐曰：“有鸟止南方之阜，三年不翅，不飞不鸣，嘿然无声，此为何名
？”王曰：“三年不翅，将以长羽翼；不飞不鸣，将以观民则。虽无飞，飞必冲天；虽
无鸣，鸣必惊人。”
5月2日，Nature系列顶级刊物Nature Biotechnology在线发表了来自河北科技大学生物
科学与工程学院青年教师韩春雨副教授题为“DNA-guided genome editing using the
Natronobacterium gregoryi Argonaute”的重大原创性成果。文章甫一发表，瞬间刷
爆微信朋友圈，这里面有两层原因，其一，该项新的基因编辑手段对目前热火朝天的
CAS9技术提出了挑战；其二，领导该项研究的青年老师所在的单位和个人基本上籍籍无
名（抱歉，请允许我用了这个词）。
“不鸣则已，一鸣惊人”韩春雨老师在Nature？Biotech上发表诺奖级原创成果
Nature Biotechnology文章截图
小编先引用河北科技大学生物科学与工程学院官... 阅读全帖 |
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f**o
发帖数: 12685 | 33 应该有人吼出科研工作者心中的苦闷了！ 精选
已有 11665 次阅读 2016-5-19 00:49 |系统分类:观点评述
说明：本文可能有令各位感觉不适的内容，读前要慎重。本人只从事过生物医学基础科
研，对物理、化学等其他基础学科状况并不甚了解，不知道本文观点是否适用。本文一
开始题目是：《应该有人吼出（生物）科研工作者心中的苦闷了！》后来不同的人或评
论或私信告诉我他们的学科也有这种状况，因此就把生物二字去掉了。
##############################################################
前言：本文并非是为了灌输负能量，而是希望指出现行科研模式的一些弊端，引起有关
方面的重视，仅属一家之言。并非为了严格论述证明某件事，只希望读到的朋友体会一
下自己或身边的人是否也有这类经历，这类感觉，与大家交流一下。另外，很多博友也
指出了数学的重要性。我也想说，数学、计算机、和统计应该是现代自然科学研究人员
的必备技能。然而可惜的是，除了一些顶尖大学，大多数国内985高校的生物系（不知
道其他学科是否也是），仅开设了两个学期的微积分。这对于现代... 阅读全帖 |
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e*******n
发帖数: 4912 | 34 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: evelynlin ((￣.￣)), 信区: Biology
标 题: 韩春雨在985贴吧发言了。
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Jun 29 18:54:46 2016, 美东)
给个链接
zhenglongpai： 在水木社区看的 6-29 17:23
槐北路： 回复 zhenglongpai :我敢把质粒提交到addgen上，在协和讲座发放质粒，对
自己实验的重复性还是很有胆气的。不过您这帖子反而是那几个cris最愿意看到的。6-
29 21:05
欲翻流云舞： 回复 槐北路 :韩老师 6-29 21:11
燕京学社： 回复 槐北路 :韩老师，加油 6-29 21:16
天煞一郎： 回复 槐北路 :韩老师 6-29 21:16
天煞一郎： 回复 槐北路 :韩老师 6-29 21:17
天煞一郎： 回复 槐北路 :韩老师，上一个表情发错了6-29 21:17
天煞一郎： 回复 槐北路 :真的是韩老师吗？ 6-29 21:17
天煞一郎： 回复 槐北路 :韩老师入驻9吧？ 6-29 21:17
卖糖果的莎莎： 评论... 阅读全帖 |
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p*********3
发帖数: 8525 | 35 钱老轮回来讲讲，谁对谁错
方舟子老师：您好。
针对您昨天的文章，韩春雨回应了一些所谓的实验细节，见
http://tieba.baidu.com/p/4645810480?pid=93027569268&cid=0&from=prin#93
027569268，想必您也看到了。
他公布的所谓“高超的实验技巧”，包含三点：一是质疑者的细胞都污染了；
二是要做银染；三是要做GFP敲入（knock－in，KI）实验证明NgAgo可以work。
回应如下：
一，保证实验室的细胞没有支原体污染，不是什么高超的实验技巧，而是一
个正常实验室最基本的操作规范，比如每三个月定期检测支原体污染。
二，银染并不是什么高深的实验，而是使用了几十年的常规技术，按照
protocol配好buffer，把胶扔进去染色，没有人不会做。银染非常灵敏，反应速
度很快，容易出现信号饱和，不适合定量，容易产生假阳性条带。韩春雨的
Nature Biotechnology文章里面测试了50个位点切割基因组，每个都work，无一
例外，效率最低的也有15%（补充数据图5），高的有30%（图4）。这样的效率要
银染才能看到？普通... 阅读全帖 |
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x********e
发帖数: 35261 | 36 好好读一下addgene的分子克隆101。质粒转真核细胞内很快就丢了，哪里可以复制？学
习一下质粒的结构就明白这些了 |
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l*******1
发帖数: 16217 | 37 细菌对抗生素的耐药性就是用过质粒来传播的，质粒是细菌自然进化的一个重要工具， |
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发帖数: 1 | 39 狂犬病毒分四代：第四代转基因狂犬比疫苗最安全，保护率最高。
1. 脑组织疫苗
1.1兔脑组织疫苗 1885年，巴斯德首次用兔脑脊髓制备成狂犬病弱毒苗，并应用于一个
被疯狗咬伤14处的9岁男孩治疗，并取得成功。
1.2 羊脑组织疫苗 1911年，Semple将羊脑组织悬液于37℃，经0.5%~1%酚固定，β-丙
内酯灭活后，制备了Semple疫苗。1925年，Hempt通过补加乙醚处理，进一步保证了
Semple疫苗的无毒性。
新生鼠脑疫苗 1955年，Fuenjalidat和Palacios将狂犬病毒脑内接种3~5
日龄新生鼠制备了新生鼠脑疫苗，过去40多年中，南美洲广泛应用此疫苗。
脑组织疫苗注射次数多，剂量大，抗体产生慢，抗体水平低，含有神经麻痹因子，易引
发变态反应，WHO提出尽快停止使用该疫苗。
2. 禽胚疫苗 1955年Peck制备了鸭胚疫苗，1959年，Powell和Cubertson改进其生
产工艺，制备的疫苗中含有10%经β-丙内酯灭活的鸭胚组织悬液。禽胚疫苗抗体效价低
，但引起变态反应的可能心血来潮小。目前在亚洲、非洲、南美... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 40 而每次subculture的时间是200-300年
subculture 完的细胞就会生机勃勃，处于感受态，可以接受新鲜质粒转染，不断适应
外界变化，
最近一次接受的质粒叫做伪社会主义 表达载体是科学社会主义，但是overexpress 出
来的却是麻痹的封建专制官僚资本主义
生物的同学说对吗，
我发现这世界上万事万物都是相同的 |
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发帖数: 1 | 41 发信人: lubbock12 (非老非小将), 信区: Biology
标 题: 中华文明这盘细胞的生命力就在于可不断地subculture (转载)
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jul 17 22:04:07 2018, 美东)
【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: lubbock12 (非老非小将), 信区: Military
标 题: 中华文明这盘细胞的生命力就在于可不断地subculture
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jul 17 22:03:29 2018, 美东)
而每次subculture的时间是200-300年
subculture 完的细胞就会生机勃勃，处于感受态，可以接受新鲜质粒转染，不断适应
外界变化，
最近一次接受的质粒叫做伪社会主义 表达载体是科学社会主义，但是overexpress 出
来的却是麻痹的封建专制官僚资本主义蛋白
生物的同学说我说的对吗，
我发现这世界上万事万物都是相同的 |
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n******g
发帖数: 17225 | 42 听说小木虫非常专业，提问都是下面这类的。
提rna的时候75%乙醇配反了，有没有弥补措施？
为什么我构质粒3kb的片段搭桥没成功？构质粒高保真批不出来可以用普通酶吗？ |
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s*********n
发帖数: 34 | 43 我看你在在黑你自己智商，还有阅读能力。
“and Z.-L.S. provided SHC014 spike sequences and plasmids.” 应该怎么理解？
她提供了质粒（你知道什么是质粒吗？），被列为作者没问题。
石正丽最近的nature文章，是对新病毒的鉴定。 |
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发帖数: 1 | 44 石正丽在2015年美国人合成新冠病毒SHC014的《Nature》文章中，贡献在于提供了病毒
的质粒样本。
也就是说，石就是一帮人抓蝙蝠的。
我就想知道，她是不是把RaTG13 CoV的质粒样本也给美国人了。
如果给了，相当于给了敌人屠杀鳖华的刀子。 |
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n****r
发帖数: 57 | 45 来自学生的倾诉：我所经历的清华大学张生家事件
尊敬的老师，您好！
您不认识我，但这次我决定冒昧打扰您。我是清华大学张生家老师的学生龙晓阳，也是
最近因为“抢发”风波争议很大的磁遗传学文章的第一作者。这一系列争端实质上是鲁
白老师作为与张生家老师独立发起的磁遗传学课题不相关的第三者，在8月份参与并企
图篡夺我们实验室的研究成果，而单方面挑起的争端。鲁老师在要求通讯作者被拒绝后
，使张老师的合作者北大谢灿老师突然倒戈，并重新在相同的课题上合作，在他们自己
实验室快速复制和我们一样的实验结果；同时，他利用强大的行政人脉资源影响学术委
员会和人事处，撕毁了张老师的劳动合同。如果您花十分钟的时间阅读下面的经过，您
一定会为我们的遭遇感到心痛，也会为学术界的黑暗感到震惊。我愿意为下面我说的每
一件事情的真实性负责。
作为论文的第一作者，整个文章的唯一一套数据都是我收集完成的。在项目进展的数月
里，我没有见过鲁老师一面。8月份项目快完成的时候，鲁老师突然说是他实验室的学
生逄克亮带张老师去找的谢老师，所以项目是他实验室首先发起的，要求当文章的通讯
作者。鲁老师从2014年6月份起就让他一年级学生逄克... 阅读全帖 |
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y*******i
发帖数: 96 | 46 一个星期前去面试，是在老公所在的学校，地点是最理想的，跟那里的导师谈了，我也
做了报告，我觉得表现还不错，其间他请我吃了饭，机票也正在报销中，但是回来以后
他始终不谈给我发offer letter的事，他想让我申请一个fellowship,给我发了很多
paper让我想着申请fellowship，他总是说等我搬过去了再开始给我办paperwork,但是
我说了不想有gap。他没有发广告，是我发信过去问他有没有postdoc位置的，有可能他
的funding不是很充足。我该催他给我发正式的offer letter吗？还有这个导师开始向
我现在的实验室要一些质粒，我现在的导师答应给他质粒，他又想要我去问我的导师能
不能给他很多细胞系。他想和我现在的实验室建立合作的关系，但是我看他实在没有给
我发offer letter的意思，而且总是想推迟我开始工作的时间，怎么办才好呢？ |
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n****r
发帖数: 57 | 47 【 以下文字转载自 Faculty 讨论区 】
发信人: norger (张贝尔), 信区: Faculty
标 题: 方舟子转发张生家学生龙晓阳致鲁白谢灿饶毅的公开信
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Nov 11 06:10:51 2015, 美东)
来自学生的倾诉：我所经历的清华大学张生家事件
尊敬的老师，您好！
您不认识我，但这次我决定冒昧打扰您。我是清华大学张生家老师的学生龙晓阳，也是
最近因为“抢发”风波争议很大的磁遗传学文章的第一作者。这一系列争端实质上是鲁
白老师作为与张生家老师独立发起的磁遗传学课题不相关的第三者，在8月份参与并企
图篡夺我们实验室的研究成果，而单方面挑起的争端。鲁老师在要求通讯作者被拒绝后
，使张老师的合作者北大谢灿老师突然倒戈，并重新在相同的课题上合作，在他们自己
实验室快速复制和我们一样的实验结果；同时，他利用强大的行政人脉资源影响学术委
员会和人事处，撕毁了张老师的劳动合同。如果您花十分钟的时间阅读下面的经过，您
一定会为我们的遭遇感到心痛，也会为学术界的黑暗感到震惊。我愿意为下面我说的每
一件事情的真实性负责。
作为论文的第一作者，整... 阅读全帖 |
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s*****l
发帖数: 7106 | 48 1. 有的产品不只便宜50%，比如质粒小提我们定价是$46/50prep，熟悉的都该知道便宜
多少了。
2.在中国确实是很多国内的产品都是qiagen的20-30％，我们换算国内的质粒小提
qiagen是860元/50次，国内的本土产品便宜的100-200元/ 50次，我们的卖的是315元/
50次。但是美国人工，材料什么都会贵。
3. 对于大客户我们也有折扣。在跟各位伙伴合作的时候遇到大客户，在我们给你们的
折扣上你们可以再申请一定的折扣的。
我们目的就是保证大家都有钱赚，共同发展：）不知道回答清楚么？ |
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G****a
发帖数: 10208 | 49 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: toptip (土翁), 信区: Biology
标 题: 从骨科医生到诺贝尔奖-山中伸弥的研究历程
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Oct 17 00:04:30 2012, 美东)
引言
山中伸弥（Shinya Yamanaka）获得诺奖已经有几天了，虽然两年前在听完他的讲座后
我兴致很高地写了两篇文章，这些天我却没有多少动力再写一篇完整的文章来介绍他的
工作。
我一直对中国现在还盛行的规划性科研，应用导向型科研耿耿于怀。这些所谓的重大项
目在立项的当初对目标/前景写得宏大无比，之后却通常草草收场。如果那些重大项目
真的能实现立项当初的用意，那诺贝尔奖早就在中国遍地开花了。广大科研人员都觉得
这种运行模式是一个笑话，饶毅、施一公等大牛也重炮轰击，但是分钱游戏还在进行着
。而公众，包括相当一部分科研人员也并不了解科研的自身规律，总是一再地问做基础
研究有什么用。
Shinya Yamanaka的成功是典型的小实验室自由探索的成功。他的成功再一次提示，有
相当多的科学突破是不可预测的。如果中国有大批优质的小实验室得到稳... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 50 进化论的各种说法经常充满矛盾和逻辑混乱。（图片来源：Adobe stock）
生物界中一直未明确病毒是一种生命，而一项最新南极生物学研究称，南极的一种共享
DNA的微生物提示病毒的进化机制，但该研究也无法明确将病毒定义为一个物种或一种
生物，也就不存在病毒能够进化问题。
澳洲新南威尔斯大学（UNSW）8月22日报导，该大学的科学家在南极检测一种神奇的嗜
盐细菌时，发现这些细菌会分享DNA，来互相帮助它们的生长和存活。
科学家描述，经过18个月的采样分析，意外地发现南极一种嗜盐（含义为“特别喜欢在
盐的环境中生存”）细菌通过传递质粒（plasmid，含有DNA的一段细胞成分），来互相
帮助生存。因此，科学家认为，病毒也可能用这种方法来进化。
但令人困惑的是，为什么该研究的科学家认为未明确属于生物的病毒能够进化。因为在
当今以进化论为基础的生物学中，未明确将病毒定义为一个物种或一种生物。
根据目前生物学对生命的定义，病毒不是生命。因为生物学家规定，生命的特征是保持
稳定状态（稳态）、有不同层次的组织、繁殖、生长、消耗能量、对刺激有反应以及适
应环境。病毒仅符合其中两方面：有不同层次的组织和... 阅读全帖 |
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