b**********8
发帖数: 349 | 1 从别人那里要了点带flag标签的pcDNA3.1质粒，有map，看附件，插入的FLAG序列带
stop codon，是不是只能在KpnI上游插入target gene coding sequence了，而且
要把stop codon去掉？ |
m******5
发帖数: 1383 | 2 如果你一定要用他的flag tag的话，是，还有记得要in frame
不过也可以选择忽略这个tag，自己在引物上加一个，那就方便了，想插哪里插哪里 |
b**********8
发帖数: 349 | 3 多谢你的回复。就是需要这个flag。
但是不明白你的第二句话，自己在引物上加一个？加flag序列吗？
可是有87base啊，太长了吧
【在 m******5 的大作中提到】
: 如果你一定要用他的flag tag的话，是，还有记得要in frame
: 不过也可以选择忽略这个tag，自己在引物上加一个，那就方便了，想插哪里插哪里
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b**********8
发帖数: 349 | 4 另外还有个问题，我在网上查到的FLAG tag sequence 都是GACTACAAGGACGATGATGACAAG
，为什么这个vector里的sequence完全不同？ |
b**********8
发帖数: 349 | 5 另外还有个问题，我在网上查到的FLAG tag sequence 都是GACTACAAGGACGATGATGACAAG
，为什么这个vector里的sequence完全不同？ |
j******n
发帖数: 941 | 6 你这个质粒3XFlag是在C端融合，你自己序列插在这个标签之前就行 不需要去stop
3XFlag跟Flag序列的确不一样 具体序列可以跟sigma官网比对
http://www.sigmaaldrich.com/life-science/molecular-biology/clon |
m******5
发帖数: 1383 | 7 1, 87base没有问题，设计一个长引物而已
2,3Xflag是由一个经典flag+两个mutant flag组成，后两个flag仍然可以被大多数
Sigma Flag antibody识别，第一个经典flag可以被所有市售flag antibody识别
3,尽量用N-terminal Flag，能识别C-terminal Flag的抗体相对少很多，选择会收限制
【在 b**********8 的大作中提到】
: 多谢你的回复。就是需要这个flag。
: 但是不明白你的第二句话，自己在引物上加一个？加flag序列吗？
: 可是有87base啊，太长了吧
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b**********8
发帖数: 349 | 8 明白了，
非常感谢jojochan ，muhe1985 两位的回复和建议。 |
