o******n
发帖数: 511 | 1 没找到,都是收费的.如果自己把反向引物测出来的序列弄个reverse complement然后比
对感觉不可靠. 有什么免费软件可以生成contig?
sanger测序问题:
用模板加引物,理论上测出来的序列是从引物后面第一个碱基开始显示,但实际又往后隔
了好远,这样正常吗?
谢谢~~~ | o********r
发帖数: 775 | 2 最初的序列不准确，所以设计primer时一般都留些余地，不过这个是很多年前的经验了 | T**********t
发帖数: 1604 | 3 只能答一下第二个问题：
sanger测序用的引物是质粒测序的标准引物还是自己设计的？你说的往后隔了好远是多
远？Sanger测序的前30-50个base基本都是乱的，没有太大参考意义。所以一般设计测
序引物都会在插入位点的前后至少隔开50bp以上的距离，否则你就要损失一段序列读不
出来了。
【在 o******n 的大作中提到】
: 没找到,都是收费的.如果自己把反向引物测出来的序列弄个reverse complement然后比
: 对感觉不可靠. 有什么免费软件可以生成contig?
: sanger测序问题:
: 用模板加引物,理论上测出来的序列是从引物后面第一个碱基开始显示,但实际又往后隔
: 了好远,这样正常吗?
: 谢谢~~~
| o******n
发帖数: 511 | 4 嗯,谢谢楼上两位,的确是这样.自己设计的引物,测出来隔了三十几个,看来只能用上游
引物测了. | o********r
发帖数: 775 | 5 十年前测序都可以读到800bp，不至于省这50bp吧
【在 o******n 的大作中提到】
: 嗯,谢谢楼上两位,的确是这样.自己设计的引物,测出来隔了三十几个,看来只能用上游
: 引物测了.
| l******n
发帖数: 520 | 6 1. Phred/Phrap
2. try purification your "big dye PCR product" using sephadex, you can get
longer sequences |
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