v***a
发帖数: 1242 | 1 想在细胞中超量表达一个蛋白，在克隆过程中试过在这个蛋白的open reading frame头
尾设计引物，可是都没有成功的，感觉是引物设计得不好。后来就选了5'和3'的UTR区
域设计引物（离start codon和stop codon都有比较远的一段距离)。请问这样的引物可
以吗？会不会对蛋白表达产生什么影响？谢谢！ |
O******e
发帖数: 4845 | 2 只要确认5'这段不含任何ATG，问题不大。WB确认过表达且蛋白大小正确就行了。
【在 v***a 的大作中提到】
: 想在细胞中超量表达一个蛋白，在克隆过程中试过在这个蛋白的open reading frame头
: 尾设计引物，可是都没有成功的，感觉是引物设计得不好。后来就选了5'和3'的UTR区
: 域设计引物（离start codon和stop codon都有比较远的一段距离)。请问这样的引物可
: 以吗？会不会对蛋白表达产生什么影响？谢谢！
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j****x
发帖数: 1704 | 3 很多时候5'/3'UTR区域中包含调控序列，对蛋白表达究竟会产生什么影响很难预测。
如果用5'/3'UTR区域的引物能成功扩增，那就先克隆到载体中再用ORF头尾引物再扩增
一次（或者直接nested PCR），不费多少事，但是能省后面很多不必要的麻烦。 |
v***a
发帖数: 1242 | 4 哎 就是WB检测不到蛋白量的变化，所以开始怀疑了
【在 O******e 的大作中提到】
: 只要确认5'这段不含任何ATG，问题不大。WB确认过表达且蛋白大小正确就行了。
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v***a
发帖数: 1242 | 5 多谢多谢
【在 j****x 的大作中提到】
: 很多时候5'/3'UTR区域中包含调控序列，对蛋白表达究竟会产生什么影响很难预测。
: 如果用5'/3'UTR区域的引物能成功扩增，那就先克隆到载体中再用ORF头尾引物再扩增
: 一次（或者直接nested PCR），不费多少事，但是能省后面很多不必要的麻烦。
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