e****p
发帖数: 354 | |
w********r
发帖数: 1431 | |
l***s
发帖数: 841 | 3 Looks like too much DNA template to start with. Try to do 1:100 dilution. |
e****p
发帖数: 354 | 4 Will try dilution. M C looks like only one line |
e****p
发帖数: 354 | 5 Will try dilution. M C looks like only one line |
h********e
发帖数: 224 | 6 把Log换成Linear会给你更直观的图像。另外看一下Melting Curve， Tm 值怎么样。
你应该知道你每个Well里cDNA的浓度吧，我一般每个Well有50ng,40个Cycle，结果都很
好。
【在 e****p 的大作中提到】
: What's the problem?
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Z******5
发帖数: 435 | 7 貌似扩增的最猛的那几条曲线有两个指数增长区。 会不会是有超强的引物二聚体？你
检查一下引物看看。
一般用2ug total RNA反转录cDNA后，1:10稀释，取3ul做模板，内参GAPDH的Ct也就20
左右。 按照模板差10倍，Ct值差3来看，你这个结果真的是不好解释啊，即使是过表达
也没见过这么高丰度的基因。 |
l***s
发帖数: 841 | 8 Could be rRNA.
20
【在 Z******5 的大作中提到】
: 貌似扩增的最猛的那几条曲线有两个指数增长区。 会不会是有超强的引物二聚体？你
: 检查一下引物看看。
: 一般用2ug total RNA反转录cDNA后，1:10稀释，取3ul做模板，内参GAPDH的Ct也就20
: 左右。 按照模板差10倍，Ct值差3来看，你这个结果真的是不好解释啊，即使是过表达
: 也没见过这么高丰度的基因。
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e****p
发帖数: 354 | |
l**********1
发帖数: 5204 | 10 Mark!
【在 e****p 的大作中提到】
: 多谢大家，稀释以后就正常了。
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