o***e
发帖数: 12 | 1 自己设计的用来做qPCR的引物，primer 5.0设计的，理论上的产物应该是98bp。我先是
用PCR对cDNA进行了三十个cycle测试了一下引物，结果P出来很纯的一条带，在300bp附
近，去测了一下序列，结果258bp，而且还是同一个基因。。。。。。。。。
这是咋回事啊？大家说说看？
难道是RNA里面可能含有DNA，然后做RT-PCR的时候还在，导致PCR就直接在DNA的基础上
扩了？
汗死了 |
C**S
发帖数: 522 | |
o***e
发帖数: 12 | 3 查了一下，基本上在正向引物开始的那部分，只是结束的不是反向的那一点，是往后延
了一百多个bp
【在 C**S 的大作中提到】
: 那测序得到的序列是基因的哪一部分？
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b******n
发帖数: 4225 | 4 你的细胞在目的基因有alternative splicing?
就是说你P到一个原来target的isoform
【在 o***e 的大作中提到】
: 自己设计的用来做qPCR的引物，primer 5.0设计的，理论上的产物应该是98bp。我先是
: 用PCR对cDNA进行了三十个cycle测试了一下引物，结果P出来很纯的一条带，在300bp附
: 近，去测了一下序列，结果258bp，而且还是同一个基因。。。。。。。。。
: 这是咋回事啊？大家说说看？
: 难道是RNA里面可能含有DNA，然后做RT-PCR的时候还在，导致PCR就直接在DNA的基础上
: 扩了？
: 汗死了
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Z******5
发帖数: 435 | 5 有这种可能。我前一段时间扩增了一个小肽段，在同一个细胞中就有两种表达量相近的
isoform，都是经过剪接后的，其中一个比另一个少了15bp，在其中一个剪接位点处有
不同。 |
