b**********8
发帖数: 349 | 1 最近发现以前的beta actin内参在某个treatment下变化挺大，于是换用18S rRNA,波动
没那么明显了，但是CT 值只有8点多，查了下资料说18S rRNA 的丰度很高，PCR 反应
中很快就能饱和，大家是怎么解决这个问题的？ |
S*********s
发帖数: 304 | 2 多选几个内参
b2m
18sRNA
GAPDH
看看内参之间是否一致。
一般尽量保证input RNA量是一样的
【在 b**********8 的大作中提到】
: 最近发现以前的beta actin内参在某个treatment下变化挺大，于是换用18S rRNA,波动
: 没那么明显了，但是CT 值只有8点多，查了下资料说18S rRNA 的丰度很高，PCR 反应
: 中很快就能饱和，大家是怎么解决这个问题的？
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a****n
发帖数: 79 | 3 18S RNA一般只用在northern blotting里做内参吧, RealtimePCR还是actin,GAPDH,
tublin做内参比较常见 |
m***o
发帖数: 272 | 4 其实很多文献谈qPCR内参的。可以google一下。这里说一下我的体会。18sRNA 做内参
的一个确定是他不是mRNA,另外他的ct太小。但是有时他还是比较准确。比如我做不同
老鼠的脂肪组织就比较好。而且有片文献专门比较了脂肪组织不同的几个内参，发现
18RNA是最好的一个，而且 在dilute很多的cDNA里，发现变化也不是很大。
不过，我只是在找不到别的mRNA内参时用18sRNA.楼上说用GAPDH，actin，做内参，实
际GAPDH 不是个好的内参，很多时候会变化。我推荐用rpt18.不过再做自己样品时，是
要比较一下不同的内参的。搜搜版上，这个问题好像讨论过。 |
b**********8
发帖数: 349 | 5 谢谢你详细的意见，我最近几次的PCR中也发现，
18sRNA CT值只有8点多，但是确实很稳定，不同处理之间的变异几乎可以忽略。
【在 m***o 的大作中提到】
: 其实很多文献谈qPCR内参的。可以google一下。这里说一下我的体会。18sRNA 做内参
: 的一个确定是他不是mRNA,另外他的ct太小。但是有时他还是比较准确。比如我做不同
: 老鼠的脂肪组织就比较好。而且有片文献专门比较了脂肪组织不同的几个内参，发现
: 18RNA是最好的一个，而且 在dilute很多的cDNA里，发现变化也不是很大。
: 不过，我只是在找不到别的mRNA内参时用18sRNA.楼上说用GAPDH，actin，做内参，实
: 际GAPDH 不是个好的内参，很多时候会变化。我推荐用rpt18.不过再做自己样品时，是
: 要比较一下不同的内参的。搜搜版上，这个问题好像讨论过。
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