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1
(共1页)
d**********t
发帖数: 20415
1
最近realtime PCR遇到怪事了,请大家帮忙分析下原因:
问题:几个基因的值出现很多undetermined的结果,但是之前一直在同一个cell line
里做,一直都可以检测到
条件:Realtime的template是RNA反转录的cDNA
cell line和RNA抽提的方法都和以前一样,处理方法也一致
引物用的是刚刚从stock里面稀释出来的,和之前的实验来自同一管stock
拿之前证明可以检测到的RNA作为阳性对照,也是undetermined
反转录kit整个实验室公用,其他人没有遇到问题
反转录试过oligo dT和random primer,结果没有差别
其中一个基因刚刚设计了一对新引物结果也是undetermined
作为positive control的基因可以检测到没有问题
多谢了
如果需要更多细节,我会补充
A******y
发帖数: 2041
2
How many cycle did you run? What do your C(t) curves look like?
d****u
发帖数: 1553
3
你这个positive control和你的样品是相同的cDNA不同的基因呢,还是不同的cDNA相同
的基因。如果是前者,可能你的引
物有问题,如果是后者,那你得cDNA可能有问题
line
【在 d**********t 的大作中提到】
: 最近realtime PCR遇到怪事了,请大家帮忙分析下原因:
: 问题:几个基因的值出现很多undetermined的结果,但是之前一直在同一个cell line
: 里做,一直都可以检测到
: 条件:Realtime的template是RNA反转录的cDNA
: cell line和RNA抽提的方法都和以前一样,处理方法也一致
: 引物用的是刚刚从stock里面稀释出来的,和之前的实验来自同一管stock
: 拿之前证明可以检测到的RNA作为阳性对照,也是undetermined
: 反转录kit整个实验室公用,其他人没有遇到问题
: 反转录试过oligo dT和random primer,结果没有差别
: 其中一个基因刚刚设计了一对新引物结果也是undetermined
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