n****3 发帖数: 543 | 1 qPCR做的比较少,没有经验,求高人指点。
我现在有实验组和对照两个样品,反转录起始的rna量不相同,qpcr出来的结果内参和
靶基因的ct, 可以比较吗?如何比较 |
n****3 发帖数: 543 | |
n****3 发帖数: 543 | |
L****T 发帖数: 169 | 4 bias会比较大,有时候这样做出来的结果会很难repeat。你可以尝试把RNA量多的那个
样品dilute到和RNA量少的那个样品同样浓度去做RT。 |
m******f 发帖数: 25 | 5 有时候即使用同样量的RNA做RT, 做出来的内参也是差别很大(同一个细胞,不同处理
)。
【在 L****T 的大作中提到】 : bias会比较大,有时候这样做出来的结果会很难repeat。你可以尝试把RNA量多的那个 : 样品dilute到和RNA量少的那个样品同样浓度去做RT。
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s******y 发帖数: 28562 | 6 关键看看内参的差别有多大。如果内参的量做出来差别不超过四倍的话我觉得是可以用
的。
另外,反转录起始的RNA量说明不了什么的,因为很多都是不能被oligo-dT反转录的东
西(rRNA,tRNA, etc.)。
【在 n****3 的大作中提到】 : qPCR做的比较少,没有经验,求高人指点。 : 我现在有实验组和对照两个样品,反转录起始的rna量不相同,qpcr出来的结果内参和 : 靶基因的ct, 可以比较吗?如何比较
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n****3 发帖数: 543 | |
n****3 发帖数: 543 | |
m***o 发帖数: 272 | 9 跟帖问个基础问题,大家不要见笑。
RNA 做RT 的时候,一个mRNA分子就逆转出一个cDNA吗?还是逆转录酶可以无限的
bindingRNA,得到很多cDNA? |
K**R 发帖数: 193 | 10
你觉得用oligo dt 好还是random primer好呢?
【在 s******y 的大作中提到】 : 关键看看内参的差别有多大。如果内参的量做出来差别不超过四倍的话我觉得是可以用 : 的。 : 另外,反转录起始的RNA量说明不了什么的,因为很多都是不能被oligo-dT反转录的东 : 西(rRNA,tRNA, etc.)。
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r**********e 发帖数: 587 | 11 同问这个问题。
internal control不就是来主要control这个用于qPCR的cDNA的量的么?
cDNA多,内参的值就高;cDNA少,内参的值就低。
当然要保证cDNA在合理的范围内,不能太低也不能太高。
只要在合理浓度范围内,请问用内参有什么问题?有啥bias?
【在 n****3 的大作中提到】 : qPCR做的比较少,没有经验,求高人指点。 : 我现在有实验组和对照两个样品,反转录起始的rna量不相同,qpcr出来的结果内参和 : 靶基因的ct, 可以比较吗?如何比较
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