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Biology版 - 反转录起始的rna量不相同,可以比较内参做qpcr分析吗?
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18S rRNA做内参的问题用什么引物能够直接从RNA里把一个基因给扩出来?
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n****3
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1
qPCR做的比较少,没有经验,求高人指点。
我现在有实验组和对照两个样品,反转录起始的rna量不相同,qpcr出来的结果内参和
靶基因的ct, 可以比较吗?如何比较
n****3
发帖数: 543
2
up
n****3
发帖数: 543
3
up
L****T
发帖数: 169
4
bias会比较大,有时候这样做出来的结果会很难repeat。你可以尝试把RNA量多的那个
样品dilute到和RNA量少的那个样品同样浓度去做RT。
m******f
发帖数: 25
5
有时候即使用同样量的RNA做RT, 做出来的内参也是差别很大(同一个细胞,不同处理
)。

【在 L****T 的大作中提到】
: bias会比较大,有时候这样做出来的结果会很难repeat。你可以尝试把RNA量多的那个
: 样品dilute到和RNA量少的那个样品同样浓度去做RT。

s******y
发帖数: 28562
6
关键看看内参的差别有多大。如果内参的量做出来差别不超过四倍的话我觉得是可以用
的。
另外,反转录起始的RNA量说明不了什么的,因为很多都是不能被oligo-dT反转录的东
西(rRNA,tRNA, etc.)。

【在 n****3 的大作中提到】
: qPCR做的比较少,没有经验,求高人指点。
: 我现在有实验组和对照两个样品,反转录起始的rna量不相同,qpcr出来的结果内参和
: 靶基因的ct, 可以比较吗?如何比较

n****3
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谢谢了,给你们三个发包子吧
n****3
发帖数: 543
8
谢谢了,给你们三个发包子吧
m***o
发帖数: 272
9
跟帖问个基础问题,大家不要见笑。
RNA 做RT 的时候,一个mRNA分子就逆转出一个cDNA吗?还是逆转录酶可以无限的
bindingRNA,得到很多cDNA?
K**R
发帖数: 193
10

你觉得用oligo dt 好还是random primer好呢?

【在 s******y 的大作中提到】
: 关键看看内参的差别有多大。如果内参的量做出来差别不超过四倍的话我觉得是可以用
: 的。
: 另外,反转录起始的RNA量说明不了什么的,因为很多都是不能被oligo-dT反转录的东
: 西(rRNA,tRNA, etc.)。

r**********e
发帖数: 587
11
同问这个问题。
internal control不就是来主要control这个用于qPCR的cDNA的量的么?
cDNA多,内参的值就高;cDNA少,内参的值就低。
当然要保证cDNA在合理的范围内,不能太低也不能太高。
只要在合理浓度范围内,请问用内参有什么问题?有啥bias?

【在 n****3 的大作中提到】
: qPCR做的比较少,没有经验,求高人指点。
: 我现在有实验组和对照两个样品,反转录起始的rna量不相同,qpcr出来的结果内参和
: 靶基因的ct, 可以比较吗?如何比较

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