p********i
发帖数: 12365 | 1 ☆─────────────────────────────────────☆
caineniac (大肉虫小白) 于 (Sat Oct 30 20:59:45 2010, 美东) 提到:
如题，很希望校方院系能够有所作为
不过想想70码和李刚爸两件事当中浙大和河大校方的反应，希望不大
想谢校长，杨福家校长在那会儿，哪有学生在外面含冤受屈的
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leedstao (Senior) 于 (Sat Oct 30 21:05:48 2010, 美东) 提到:
大学校长有治安管辖权？
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caineniac (大肉虫小白) 于 (Sat Oct 30 21:10:05 2010, 美东) 提到:
觉得至少可以在经济和法律援助等各方面给予必要的支持吧
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Andreas (老中在美国，10年就变joke) 于 (Sat Oct 30... 阅读全帖 |
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p****c
发帖数: 1 | 2 嘿嘿，俺注册不到pion这个帐号。
传统的原料是琼脂，但是成本高，现在一般用海藻酸钠(卡拉胶)来做人工海蜇。
几个食堂好像都有。不过小乐惠没有，应该不算是川菜吧，只是有点辣而已。 |
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m**i
发帖数: 8296 | 3 【 以下文字转载自 WaterWorld 讨论区 】
发信人: ruomu (ruomu), 信区: WaterWorld
标 题: 用冰箱做出各种好吃吃~超级简单，超级好吃！都留着吧，以后偶尔可以露一手。
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jan 4 23:07:06 2011, 美东)
呵呵，超级简单，超级好吃
准备：纯牛奶200ml，QQ糖11粒（数量多少决定果冻的软硬程度 ），葡萄干少许（可不
放）。
将牛奶和QQ糖一起放在锅中，然后边烧边用勺子搅拌，直到QQ糖化开后，将液体倒入容器
内，撒入少许葡萄干。 冷却后放入冷藏室。
因为我是晚上做的，早上从冰箱里取出后，一切就OK了。
真得粉不错哦！~奶味十足，果冻又嫩嫩的。~好好吃的。
有机会的话，大家都可以试一下。而且最主要的是：一点也不花时间，做起来很方便。
香香的牛奶冻（用棉花糖这个方法电视上也介绍过）
材料准备： 1、牛奶 2、一包棉花糖 （袋装，各大超市均有销售） 3、水果 （种类不
限，看个人喜爱）
制作方法：
1、将牛奶倒入锅内加热
2、再将棉花糖倒入锅内搅拌融化
3、待棉花糖完全融化后关火倒入容器中备用
4... 阅读全帖 |
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m**i
发帖数: 8296 | 4 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: dongdongz (东), 信区: Biology
标 题: 生物猛男 (zz)
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Jan 6 16:49:43 2011, 美东)
我是一名猛男，一名生物猛男。猛男不一定都学生物，但学生物的一定都是猛男。
生物猛男，就是做实验不戴手套，不穿白大褂，不戴口罩，不戴护目镜。
琼脂糖胶其实和水果冻是一样的，EB也没什么可怕，有一次我把EB沾在了手指上
，成屎黄色，我就当它是美年达了。
液氮也没有那么冷，我曾经被液氮冻一下也就是皮肉发白，省得买面膜和化妆品
了，大宝SOD都是浮云，超氧化物岐化酶算什么，玉米幼芽中也有SOD的，我曾经把它涂
在脸上，美白效果还真不如液氮。对了，我在实践中发现，原来单物质也是可以做炸弹
的，国产劣质EP管，放上液氮，可以当摔炮使用，不会污染空气，比较环保。
CTAB的名字很长，沾一点也不会有事，SDS我曾经把它叫做SBS，就是SB的复数形
式。氯仿异戊醇味道很刺激，有点初恋的感觉，加点苯酚就更完美了。
... 阅读全帖 |
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r****g
发帖数: 511 | 5 【 以下文字转载自 Food 讨论区 】
发信人: huiqing (hq), 信区: Food
标 题: 奔个甜点豌豆糕
发信站: BBS 未名空间站 (Sun May 30 10:42:14 2010, 美东)
在美国超市买了袋干豌豆决定照网上的方子做个豌豆甜点，虽然豌豆有比较好的粘结性
，但是我还是加
了点琼脂，防止到时候太软没法切。记得小时候妈妈做的时候还会在豌豆沙里铺一层柿
饼丝，这里简单
点就只有豌豆了。做出来效果还不错，嫌麻烦在做豆沙那步没有过滤网，如果有过滤网
的话，口感应该
会更细腻。 |
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m**i
发帖数: 8296 | 6 【 以下文字转载自 WaterWorld 讨论区 】
发信人: ruomu (ruomu), 信区: WaterWorld
标 题: 用冰箱做出各种好吃吃~超级简单，超级好吃！都留着吧，以后偶尔可以露一手。
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jan 4 23:07:06 2011, 美东)
呵呵，超级简单，超级好吃
准备：纯牛奶200ml，QQ糖11粒（数量多少决定果冻的软硬程度 ），葡萄干少许（可不
放）。
将牛奶和QQ糖一起放在锅中，然后边烧边用勺子搅拌，直到QQ糖化开后，将液体倒入容器
内，撒入少许葡萄干。 冷却后放入冷藏室。
因为我是晚上做的，早上从冰箱里取出后，一切就OK了。
真得粉不错哦！~奶味十足，果冻又嫩嫩的。~好好吃的。
有机会的话，大家都可以试一下。而且最主要的是：一点也不花时间，做起来很方便。
香香的牛奶冻（用棉花糖这个方法电视上也介绍过）
材料准备： 1、牛奶 2、一包棉花糖 （袋装，各大超市均有销售） 3、水果 （种类不
限，看个人喜爱）
制作方法：
1、将牛奶倒入锅内加热
2、再将棉花糖倒入锅内搅拌融化
3、待棉花糖完全融化后关火倒入容器中备用
4... 阅读全帖 |
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r****o
发帖数: 105 | 7 几个小建议：
(1) 去磷酸化不是那么重要。
(2)换新的连接酶尤其是新的BUFFER。连接反应的BUFFER
非常容易坏，因为里面有ATP，冻融几次就不行了。
(3)载体和插入片段的量要足够。建议插入片段的量越多
越好。我一般让片段的莫尔量是载体的几十倍。
(4)既然你用琼脂糖凝胶纯化你的片段。我估计你用UV照射过
胶来确定位置，然后切下有DNA的部分，是吧？UV照射下，
很容易让DNA形成嘧啶二聚体，急剧降低连接效率。所以你要么
不用gel purification，如果必须分离两个片段，你可以
同时在两条LANE上跑少量的DNA和大量的DNA，切下少量DNA的
胶用UV照射确定所要片段的位置。 |
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r****o
发帖数: 105 | 8 你给的信息不够，至少得说说这两个蛋白的标签是什么吧，比如
Flag, HA, 或者myc什么的。既然你用proteinA/G，你应该还加了一种
抗体可以把两个蛋白中的一个拽下来吧？
背景高倒是很常见，因为非特异性的结合会比较严重。要做得好，
被首先拽下来的蛋白的tag要比较好才行，而且如果用多次串联的TAG
会比较好，比如6XFLAG。也有人用两种不同的TAG串联在一起，通过
两步纯化来增强特异性。另外就是最好直接用抗体共价耦联的琼脂凝胶(
比较贵，1ML可能要五百多刀)。
还有就是，一般的做法是直接把洗过的beads 直接用sample buffer
煮。这样的样品非特异性的成分会不少，但如果用TAG peptide的溶液
冲洗蛋白(比如anti-flag matrix 用flag peptide 来冲洗)，效果会好很多。
没信号也许是因为缓冲液太强，或者是因为两个蛋白结合太弱，
冲洗过程中脱落了。用crosslinker可能会有所帮助。 |
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f**d
发帖数: 1952 | 9 【 以下文字转载自 Joke 讨论区,原文如下 】
发信人: bibo (清粥小菜), 信区: Joke
标 题: zz一生物系学生写给暗恋的女孩的信
发信站: Unknown Space - 未名空间 (Sat Nov 20 14:38:29 2004) WWW-POST
亲爱的某某: 昨天晚上，偶的脑袋像PCR仪一样在不停的扩增着一个概念：偶爱你，估计
有几百个循环，于是早晨醒来，脑袋里面像吐温100一样满是对爱情憧憬的泡泡! 你在偶
的心中，就像DNA双螺旋一样的美丽，偶愿意化做一个小小的锌指结构，紧紧的依偎在你
怀你。你就像0.5%的琼脂糖凝胶那样纯洁，偶愿意变作像凋亡的细胞，与你一起成就彗星
般的美丽。你就像考马斯亮蓝那样炫目，偶愿意融化成一块SDS-PAGE，让偶们融合成永恒
的画面。 每次你的回眸，都会像振荡器一样，激起偶心中的万千情绪。你那忧郁的眼神
，更是像注射器一样，刺中偶的心疼。而每次见到你与别的男生在一起嘻笑，更是像超声
破碎机一样，把偶脆弱的像细胞壁一样的心房撕个粉碎!!!! |
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j*********n
发帖数: 168 | 10 哈哈，LZ真有意思！
您也不说说，您跑得是什么样品啊？
是提取的总DNA，还是PCR产物，还是酶切回收，还是啥别的啊？
能跟marker的位置有一比，那您marker的位置，是多大的片断啊？
您不把这些情况交待清楚，咋帮您判断呀，呵呵。
-5 |
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e********r
发帖数: 147 | 15 用甲醛-MOPS变性琼脂糖胶跑细菌总RNA电泳，发现样品完全降解。做实验逐一排除，发
现MOPS缓冲液，去离子甲酰胺和总RNA分别混合后65度处理都没问题，而只要把甲醛和
RNA混合后就会降解。奇怪的是，换了几瓶甲醛都是这个结果，而别人的总RNA用同样的
甲醛没问题，极为郁闷，难道我们的总RNA和甲醛不对付？RP不够？
各位说说看这该如何是好？ |
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a***y
发帖数: 19743 | 16 好可怜
前些天我提RNA在普通TBE琼脂糖胶上跑都不降解。
不过我没经验所以不能给你建议了。 |
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b******n
发帖数: 4225 | 17 因为你是熟练工啊
你招一个老美小本试试
教的人和做的人都得花无数精力进去
如果一个实验室一年要花20管的量，你就知道这个合不合算了
比如说LB，你就觉得称3次（不知道你算不算上加琼脂）比买现成平板好
那是因为你做的量少，你试试看一天做200个平板的工作量看看
我非常不喜欢忙活了三四个小时只得到小山似的平板们的感觉
只是我现阶段经常得这么做，真想买来现成的直接用
再说了，你给全实验室都做了感受态
他们会在paper的acknowledgment里面说感谢某某的感受态细胞？
我不反对节省
但是如果精力都花在节省上了你好好一个博士博后PI就成了技术员了
老板对你的最大期望是data，你generate一大堆data才是正经事情
我对于这些省钱的招数的态度是知道有这么回事
但是具体是否用得看实际情况
时间是很宝贵的，宁可多看文章多规划规划下一步（实验，工作或者生活） |
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C*******e
发帖数: 4348 | 18 agilent的bioanalyzer现在用的很多
的确又快用量又少
但是说白了其实也就是毛细管胶
一样是跑胶
一样是看rRNA的比例
没有这个条件的其实跑个琼脂糖电泳
照个照片
然后选择显示migrate/intensity
出来的图是一样一样的
只是没有人那样计算“RIN”而已
degradation |
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g******1
发帖数: 244 | 19 更新：跑了个琼脂糖电泳，28S 和18S条带很清楚，有少量Smear。但是5S最亮，18S 看
起来比28S亮一点。这是不是跟降解有关？ |
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s******y
发帖数: 28562 | 20
等凝固之后倒过来在bench上放一个晚上（一定要倒扣，否则水蒸气全凝
在盖子上了）
55度左右的时候加，就是有点烫手但是还可以拿的时候。要是不放心的话，
弄一缸子55度的热水，把热的琼脂放里面10分钟。 |
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d*******z
发帖数: 212 | 21 我是一名猛男，一名生物猛男。猛男不一定都学生物，但学生物的一定都是猛男。
生物猛男，就是做实验不戴手套，不穿白大褂，不戴口罩，不戴护目镜。
琼脂糖胶其实和水果冻是一样的，EB也没什么可怕，有一次我把EB沾在了手指上
，成屎黄色，我就当它是美年达了。
液氮也没有那么冷，我曾经被液氮冻一下也就是皮肉发白，省得买面膜和化妆品
了，大宝SOD都是浮云，超氧化物岐化酶算什么，玉米幼芽中也有SOD的，我曾经把它涂
在脸上，美白效果还真不如液氮。对了，我在实践中发现，原来单物质也是可以做炸弹
的，国产劣质EP管，放上液氮，可以当摔炮使用，不会污染空气，比较环保。
CTAB的名字很长，沾一点也不会有事，SDS我曾经把它叫做SBS，就是SB的复数形
式。氯仿异戊醇味道很刺激，有点初恋的感觉，加点苯酚就更完美了。
丙烯酰胺能毒害我的神经，但毒害不了我猛男的精神。TEMED闻起来和皮蛋的味
道是一样的，自从做了生物猛男之后，我就开始讨厌吃皮蛋。拥有了考马氏亮蓝，就可
以变身为阿凡达。硝酸银会使你的皮肤发黑，我曾经多次与硝酸银发生亲密接触，把我
原来... 阅读全帖 |
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K*F
发帖数: 120 | 22 请教高人，问题如题，曾经用1%试过，不能分开，有没有其他的办法？
谢谢 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 25 一般来说凝胶浓度越低分辨率也越低。
2kb左右的片段完全可以用1.5%或者2%的agarose胶跑。2.2kb和2kb应该能分开的。 |
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h**********r
发帖数: 671 | 26 可以找内切酶把A片段切小，但B片段不被切。run a gel把B回收了。
同理，可以找内切酶把B片段切小，但A片段不被切。run a gel把A回收了。 |
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M*****n
发帖数: 16729 | 27 man, this is not so easy. if you are really concerned about cross-
contamination. try a different route.
I had trouble to separate 3Kb and 3.2kb and I had to re-clone it into a
vector with a different selection marker. |
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T**********t
发帖数: 1604 | 28 分2.2kb和2kb比分3.2kb和3kb要容易些。
前者size相差10%，后者size相差6.7%。
用窄的梳齿，降低上样体积和浓度，2%的胶低电压多跑一会应该分得开。 |
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m*********7
发帖数: 606 | 30 我建议你先小提看看。
见过一个很极端的例子，某个质粒小提时没有任何问题，一扩大培养基体积细菌就产不
了多少质粒。那个实验室每次提质粒时就只好上１００个试管，再合起来提；或者铺一
大块琼脂培养基，等菌苔长满再刮下来提。
那个实验室的PI和别人讨论觉得可能是插入序列有未知潜在抑制作用，但谁也不知道原
因，只好先这么做了。
另外，很早以前有些老质粒是需要在培养过程中用 IPTG诱导的。你看看质粒信息是否
有这种可能性存在。 |
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g*****p
发帖数: 451 | 31 核酸和蛋白质的结合可以用高盐来打开
因为大部分核酸和蛋白结合都是些静电相互作用
所以你在做亲和层析之前可以加上高盐再用柱子纯化
蛋白质纯化了以后一般还是用UV测一下，因为这是检测核酸污染最简单的办法
连跑个琼脂糖胶都没这个简单
毕竟纯化的蛋白有可能有核酸污染，结合脂类
糖基化或是磷酸化
不是说你用个蛋白胶跑跑发现一条带了就叫提纯了的
而且一般来说蛋白质浓度测定用个紫外光吸收是最简单的办法
只要有芳香族氨基酸，就基本可以用这个办法测定
而且理论值一般都还蛮准的，稍微换算一下就行了
况且大部分的人纯化蛋白对蛋白浓度只要有个相对值就可以了
只要不是测定一些酶学实验或是ITC这些常数测定，一般也不需要那么关心到底蛋白浓度
是多少 |
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t*****z
发帖数: 1598 | 32 我用一般的琼脂糖凝胶跑RNA电泳，跑出来看着不错的，但是条带的大小和边上的DNA分
子量标准对不起来。我想可能是因为RNA分子的迁移率和DNA不一样，所以不能直接对照
。那么有没有公式可以把DNA分子量标准的条带换算成RNA的分子量呢？如果没有的话，
我是不是非得去买专为RNA设计的分子量标准呢？
另外，用反转录酶（Invitrogen SuperScript III）合成出来的cDNA，用OD260怎样定
量？是像DNA一样乘以50，还是乘以33或者别的什么因子吗？
多谢大家！ |
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C*******e
发帖数: 4348 | 33 如果只是差不多看看的话，DNA marker分子量乘以二咯
DNA marker是ds
RNA是ss
脱氧核糖核苷酸和核糖核苷酸的单个分子量有差别但是跑琼脂糖电泳的话你这么粗略比
较一下没什么问
题 |
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m*****u
发帖数: 15526 | 34 工作量肯定是不一样的。对于典型的集落，用不着做免疫染色和flow。或者挑几个做就
可以了。而且集落细胞数有多少，有多少集落完全可以估计。对于mix在一起的，只能
所有都做，每个集落细胞数量类型无从估计和比较。
至于在液体还是半固体中分化是否会不同，我没比较过。记得看过报道是跟液体培养有差异。差异多少不好说。即使都是半固体，methylcelluose 和软琼脂性质也不同。液体培养要换液，加fresh的细胞因子。换液可能导致细胞丢失，麻烦而且不太容易控制条件consistent。无论你用什么纯化方法，能形成集落的细胞只是其中一部分。用半固体培养基可以很方便的估计其中集落形成细胞的数量比例。不管是PBMC还是CD34。用单克隆接种要看的累死也未必能找到几个CFC。另外，单克隆细胞生长一般都会比细胞群体要差
谢！ |
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f********s
发帖数: 115 | 35 你说的很多我都同意。只不过现在我想定量的的来分析一种特定的 progenitor （ex.
CMP） 分化到各个lineage 的能力。我觉得在把多个progenitor 接种到同一个盘子上
有几点非常影响我做定量分析：
1.你在挑集落的时候是可以看到集落的样子的，所以也许你会不自觉的多挑或者少挑某
些集落，引入bias;
2.在挑集落的时候，大的集落容易挑出来，小的集落不容易挑，即使挑了小集落在后续
实验过程中不知道怎么就不见了 (而且大小通常意味着不同的lineage)，也会严重影响
实验者的判断。
因此，我觉得一定要接种单细胞到96孔板里，在不看孔的情况下, 随机挑选比如说20个
孔来观察，这样可以得到各种百分比，比如说百分之多少的单细胞能形成集落，百分之
多少的细胞能形成红细胞集落，多少能形成粒细胞集落……不知道关于这一点你是否同
意？
在这个基础上，我想知道半固体和全液体培养基在这个实验里的优劣。我能想到的半固
体的坏处在于，1.如果你不看孔，不知道这个克隆在哪里，你就要把全部的200ul半固
体培养基吸出来，非常不利于cytospin. 2.而且半固体培养基会有一部分粘在t... 阅读全帖 |
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s******y
发帖数: 28562 | 36 这个啊，如果用动态模拟的方式来看，分子水平上的突变就像是 一条直线
上不时出现的spike 。环境对于这些spike 的出现频率没有太大影响。
但是，如果在环境没有变化的情况下，一个稳态系统是没有动力往其他方向
迁移的。所以spike 只能是spike, 不停的一闪而灭，一闪而灭。
只有环境变化了，给了它一个动力，才能放大和富集那些变化，从而往另外
一个方向迁移过去。
我说的和他说的，其实不是一回事，他说的是作为原动力的分子水平变异，
我说的是作为一个系统工程里面由一个稳态跃迁到另外一个稳态之间的推动力
比方说（我们实验室另外一个千老评论说）：琼脂板上随便涂个细菌，
本身有没有抗药性和加不加抗生素无关，但是不加抗生素的话，那些抗药株就不能被筛选出来，而淹没在野生菌里面了，最后资源都被野生菌抢了。涂了抗生素，那些有抗药性的株才能成为dominant species，我们作为观察者才能看到这个品种的出现。
it |
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H****H
发帖数: 11039 | 37 N年前十分无奈地帮人寄过果蝇，包装在精美的巧克力盒子里当礼物寄........
寄Agar之类的应该没问题，写上琼脂，海关还当是做果冻的食物原料呢。 |
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k*****n
发帖数: 323 | 42 1－3，我没用过covaris，而且检测sonication效果的话一般都是琼脂糖胶。不过根据
你的bioanalyzer的结果，如果是library preparation之前的话，size偏大且范围偏窄
。这不是个好兆头。如果是pcr后的文库的话，大小还算合适
至于4－6，chip下来的dna量太少，没有任何检测size的意义。 |
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s******9
发帖数: 283 | 44 ladder开起来很好，排除了胶的问题，所以可能是样品的问题。可能性有1）样品中大
量的离子影响电场（比如出现明显的弯月带）；2）有离子结合在DNA上。简单方法就是
用pcr purification kit处理一下再跑胶。 |
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m*********n
发帖数: 215 | 47 重新洗一下DNA试试看。也尽量避免over load：） |
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z****g
发帖数: 15 | 48 本来想通过Fedex把冷冻菌株寄回国，但因为研究的是病原菌，按Fedex的要求要标明
Infectious substances。但这样做虽然出美国没有麻烦，但进入中国海关按国内朋友
的说法可能会有大问题。因为海关可能会因此扣住几天，也不做什么冷冻措施，所以菌
株可能会融化死掉。
国内的接收单位希望我就写 sera and plasmids，但这边的老板一定要求如实写。
请问各位有什么高招？
是不是可以把带菌落的琼脂小块放到密封小管内通过随身行礼，然后带上美国老板签字
的信，带回国内？ |
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a****k
发帖数: 1130 | 49 扣住的绝对不是几天，两个月是至少的。而且看你的描述没去检验检疫局开任何证明，
Fedex干冰寄是肯定会被扣的
建议琼脂室温usps international priority express, 3-5天就到 |
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j******n
发帖数: 941 | 50 我是用接种环插进去琼脂一下 然后在平板上面分区划线挑单克隆
话说从来没遇到过他家的质粒菌没有说明书的 |
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