b*******0
发帖数: 125 | 1 简单说明一下：
1.发现一现象。
2.通过RNA-seq晒了一系列top相关的基因。
3.先期 定了3个基因的siRNA，knockdown 基因之后（qPCR确认knockdown），对现象无
影响。十分懊恼。
不知是否再 继续 花钱 购买其余相关基因siRNA？
看牛人有什么高招，求指教！
多谢！ |
I***a
发帖数: 13467 | |
l***y
发帖数: 638 | 3 所谓top相关的标准是啥
如果出来十个先挑了三个做那就接着往下试
如果几百个里挑的那就要再想想 |
z****q
发帖数: 18 | 4 or overexpress/drug treatment to rescue |
B****n
发帖数: 22 | 5 3个实在是太少，30个都不多
条件允许的话，上300个，不允许上30个 |
D***s
发帖数: 5613 | 6 应该在RNA-seq之后再做qPCR来validate筛到的基因在你的实验条件下确实有变化
然后再做siRNA
【在 b*******0 的大作中提到】
: 简单说明一下：
: 1.发现一现象。
: 2.通过RNA-seq晒了一系列top相关的基因。
: 3.先期 定了3个基因的siRNA，knockdown 基因之后（qPCR确认knockdown），对现象无
: 影响。十分懊恼。
: 不知是否再 继续 花钱 购买其余相关基因siRNA？
: 看牛人有什么高招，求指教！
: 多谢！
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b*******0
发帖数: 125 | 7 多谢楼上的几位达人！
Top 相关的标准是:
1.与靶基因在不同条件下（不同条件>3）表达相关（细胞内，组织都验证过）。
2.基因变化qPCR 验证过。
筛选了 20，30个基因。
购买的siRNA 比较贵，dharmacon pool 一个400多刀。替老板心疼钱啊。 就先定了3个
看看结果，要是positive的话，估计老板下血本。可是不如愿，三个都是negative。心
烦啊！
通常要晒多少个，真的要30几个？ 因为是第一次做高通量筛选，不太明白。 |
G****Y
发帖数: 223 | 8 Invitrogen has cheaper one.didn't knowdown completely even it is showing 90%
.You should optimize conditions.Mine is only showing positive on invasive
assay.
【在 b*******0 的大作中提到】
: 多谢楼上的几位达人！
: Top 相关的标准是:
: 1.与靶基因在不同条件下（不同条件>3）表达相关（细胞内，组织都验证过）。
: 2.基因变化qPCR 验证过。
: 筛选了 20，30个基因。
: 购买的siRNA 比较贵，dharmacon pool 一个400多刀。替老板心疼钱啊。 就先定了3个
: 看看结果，要是positive的话，估计老板下血本。可是不如愿，三个都是negative。心
: 烦啊！
: 通常要晒多少个，真的要30几个？ 因为是第一次做高通量筛选，不太明白。
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g*********5
发帖数: 2533 | 9 sigma one siRNA ask $75 if you provide sequence.
【在 b*******0 的大作中提到】
: 多谢楼上的几位达人！
: Top 相关的标准是:
: 1.与靶基因在不同条件下（不同条件>3）表达相关（细胞内，组织都验证过）。
: 2.基因变化qPCR 验证过。
: 筛选了 20，30个基因。
: 购买的siRNA 比较贵，dharmacon pool 一个400多刀。替老板心疼钱啊。 就先定了3个
: 看看结果，要是positive的话，估计老板下血本。可是不如愿，三个都是negative。心
: 烦啊！
: 通常要晒多少个，真的要30几个？ 因为是第一次做高通量筛选，不太明白。
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o**********n
发帖数: 2 | 10 亲，做了3个没做出来就叫negative多呀，叫我做lncRNA的情何以堪 |
a*********n
发帖数: 2526 | 11 是啊，
10个hypothesis 中一个是对的就是不错的科学家了
5个中一个对的就是小牛了
3个中一个对的就是大大牛了
10个中没一个对的，但让别人相信是全对的就是千王之王了。
【在 o**********n 的大作中提到】
: 亲，做了3个没做出来就叫negative多呀，叫我做lncRNA的情何以堪
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b*******0
发帖数: 125 | 12 亲，可老板不这么认为啊。
3个negative 颇受打击。
诱惑老板继续投钱，鸭梨山大啊。
【在 a*********n 的大作中提到】
: 是啊，
: 10个hypothesis 中一个是对的就是不错的科学家了
: 5个中一个对的就是小牛了
: 3个中一个对的就是大大牛了
: 10个中没一个对的，但让别人相信是全对的就是千王之王了。
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f*******n
发帖数: 141 | 13 亲，叫我做前3个ko都是negative的情何以堪
【在 o**********n 的大作中提到】
: 亲，做了3个没做出来就叫negative多呀，叫我做lncRNA的情何以堪
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