C**S
发帖数: 522 | 1 如题。现在的reviewer还会揪着这个问题不放吗？
或者是可以一个siRNA来做loss of function，但必须有overexpression来做gain of
function反证？ |
s******y
发帖数: 28562 | 2 如果是没有人用过的话是会有这个风险，
【在 C**S 的大作中提到】
: 如题。现在的reviewer还会揪着这个问题不放吗？
: 或者是可以一个siRNA来做loss of function，但必须有overexpression来做gain of
: function反证？
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C**S
发帖数: 522 | 3 如果这个基因在我第一篇文章用了2个sirna来证明，第二篇文章可以只用一个了？谢谢。
【在 s******y 的大作中提到】
: 如果是没有人用过的话是会有这个风险，
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s******y
发帖数: 28562 | 4 可以。
如果还是同一个基因的话。
谢。
【在 C**S 的大作中提到】
: 如果这个基因在我第一篇文章用了2个sirna来证明，第二篇文章可以只用一个了？谢谢。
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C**S
发帖数: 522 | 5 谢谢。
【在 s******y 的大作中提到】
: 可以。
: 如果还是同一个基因的话。
:
: 谢。
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m********m
发帖数: 263 | 6 我用了两套siRNA，一个reviewer还说可能有offtarget，没办法KO，只能再加shRNA。
有些人非常喜欢overexpression，总觉得这个东西有些不可靠。尤其对那些体内组成型
高表达的genes，更有些奇怪了
【在 C**S 的大作中提到】
: 如题。现在的reviewer还会揪着这个问题不放吗？
: 或者是可以一个siRNA来做loss of function，但必须有overexpression来做gain of
: function反证？
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S*********s
发帖数: 304 | 7 一般至少要3 different oligos才能自己放心
siRNA的off target是非常严重的
最严谨的是shRNA KD,然后rescue with ectopic expression
shRNA也需要2-3个independent clone to exclude clonal effect
【在 C**S 的大作中提到】
: 如题。现在的reviewer还会揪着这个问题不放吗？
: 或者是可以一个siRNA来做loss of function，但必须有overexpression来做gain of
: function反证？
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g*********5
发帖数: 2533 | 8 can't agree more...
recently found 2 oligo have some effects on one proteins expression,
but further study showed other 5 oligoes could not have similar results...
【在 S*********s 的大作中提到】
: 一般至少要3 different oligos才能自己放心
: siRNA的off target是非常严重的
: 最严谨的是shRNA KD,然后rescue with ectopic expression
: shRNA也需要2-3个independent clone to exclude clonal effect
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C**S
发帖数: 522 | 9 siRNA和shRNA在off target的问题上是不一样吗？
【在 S*********s 的大作中提到】
: 一般至少要3 different oligos才能自己放心
: siRNA的off target是非常严重的
: 最严谨的是shRNA KD,然后rescue with ectopic expression
: shRNA也需要2-3个independent clone to exclude clonal effect
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l**********1
发帖数: 5204 | 10 stable knockdown shRNA better performance from less off-target per cent age
details please refer
Klinghoffer RA at al. (2010)
Reduced seed region-based off-target activity with lentivirus-mediated RNAi.
RNA. 16: 879-84.
PubMed link:
//www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20348445
【在 C**S 的大作中提到】
: siRNA和shRNA在off target的问题上是不一样吗？
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g*********5
发帖数: 2533 | 11 I used 7 oligoes on one gene... |
C**S
发帖数: 522 | 12 那最后怎么挑出用哪两个的？怎么判定没选中的siRNA是有非特异性knockdown的？
【在 g*********5 的大作中提到】
: I used 7 oligoes on one gene...
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g*********5
发帖数: 2533 | 13 4个上升3个下降.
md,很是不相信siRNA了 |
