w*********o
发帖数: 12 | 1 我想在一种肿瘤的细胞系中KD一个蛋白，用了两个不同的siRNA在多种细胞系中进行了
KD，结果qPCR检测显示所有的细胞系中KD效率都很好，但用了3种不同抗体的WESTERN检
测发现似乎没有KD效果。KD后有些细胞表型有改变，有些没有改变。请问可能的原因是
什么？ |
h****n
发帖数: 2552 | 2 抗体的问题吧，要不是就是有些蛋白的稳定性高，你可以试试KD后72小时以上收sample
做WB |
w*********o
发帖数: 12 | 3 我试了3个公司的抗体，其中ABCAM的抗体背景很干净，但也没有KD效果。我也做了96小
时的KD，也没什么效果。。。
sample
【在 h****n 的大作中提到】
: 抗体的问题吧，要不是就是有些蛋白的稳定性高，你可以试试KD后72小时以上收sample
: 做WB
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h****n
发帖数: 2552 | 4 我被abcam的抗体坑过无数回，在right size会有条带，但是那条带不是你要的。我遇
见这种情况好几次了。感觉有些蛋白有好抗体，每家公司的抗体都基本work。有些蛋白
的抗体，没有一家的work。
【在 w*********o 的大作中提到】
: 我试了3个公司的抗体，其中ABCAM的抗体背景很干净，但也没有KD效果。我也做了96小
: 时的KD，也没什么效果。。。
:
: sample
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m******o
发帖数: 8504 | 5 OE 这个蛋白带Tag 的 construct, 同时加siRNA KO， 用tag的抗体跑western看看表达
怎么样 |
w*********o
发帖数: 12 | 6 这个思路的潜在逻辑是可能这个蛋白的抗体不行对吗？我觉得这办法还挺好的。
另外，有没有可能是siRNA的问题?虽然我用了两个siRNA,bi并且在mRNA水平都有KD效率
...
【在 m******o 的大作中提到】
: OE 这个蛋白带Tag 的 construct, 同时加siRNA KO， 用tag的抗体跑western看看表达
: 怎么样
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