e********r
发帖数: 147 | 1 实验室用BL21(DE3)和PET系列的蛋白表达载体差不多有10年，一直都没啥问题。
可最近出现了噬菌体严重污染，蛋白表达菌株经常性的摇不起来，我们已经用了很多方
法，包括各种清洁措施、84消毒、实验室每天紫外长时间灭菌、污染区域高温处理、甲
醛熏、以及换Rosseta菌株等等，但还是控制不住。
请问有经验的朋友们，这可肿么办？ |
J****T
发帖数: 20 | 2 重要的实验交给其他lab或者公司做，然后再自己lab慢慢想办法 |
l********8
发帖数: 197 | 3 我和楼主遇到过类似问题，谈谈的当时查到和询问到的方法
1.确认是否是噬菌体污染
其实有时候，如果加入的抗生素或者IPTG等，本身有毒性，就会使细胞裂解死亡。比如
我使用了当时来我们实验室推销的新牌子的抗生素，当我换回原来的抗生素后，就没有
任何裂解的现象的。还有噬菌斑的实验可以帮你确认，是否真的有噬菌体污染。
2.如果真的污染了你重要的菌株，简单的去除噬菌体的方法是，把细菌划线到平板上，
挑取单克隆，然后再划线，如此重复多次。得到的单克隆基本是没有噬菌体的。你可以
多挑几个，看看是否还有污染。
3.清洁确实很重要，你可能需要看看那些菌也污染了。 |
e********r
发帖数: 147 | 4 呵呵，这个恐怕有问题，都是日常表达蛋白的实验，全交给公司，人民币的不够用啊:)
【在 J****T 的大作中提到】
: 重要的实验交给其他lab或者公司做，然后再自己lab慢慢想办法
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e********r
发帖数: 147 | 5 嗯嗯，谢谢！我试试这个方法灵不灵。
【在 l********8 的大作中提到】
: 我和楼主遇到过类似问题，谈谈的当时查到和询问到的方法
: 1.确认是否是噬菌体污染
: 其实有时候，如果加入的抗生素或者IPTG等，本身有毒性，就会使细胞裂解死亡。比如
: 我使用了当时来我们实验室推销的新牌子的抗生素，当我换回原来的抗生素后，就没有
: 任何裂解的现象的。还有噬菌斑的实验可以帮你确认，是否真的有噬菌体污染。
: 2.如果真的污染了你重要的菌株，简单的去除噬菌体的方法是，把细菌划线到平板上，
: 挑取单克隆，然后再划线，如此重复多次。得到的单克隆基本是没有噬菌体的。你可以
: 多挑几个，看看是否还有污染。
: 3.清洁确实很重要，你可能需要看看那些菌也污染了。
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e********r
发帖数: 147 | 6 实验室用BL21(DE3)和PET系列的蛋白表达载体差不多有10年，一直都没啥问题。
可最近出现了噬菌体严重污染，蛋白表达菌株经常性的摇不起来，我们已经用了很多方
法，包括各种清洁措施、84消毒、实验室每天紫外长时间灭菌、污染区域高温处理、甲
醛熏、以及换Rosseta菌株等等，但还是控制不住。
请问有经验的朋友们，这可肿么办？ |
J****T
发帖数: 20 | 7 重要的实验交给其他lab或者公司做，然后再自己lab慢慢想办法 |
l********8
发帖数: 197 | 8 我和楼主遇到过类似问题，谈谈的当时查到和询问到的方法
1.确认是否是噬菌体污染
其实有时候，如果加入的抗生素或者IPTG等，本身有毒性，就会使细胞裂解死亡。比如
我使用了当时来我们实验室推销的新牌子的抗生素，当我换回原来的抗生素后，就没有
任何裂解的现象的。还有噬菌斑的实验可以帮你确认，是否真的有噬菌体污染。
2.如果真的污染了你重要的菌株，简单的去除噬菌体的方法是，把细菌划线到平板上，
挑取单克隆，然后再划线，如此重复多次。得到的单克隆基本是没有噬菌体的。你可以
多挑几个，看看是否还有污染。
3.清洁确实很重要，你可能需要看看那些菌也污染了。 |
e********r
发帖数: 147 | 9 呵呵，这个恐怕有问题，都是日常表达蛋白的实验，全交给公司，人民币的不够用啊:)
【在 J****T 的大作中提到】
: 重要的实验交给其他lab或者公司做，然后再自己lab慢慢想办法
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e********r
发帖数: 147 | 10 嗯嗯，谢谢！我试试这个方法灵不灵。
【在 l********8 的大作中提到】
: 我和楼主遇到过类似问题，谈谈的当时查到和询问到的方法
: 1.确认是否是噬菌体污染
: 其实有时候，如果加入的抗生素或者IPTG等，本身有毒性，就会使细胞裂解死亡。比如
: 我使用了当时来我们实验室推销的新牌子的抗生素，当我换回原来的抗生素后，就没有
: 任何裂解的现象的。还有噬菌斑的实验可以帮你确认，是否真的有噬菌体污染。
: 2.如果真的污染了你重要的菌株，简单的去除噬菌体的方法是，把细菌划线到平板上，
: 挑取单克隆，然后再划线，如此重复多次。得到的单克隆基本是没有噬菌体的。你可以
: 多挑几个，看看是否还有污染。
: 3.清洁确实很重要，你可能需要看看那些菌也污染了。
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b*****x
发帖数: 17 | 11 1%SDS擦洗所有工作台，洗所有非一次性的容器。 bleach什么的对phage不管用。
【在 e********r 的大作中提到】
: 实验室用BL21(DE3)和PET系列的蛋白表达载体差不多有10年，一直都没啥问题。
: 可最近出现了噬菌体严重污染，蛋白表达菌株经常性的摇不起来，我们已经用了很多方
: 法，包括各种清洁措施、84消毒、实验室每天紫外长时间灭菌、污染区域高温处理、甲
: 醛熏、以及换Rosseta菌株等等，但还是控制不住。
: 请问有经验的朋友们，这可肿么办？
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b******y
发帖数: 627 | 12 When we had similar problem 10+ years ago, we determined that the phage is
t1 using pcr. We knew from literature that t1 phage gets into cells via tona
, a copper or ion transporter, or something alike. There are tona knockout
strain commercially availabe bl21de3 and dh5alpha, which are called
something like bl21de3 T1r and dh5alpha T1r. T1r means T1 phage resistant.
That really solved the problem once and for all.
Good luck! |
m**m
发帖数: 349 | 13 good to know!
tona
【在 b******y 的大作中提到】
: When we had similar problem 10+ years ago, we determined that the phage is
: t1 using pcr. We knew from literature that t1 phage gets into cells via tona
: , a copper or ion transporter, or something alike. There are tona knockout
: strain commercially availabe bl21de3 and dh5alpha, which are called
: something like bl21de3 T1r and dh5alpha T1r. T1r means T1 phage resistant.
: That really solved the problem once and for all.
: Good luck!
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