b****r
发帖数: 17995 | 1 构建了个CONSTRUCT，从基因组扩了16KB,插入表达载体，总长大概是22KB，但是做转染
没结果，想不明白。这个也就算了。测序都测不出来，作为困难模板，BAC测都不行。
而我从这个CONSTRCUT里面扩增小片段测序可以的，真遇到鬼了。是不是测序公司太烂
了，还是怎么回事？ |
M*****n
发帖数: 16729 | 2 容易弄的小片断都被人研究过了。
这剩下这种怪异的大片段了。
惨啊。
Ecoli都很惨，本来天生的质粒没这么大的，现在非得吃进去这么大一块DNA.
【在 b****r 的大作中提到】
: 构建了个CONSTRUCT，从基因组扩了16KB,插入表达载体，总长大概是22KB，但是做转染
: 没结果，想不明白。这个也就算了。测序都测不出来，作为困难模板，BAC测都不行。
: 而我从这个CONSTRCUT里面扩增小片段测序可以的，真遇到鬼了。是不是测序公司太烂
: 了，还是怎么回事？
|
C*******e
发帖数: 4348 | 3 不能回答lz的疑问，我是来求教的
“测序都测不出来，作为困难模板，BAC测都不行”
——请问什么意思？BAC测是针对困难模板么？
我手上有个模板也是测不出来
从两端外侧往里测可以，从里面继续测下去就不行
【在 b****r 的大作中提到】
: 构建了个CONSTRUCT，从基因组扩了16KB,插入表达载体，总长大概是22KB，但是做转染
: 没结果，想不明白。这个也就算了。测序都测不出来，作为困难模板，BAC测都不行。
: 而我从这个CONSTRCUT里面扩增小片段测序可以的，真遇到鬼了。是不是测序公司太烂
: 了，还是怎么回事？
|
b****r
发帖数: 17995 | 4 我想BAC因为很大，有自己独特的测序protocol
我在想是不是这些大玩意有二级结构了，但是Hidi应该可以把这些结构拉直把……
【在 C*******e 的大作中提到】
: 不能回答lz的疑问，我是来求教的
: “测序都测不出来，作为困难模板，BAC测都不行”
: ——请问什么意思？BAC测是针对困难模板么？
: 我手上有个模板也是测不出来
: 从两端外侧往里测可以，从里面继续测下去就不行
|
C*******e
发帖数: 4348 | 5 我那个倒不是大质粒
就3.7kb的片段
但是很难P，也难测序
【在 b****r 的大作中提到】
: 我想BAC因为很大，有自己独特的测序protocol
: 我在想是不是这些大玩意有二级结构了，但是Hidi应该可以把这些结构拉直把……
|
j****x
发帖数: 1704 | 6 High GC content?
换酶换buffer
【在 C*******e 的大作中提到】
: 我那个倒不是大质粒
: 就3.7kb的片段
: 但是很难P，也难测序
|
