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Biology版 - 土问:怎样提高two Oligo ligation的效率?
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话题: oligo话题: ligation话题: dna话题: 土问话题: two
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w******e
发帖数: 1187
1
要ligate two short ss oligos (~80 base for one, 10-30 base for the other),
有可能达到高效率吗(比如至少20%)?隐约记得可以用complementary sequence
作为guide来提高效率,不知有没有现成的protocol?请牛人指点。多谢!
w******e
发帖数: 1187
2
ding~

【在 w******e 的大作中提到】
: 要ligate two short ss oligos (~80 base for one, 10-30 base for the other),
: 有可能达到高效率吗(比如至少20%)?隐约记得可以用complementary sequence
: 作为guide来提高效率,不知有没有现成的protocol?请牛人指点。多谢!

D****g
发帖数: 275
3
why?
T**********t
发帖数: 1604
4
有,叫splinted ligation。
因为T4 DNA ligase的功能是特异性修复双链DNA上的nick。所以需要设计一个splint
oligo,和你需要ligate的两个oligo的两端各自互补。像这样:
图里显示的是连接RNA,不过DNA也是一样的。
这个protocol在这里:
http://www.megaupload.com/?d=QT50D23R
[7] Joining of RNAs by splinted ligation
Melissa J. Moore and Charles C. Query
Methods in Enzymology
Volume 317, 2000, Pages 109-123
RNA - Ligand Interactions, Part A
w******e
发帖数: 1187
5
thx a lot, dawg~

【在 T**********t 的大作中提到】
: 有,叫splinted ligation。
: 因为T4 DNA ligase的功能是特异性修复双链DNA上的nick。所以需要设计一个splint
: oligo,和你需要ligate的两个oligo的两端各自互补。像这样:
: 图里显示的是连接RNA,不过DNA也是一样的。
: 这个protocol在这里:
: http://www.megaupload.com/?d=QT50D23R
: [7] Joining of RNAs by splinted ligation
: Melissa J. Moore and Charles C. Query
: Methods in Enzymology
: Volume 317, 2000, Pages 109-123

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