primer Tm 计算问题 - Biology版 - 未名存档

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Biology版 - primer Tm 计算问题

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A******d 发帖数: 571	1 同样的primer用primer3 和 primerblast算下来居然差10度。该相信哪个？要用来做 real time pcr
j****x 发帖数: 1704	2 Tm计算方法常用的分两类，一类是只根据不通碱基的数目和比例，自然很不准确了，其他的属于thermodynamic methods，例如nearest-neighbor method，还考虑盐浓度以及引物浓度的影响。不同方法之间相差10度自然是可能的。对于qPCR引物，一般参考你所使用的PCR试剂的说明，根据其反应体系以及你所使用的引物浓度来确定Tm值和退火温度。Roche和ABI都有专门的工具来计算相应的数值。保险的话，分别设计两对，标品做个标准曲线，孰优孰劣自然分晓。
A******d 发帖数: 571	3 谢谢！
a********n 发帖数: 844	4 如果你用neb的taq，他家有个计算器，选了taq再给你计算
d******u 发帖数: 178	5 一直在ABI的机器上用PrimerExpress 3，一般都很准确。

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