W*********n
发帖数: 775 | 1 今天要做个real time pcr,测基因表达的变化（处理组相对于对照组），因为好久不用
这个仪器了，所以有一步骤有点忘记了：
我是用SYBR 染色，所以不用探针。请问在新打开的file里面应该是分析法法选择应该
是：
Absolute Quantification 还是 下面的 那个相对定量方法(ccCt) ？
我记得以前用的就是Absolute Quantification ， 现在有点拿不准了。
谢谢啦 |
p********o
发帖数: 29 | 2 哪个系统？如果是ABI的系统的话是deta-deta Ct,因为你是做relative expression |
W*********n
发帖数: 775 | 3 是ABI 系统，7300机型。我记得以前也是做这个，记忆中好像是用 absolute
quantidication.,然后出来的数据结果自己用deta=deta Ct来处理。你很确定是用deta
-deta Ct吗？谢谢阿！
【在 p********o 的大作中提到】
: 哪个系统？如果是ABI的系统的话是deta-deta Ct,因为你是做relative expression
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n***w
发帖数: 2405 | |
p********o
发帖数: 29 | 5 用absolute运行用relative处理也可以
SDS有一个bug,在relative的条件下不能加melting curve，所以我之前一直用absolute
来做relative
但是新版的SDS2.4已经修正了这个bug |
t**a
发帖数: 255 | 6 我一直都用Absolute Quantification for ABI 7400 and 7900. 得到Ct后再计算分析.
【在 W*********n 的大作中提到】
: 今天要做个real time pcr,测基因表达的变化（处理组相对于对照组），因为好久不用
: 这个仪器了，所以有一步骤有点忘记了：
: 我是用SYBR 染色，所以不用探针。请问在新打开的file里面应该是分析法法选择应该
: 是：
: Absolute Quantification 还是 下面的 那个相对定量方法(ccCt) ？
: 我记得以前用的就是Absolute Quantification ， 现在有点拿不准了。
: 谢谢啦
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W*********n
发帖数: 775 | 7 实验室做这个的人走人了，
【在 n***w 的大作中提到】
: 这种问题不应该问你实验室里做过的人吗？。。。。
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W*********n
发帖数: 775 | 8 非常感谢！
absolute
【在 p********o 的大作中提到】
: 用absolute运行用relative处理也可以
: SDS有一个bug,在relative的条件下不能加melting curve，所以我之前一直用absolute
: 来做relative
: 但是新版的SDS2.4已经修正了这个bug
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W*********n
发帖数: 775 | 9 我记得以前就用Absolute Quantification， 当时好像还怀疑为何用它呢。
谢谢再次确认！那就这么做。
析.
??????
【在 t**a 的大作中提到】
: 我一直都用Absolute Quantification for ABI 7400 and 7900. 得到Ct后再计算分析.
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L**********O
发帖数: 1761 | |
Z******5
发帖数: 435 | 11 我用的试剂是Brilliant® II SYBR® Green QPCR Master Mix，不过机器用的
是ABI 7500
【在 L**********O 的大作中提到】
: 搭车问有没有人用STRATAGENE?
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d******u
发帖数: 178 | 12 同鞋，貌似这里有些基本的东西不太清楚呀。
用ABSOLUTE还是RELATIVE要看你不同PRIMER的扩增效率。如果前期已经做过PRIMER的优
化，相比较的两个PRIMER的扩增效率大致相同，可以直接用RELATIVE QUANTIFICATION
。如果没有做优化，也不想花功夫做优化，可以用RELATIVE ABSOLUTE QUANTIFICATION
，就是两个PRIMER都分别做标准曲线，通过标准曲线转换出的数值进行RELATIVE比较。
单纯的ABSOLUTE QUANTIFICATION一般用得不多，在需要知道目标TEMPLATE在样品中准
确的量的时候用。
我猜大概你的情况是RELATIVE ABSOLUTE QUANTIFICATION吧，分别做标准曲线就可以了
。 |
