g*****d 发帖数: 27 | 1 所有方法都试过了,hot start, redesign primers, touchdown, low primer
concentration, change all the reagents...
昨天试了最后一种方法,design tailed primers, 再不成我就崩溃了
大家有没有好的建议? | h******8 发帖数: 3778 | | y******8 发帖数: 1764 | 3 Increase your template amount or use a plasmid as positive control.
【在 g*****d 的大作中提到】 : 所有方法都试过了,hot start, redesign primers, touchdown, low primer : concentration, change all the reagents... : 昨天试了最后一种方法,design tailed primers, 再不成我就崩溃了 : 大家有没有好的建议?
| g*****d 发帖数: 27 | 4 增加template, 用水做control,用不同的DNA做template都会出现dimers, 没有任何
products. | y******8 发帖数: 1764 | 5 Did you try any control primers?
If not confidential, just paste the sequences of your primers.
Hard to believe that any properly designed primers could fail on plasmid DNA.
【在 g*****d 的大作中提到】 : 增加template, 用水做control,用不同的DNA做template都会出现dimers, 没有任何 : products.
| g*****d 发帖数: 27 | 6 谢谢楼上的,不同的primers都试过了,不同的水也试过了,不同的dNTP
concentration也试过了。用的是bulldog的Taq,都会出现size相同的dimers. 但是奇
怪的是用QPCR的mastermix试过后,出现了不同Size的bands。真是相当奇怪。
sequence在lab的电脑上,周一才能拿到。请楼上的兄弟帮忙分析下,谢谢。 | y******8 发帖数: 1764 | 7 qPCR mastermix里有DMSO.
【在 g*****d 的大作中提到】 : 谢谢楼上的,不同的primers都试过了,不同的水也试过了,不同的dNTP : concentration也试过了。用的是bulldog的Taq,都会出现size相同的dimers. 但是奇 : 怪的是用QPCR的mastermix试过后,出现了不同Size的bands。真是相当奇怪。 : sequence在lab的电脑上,周一才能拿到。请楼上的兄弟帮忙分析下,谢谢。
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