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发帖数: 41 | 1 最近在用293T表达外源蛋白,然后用抗体检测蛋白表达水平。 不知道为什么细胞的
viability非常低，我用7-AAD 染色，viability只有50%。请教实验室前辈这可能是什
么原因导致的呢？
我通常 seed 293T cells the day before transfection at the density of 0.5
million/well (6-well plate).
In the afternoon next day transfect 293T cells with plasmids using FugeneHD.
About 36 hours later, detach cells with trypsin and then stain with the
primary antibody on ice for 30 minutes and then incubate with PE-conjugated
secondary antibodies on ice for 30 minutes. FACS analysis is done
immediately after staining. 我用7-AAD检测viability， 结果只有50%。
试过一次细胞不做任何处理（没有转染质粒，没有加FUgeneHD），只是seed cells然后
36小时后用7-AAD检测，viability也差不多只有50%。
有时我需要室温下温育2 hours，然后用PE-conjugated secondary antibodies 染色。
viability 更低。
请问可能是什么原因导致viability 低呢？
祝大家新年愉快? | o**d
发帖数: 3080 | 2 换别的293T来试试，貌似你的这一株细胞有问题。 |
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