s*********t
发帖数: 600 | 1 终于遇到传说中的支原体污染了，郁闷到吐血 。。。
准备养很多很多细胞做蛋白纯化的，养到一半状态越来越差，无数死细胞漂着，细胞瘦
瘦的，很多小泡泡。PCR检测是支原体污染了 。。。。
扔掉了50个15cm的dish的ES细胞 。。。。
浪费了好多试剂和时间啊。
请教到底该怎么避免支原体污染？是不是我操作的时候不小心？要注意哪些事情？
我看实验室还有人不带手套伸进超净台传细胞呢 。。。
我还需要扔掉哪些东西啊？培养基，trypsin，gelatin，都需要扔掉吗？ |
v*********d
发帖数: 382 | 2 Plasmocin from Invivogen (ES cell tested)
细节说明书上都有
【在 s*********t 的大作中提到】
: 终于遇到传说中的支原体污染了，郁闷到吐血 。。。
: 准备养很多很多细胞做蛋白纯化的，养到一半状态越来越差，无数死细胞漂着，细胞瘦
: 瘦的，很多小泡泡。PCR检测是支原体污染了 。。。。
: 扔掉了50个15cm的dish的ES细胞 。。。。
: 浪费了好多试剂和时间啊。
: 请教到底该怎么避免支原体污染？是不是我操作的时候不小心？要注意哪些事情？
: 我看实验室还有人不带手套伸进超净台传细胞呢 。。。
: 我还需要扔掉哪些东西啊？培养基，trypsin，gelatin，都需要扔掉吗？
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i*****g
发帖数: 11893 | 3 简单说，用药是杀不光的，无论说明书多好多好
对于要长期使用的细胞系，唯一的办法是不感染mycoplasma
还有，据说某些ATCC的细胞系，时间一长就有myco，虽然开始时候检测不到 |
s*********t
发帖数: 600 | 4 怎么做到避免感染？
一直加预防支原体的抗生素，就像细胞培养基始终要加PEN-STREP双抗一样，可以吗？
【在 i*****g 的大作中提到】
: 简单说，用药是杀不光的，无论说明书多好多好
: 对于要长期使用的细胞系，唯一的办法是不感染mycoplasma
: 还有，据说某些ATCC的细胞系，时间一长就有myco，虽然开始时候检测不到
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i*****g
发帖数: 11893 | 5 以前隔壁一个做iPS的实验室，他们就为这个问题焦头烂额，杀来杀去也搞不定，还买
了几种mycoplasma的药。你想想，从1个细胞最后长到10^7 以上做分析，有mycoplasma
肯定完蛋了
所以，我知道这个事情。
他们后来会议时候问美国这边，据说办法就是，不用任何pen-strep。没有pen-strep，
细胞长得非常快，你一旦发现细胞长慢了，又没有细菌污染，必然就是mycoplasma污染了
污染就扔掉
【在 s*********t 的大作中提到】
: 怎么做到避免感染？
: 一直加预防支原体的抗生素，就像细胞培养基始终要加PEN-STREP双抗一样，可以吗？
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a****d
发帖数: 1919 | 6 Strategy in our lab：
Put all the suspicious cells in one quarantine incubator,using detection kit
like this to test your cells every month. Then move all myco-negative cells
to decontaminated incubator.
http://www.rndsystems.com/product_detail_objectname_MycoProbeMy
MycoProbe® Mycoplasma Detection Kit
It's always better to prevent spreading of Myco in the first place. |
