t**********p
发帖数: 5 | 1 今天做实验无意中发现HeLa mitosis过程变长了，由原来一个小时左右变成了4个小时
左右。有没有达人指点一下，能导致HeLa有丝分裂过程变长的因素有哪些？pH?温度？
还是medium太久没换？我昨天观察的时候有丝分裂的过程还是1个小时左右的啊！？
小弟刚刚涉足细胞生物学不久，见笑了。
望大家指教。 |
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f*********0
发帖数: 1851 | 2 【 以下文字转载自 Boston 讨论区 】
发信人: franklu1980 (franken), 信区: Boston
标 题: [供求]求一株hela细胞株
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Feb 1 22:47:15 2013, 美东)
有在longwood上班的xdjm有hela细胞吗，能分点给我做点试验吗？愿意请吃饭，多谢！ |
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f*********0
发帖数: 1851 | 5 有在longwood上班的xdjm有hela细胞吗，能分点给我做点试验吗？愿意请吃饭，多谢！ |
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b******n
发帖数: 80 | 6 用什么蛋白区分hela cell和同组织内的正常cell
谢谢。
我是学电子的，顶钢盔通过。 |
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b******n
发帖数: 80 | 7 楼上的，我 查过了HPV-18是病毒。
我做了一个toxin，之前他是没有毒性的，然后我想注射到组织内，想用cancer特有的
蛋白的antibody连上，然后利用在局部区间高溶度，是的toxin进入细胞内，也就是穿
刺，最后将保护toxin的外壳去掉，利用toxin的来杀死cancer cell.所以我的问题是：
什么的蛋白是特有的biomarker for hela cell or MCF some other cancer cell? |
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a********p
发帖数: 94 | 8 在Hela之类的比较好养的细胞中表达一个酶，用CMV之类的质粒，如果wt中有这个酶的
表达，但是
不高，那么转染筛选之后能得到一个比较高的表达么，比如10fold或者100fold higher
？ 还是说
这个问题要具体情况具体分析，如果这个酶的高表达对细胞生长或者生存不利，那么很
可能就得不
到比较高表达的细胞株？
新手诚心请教 |
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o*****r
发帖数: 156 | 9 May I ask what't the purpose of the expression of your recombinant protein?
If you want to use some mammalian cell line (such as Hela) to produce and
purify protein to mg quantity,
(assume you can not get it from E coli, yeast, insect cells, or the protein
has some post-translation
modification that only occurs in mammalian cells) you'd better have the
protein secreted into the medium, so
that 1) yield will be higher; 2) less toxic to the cells.
If you just want to see how the cells behave/react... 阅读全帖 |
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c********r
发帖数: 1125 | 10 试试不就知道了？
我原来做得Hela 细胞大概4x104 全满吧。 |
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m********o
发帖数: 13 | 11 想在Hela转一个GFP tag的蛋白，试过lipofectamine和xtremegene效果都不好，基本上
看不到荧光。同样的条件在293细胞里转得还不错。求助哪位有经验的有没有别的
transfection reagent推荐，或者有没有什么tips？谢谢~ |
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s******y
发帖数: 28562 | 12 这个听起来太奇怪了。Hela 是最容易转的细胞之一。
你确实自己亲手用同一批做出来的同一个plamid 和同样的试剂来转染过293cell 么？ |
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c*******0
发帖数: 190 | 13 Lipotransfectamine LTX&PLUS.
It is very good for Hela. |
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j******i
发帖数: 939 | 14 你记错了吧 HeLa是有名的hard to transfect的细胞 大概只有10-20%能transfect到 |
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s******y
发帖数: 28562 | 15 我惭愧的问一下，这个Pei 对于其他细胞，比方说MEF好用么？我们其实主要是转MEF更
多一些，用来做细胞生物。但是做生化的时候也用HeLa, 293. |
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b***2
发帖数: 348 | 16 HeLa很好转的。会不会是质粒的问题。我用2000转PCDNA一点问题都没有。 |
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m********o
发帖数: 13 | 17 嗯，是同一支tube里的plasmid。要转的是一个细菌蛋白，如果有毒的话会影响转染效
率吗？但是细胞形态看起来都不错，也没什么漂浮的细胞。准备拿GFP vector再试一次
。不知道是不是因为HELA传代太多的原因？还有如果普通显微镜看不到荧光的话，
western有没有可能看到表达？问题太多了，谢谢大牛先~ |
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s******y
发帖数: 28562 | 18 如果你确定你们的显微镜没有问题的话（比方说，你会不会放错了荧光filter啊？）
如果看都看不到的话，用WB是很渺茫的，因为其实眼睛能看到的敏感度比WB高。不过你
们都这样了，那就死马当活马医用WB试试看吧。
如果蛋白对细胞有毒的话，凡是转成功的都死掉了，当然会影响效率，但是没有道理一
个细菌蛋白对293 一点毒性都没有但是对HeLa有那么高的选择毒性。
我赞同你用GFP vector试一试，看看到底是细胞的问题还是plasmid的问题。 |
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t********n
发帖数: 64 | 19 估计细胞代数太多状态太差了，Hela的转染效率随便就到80%的，我个人感觉比293还好
转 |
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b*****l
发帖数: 9499 | 20 【 以下文字转载自 Memory 讨论区 】
发信人: bigsail (当年的红帆船), 信区: Memory
标 题: HeLa, 死后的永生
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Sep 28 23:22:10 2009, 美东)
构成我们身体的细胞在不断的衰老，死亡。我们能够活下去，是靠细胞分裂生成新的细
胞来更新和替代死亡的细胞。而细胞的 DNA 在分裂的过程中会被“磨损”，直到起到保
护作用的 DNA 部分（端粒）被磨光，细胞就不能再分裂了 -- 否则，基因编码会开始被
磨掉。DNA 磨损所导致的细胞分裂次数的极限，叫做 Hayflick 极限。我们会衰老，并
最终死亡，很大程度上，就是由于 Hayflick 极限。
要想研究一种细胞，最基本的手段，就是把它从机体上“卸”下来，在体外长期培养 -
- 这样，才可能重复地在同一种细胞上做实验，各实验室在不同时期的实验结果才能互
相参照。这种可以在体外一代代不断培养的细胞，叫做 cell line。
为了研究癌症，科学家们梦寐以求的就是一株癌细胞的 Cell line。但所有的尝试都失
败了 -- 由于 Hayflick 极 |
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C*I
发帖数: 4736 | 21 一直在误导，现在还在误导。 说说明corona virus 不可以从蝙蝠直接传染给人，必须
经过一个中间宿体性的其它动物才能传染给人。所以，病毒发生后，就故意误导全国人
民去海鲜市场找证据，找其它野生动物的麻烦。 而且还是病毒所去找的，找完了还装
模做样化验呀，分离呀什么的。最后把责任全部推给了海鲜市场的动物。可是那种动物
，一直不敢说，说了其它相关已经在人就会去早那种动物监测。 所以压根不说，打马
虎眼。
事实上，早在2013 年，就是这个武汉病毒研究所，已经从来自云南的蝙蝠身上所携带
的corona virus中分离出第一株蝙蝠SARS类似样的冠状病毒的活病毒，其中就包含了类
似于S类型的基因。从而证实这株病毒能够使其接受和SARS病毒相同的受体，并能够感
染人的细胞。对此新发现，武汉病毒所还把它以武汉病毒研究所的英文简称命名“WIV1
”，以彰显这一发现的重要价值和属于自己第一个发现的巨大研究成果。这个成果刊载
于2013年11月的《自然》杂志。
就是说，从云南弄回来的这种蝙蝠所携带的类似于sars的 corona virus， 可以不经过
其它受体/宿体，而直接传染给人。 他们... 阅读全帖 |
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C*I
发帖数: 4736 | 22 一直在误导，现在还在误导。 说说明corona virus 不可以从蝙蝠直接传染给人，必须
经过一个中间宿体性的其它动物才能传染给人。所以，病毒发生后，就故意误导全国人
民去海鲜市场找证据，找其它野生动物的麻烦。 而且还是病毒所去找的，找完了还装
模做样化验呀，分离呀什么的。最后把责任全部推给了海鲜市场的动物。可是那种动物
，一直不敢说，说了其它相关已经在人就会去早那种动物监测。 所以压根不说，打马
虎眼。
事实上，早在2013 年，就是这个武汉病毒研究所，已经从来自云南的蝙蝠身上所携带
的corona virus中分离出第一株蝙蝠SARS类似样的冠状病毒的活病毒，其中就包含了类
似于S类型的基因。从而证实这株病毒能够使其接受和SARS病毒相同的受体，并能够感
染人的细胞。对此新发现，武汉病毒所还把它以武汉病毒研究所的英文简称命名“WIV1
”，以彰显这一发现的重要价值和属于自己第一个发现的巨大研究成果。这个成果刊载
于2013年11月的《自然》杂志。
就是说，从云南弄回来的这种蝙蝠所携带的类似于sars的 corona virus， 可以不经过
其它受体/宿体，而直接传染给人。 他们... 阅读全帖 |
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C*I
发帖数: 4736 | 23 Published: 30 October 2013
Isolation and characterization of a bat SARS-like coronavirus that uses the
ACE2 receptor
Xing-Yi Ge, Jia-Lu Li, Xing-Lou Yang, Aleksei A. Chmura, Guangjian Zhu,
Jonathan H. Epstein, Jonna K. Mazet, Ben Hu, Wei Zhang, Cheng Peng, Yu-Ji
Zhang, Chu-Ming Luo, Bing Tan, Ning Wang, Yan Zhu, Gary Crameri, Shu-Yi
Zhang, Lin-Fa Wang, Peter Daszak & Zheng-Li Shi
Nature volume 503, pages535–538(2013)Cite this article
Abstract
The 2002–3 pandemic caused by severe acute respirator... 阅读全帖 |
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r*********s
发帖数: 1027 | 24 发信人: rainingcats (喵喵), 信区: Pre_Resident_Club
标 题: Re: 【读书笔记】 医学十大发现
发信站: BBS 未名空间站 (Mon May 30 23:19:49 2011, 美东)
第七章 Ross Harrison与组织培养
Harrison1870年出生于宾州，母亲很早患癌症去世，父亲长期在俄国工作，由姨妈抚养
长大。（这个Harrison不是编内科学的那个）他从小对自然科学很感兴趣，16岁进入
Johns Hopkins，用功读书，3年念完了大学。毕业之后，他继续留在Hopkins, 跟W. K.
Brookes做胚胎学研究。有一次，有人告诉Brookes教授，法国有个实验室正在做类似
的研究，你要抓紧时间赶快做出来。Brookes教授沉思片刻后回答：我想不出为什么要
匆匆忙忙赶着做研究，如果法国人做的出色，那很好，我就不发表了；如果他们有什么
遗漏之处，我再做补充（这个回答足以让所有NIH的申请者泪流满面）。
22岁时, Harrison去德国波恩留学，在那里遇到他未来的妻子Ida。两个人结婚之前，
Harrison的父亲查... 阅读全帖 |
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r****o
发帖数: 105 | 25 本文献给YL
（十一）核抽提物
上回谈到纯化AP-1转录因子的大致流程。其实在过柱子之前的核抽提物的准备
也是十分关键的。从天然产物中纯化蛋白，如果大概知道蛋白在什么细胞器官，把
细胞器先分离出来作为纯化的起始原料，可以省好多事情。因为细胞器官的分离的
方法已经很成熟了。
核抽提物是怎么准备的呢？首先，融解Hela细胞。我们在这个模块用的细胞都不
是自己长的，而是直接从一个公司Biovest 买来的。据说这个公司有NIH的补贴，
所以价钱不贵。一升media的Hela细胞才要１７刀。冻存在-80度的hela泡在有
glycerol的buffer里面，第一件事情就是要用有镁离子的PBS来冲洗几遍。然后用
一种低渗buffer来重悬细胞。这种低渗buffer盐浓度很低，所以由于渗透压的影响，
hela细胞膜会变得比较脆弱。这个时候呢，把重悬的细胞用Dounce 匀浆器处理一
下,把细胞膜弄破。低渗buffer里头虽然盐浓度很低，但也不是没有盐在里面。主要
有两种成分，一个是10mM KCl ,另一个是 1.5mM MgCl2。KCl没有什么好说的，
可以换成NaCl。MgC |
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w*********s
发帖数: 2136 | 26 Jeffry John Aufderheide
vactruth.com
05/25/2010
http://vactruth.com/2010/05/25/vaccines-rockefeller-social-control/
PART I.
History books proclaim with absolute certainty that the pinnacle of public
health is defined by the polio vaccine program. Disease finally conquered by
science. The polio effort was a benchmark for the public to mentally accept
the concept “shots prevent disease.” However, hidden to most Americans
was an elaborate Public Relations scheme being carefully applied by
Rockefell... 阅读全帖 |
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w*********s
发帖数: 2136 | 27 Jeffry John Aufderheide
vactruth.com
05/25/2010
http://vactruth.com/2010/05/25/vaccines-rockefeller-social-control/
PART I.
History books proclaim with absolute certainty that the pinnacle of public
health is defined by the polio vaccine program. Disease finally conquered by
science. The polio effort was a benchmark for the public to mentally accept
the concept “shots prevent disease.” However, hidden to most Americans
was an elaborate Public Relations scheme being carefully applied by
Rockefell... 阅读全帖 |
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w*********s
发帖数: 2136 | 28 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: whiteclouds (/ 参考消息 /), 信区: Military
标 题: ------ 疫苗产业与洛克菲乐集团 -------
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Nov 27 20:31:19 2010, 美东)
Jeffry John Aufderheide
vactruth.com
05/25/2010
http://vactruth.com/2010/05/25/vaccines-rockefeller-social-control/
PART I.
History books proclaim with absolute certainty that the pinnacle of public
health is defined by the polio vaccine program. Disease finally conquered by
science. The polio effort was a benchmark for the public to mentally accept... 阅读全帖 |
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n**t
发帖数: 45 | 30 【 以下文字转载自 Biology 讨论区,原文如下 】
发信人: royluo ( 罗马情结), 信区: Biology
标 题: 从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记（十一）
发信站: Unknown Space - 未名空间 (Mon May 16 14:19:57 2005) WWW-POST
本文献给YL
（十一）核抽提物
上回谈到纯化AP-1转录因子的大致流程。其实在过柱子之前的核抽提物的准备
也是十分关键的。从天然产物中纯化蛋白，如果大概知道蛋白在什么细胞器官，把
细胞器先分离出来作为纯化的起始原料，可以省好多事情。因为细胞器官的分离的
方法已经很成熟了。
核抽提物是怎么准备的呢？首先，融解Hela细胞。我们在这个模块用的细胞都不
是自己长的，而是直接从一个公司Biovest 买来的。据说这个公司有NIH的补贴，
所以价钱不贵。一升media的Hela细胞才要１７刀。冻存在-80度的hela泡在有
glycerol的buffer里面，第一件事情就是要用有镁离子的PBS来冲洗几遍。然后用
一种低渗buffer来重悬细胞。这种低渗buffer盐浓度很低， |
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R*****w
发帖数: 447 | 31 ankyrin, Thank you very much!
You are right. I checked ATCC. found some HeLa clees are mentioned for suspension culture, such as HeLa-S3, H1HeLa (in media without Ca++)
Most other HeLa cell lines are not mentioned for suspension culture. |
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w*********s
发帖数: 2136 | 32 Jeffry John Aufderheide
vactruth.com
05/25/2010
http://vactruth.com/2010/05/25/vaccines-rockefeller-social-control/
PART I.
History books proclaim with absolute certainty that the pinnacle of public
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j****x
发帖数: 1704 | 33 关于这个问题，刚读研无聊的时候做过不是很严谨的比较，“结论”是和缺氧无关
当时的培养瓶盖还是老式的，不带filter需要自己拧开一个角度的那种，同时养的三种
细胞293/Huh7/Hela，用的invitrogen的普通DMEM培养基，不含hepes。有一次传细胞的
时候没留神盖子全部拧紧，结果第二天发现所有培养基全部变碱，293/Huh7贴壁出现严
重问题，漂浮大量“死细胞”，活细胞形态也非常差。但是Hela没有任何问题，一切正
常。拧开瓶盖之后不到24小时，多数“死细胞”重新贴壁，细胞形态恢复正常，培养基
颜色也回到正常pH范围。这时候我又把瓶盖拧紧，继续培养差不多48小时，所有细胞生
长一切如常，这时候由于细胞已经生长一段时间自然产酸，即便拧紧瓶盖，培养基也不
会变碱的过分。
我的“结论”是，某些细胞（293/Huh7）对培养基pH比较敏感，尤其是在悬浮后等待贴
壁的时候，而有些糙的比如Hela就不敏感，而缺不缺氧，大部分细胞不在乎，尤其是在
短时间内 |
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E*********4
发帖数: 16 | 34 知道本版的牛人非常多，全部大隐隐于市。希望各位大神能帮忙指出mammalian Hela
lentivirus expression的问题。我们试图把一个蛋白从pCMV2-N terminal-Flag
vector上面subclone到另一个lentivirus vector上，然后在Hela里面建立over-
expression stable cell line。用的是psPAX2 and pMD2G在293T里面包装病毒（在
293T里面可以检测到蛋白表达）。问题是empty vector很顺利，但是我们的蛋白没有办
法产生病毒，或者说产生的病毒没有办法感染Hela细胞。我尝试过三种不同的
lentivirus expression vectors，同样的结果。后来怀疑是不是我的蛋白对细胞有毒
性，于是又尝试了另外一个安全无害的蛋白，还是同样的结果。现在我怀疑是不是在做
subcloning的时候，缺了或者多了什么部件？插入的位点是在multiple cloning sites
. 我的insert只包括N Flag-Protein of interest，没有polyA ta... 阅读全帖 |
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f*******K
发帖数: 34 | 35 在博后期间，合成一种Cys特异性的phosphanate tag，用于Cys Proteome， Cys PTMs
，以及the cross-talk between Cys PTMs and phosphorylation研究应用。方法具有
高度的特异性，高效性，已经多家独立实验室验证。
关于方法意义，引用reviewer comment：
1. To my knowledgy, the CysPAT strategy is the first method to
simultaneously
measure cysteine proteome and protein phosphorylation from the same sample,
which is the major novelty of this study.
相关tag合成方法及应用方法，已经申请美国专利。
文章在MCP发表：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27281782
欢迎大家讨论使用。
Abstract:
Cysteine is a rare and conserved ... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 36 1 北京大学生命科学学院魏文胜课题组
我们使用了文章中报道的高效ssDNA，同时自己设计了其他2条针对体内其他基因位点的
ssDNA，与NgAgo表达质粒共转HEK293T细胞与HeLa细胞，2天及5天后，用T7E1检测切割
效率，这三条针对2个不同基因的ssDNA，在HEK293T和HeLa两个细胞系中，无论转染一
次还是在8到12小时后再转染一次ssDNA，都没有检测到切割。
针对敲除后能使细胞有表型变化的某特定基因，我们设计了ssDNA，与NgAgo表达质粒共
转HeLa细胞5天后，发现细胞表现出了一定的对应表型，但是把这部分细胞收集起来提
取基因组，对靶位点测序，没有发现基因组序列的任何改变。
我们针对某特定基因设计了6种ssDNA，用特异的荧光报告系统检测是否有靶点DSB产生
，结果显示所有实验组均没有检测到对靶位点DNA序列的切割活性。
2 中科院动物研究所王皓毅课题组
我们在293T细胞中表达带有Flag标签的NgAgo ，在不同时间点检测NgAgo蛋白表达。发
现转染6小时后开始检测到目的蛋白，随着时间的延长蛋白量增加。在人类293T细胞系
中重复原文章中Figure ... 阅读全帖 |
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w*********s
发帖数: 2136 | 37 Jeffry John Aufderheide
vactruth.com
05/25/2010
http://vactruth.com/2010/05/25/vaccines-rockefeller-social-control/
PART I.
History books proclaim with absolute certainty that the pinnacle of public
health is defined by the polio vaccine program. Disease finally conquered by
science. The polio effort was a benchmark for the public to mentally accept
the concept “shots prevent disease.” However, hidden to most Americans
was an elaborate Public Relations scheme being carefully applied by
Rockefell... 阅读全帖 |
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m****s
发帖数: 18160 | 38 ☆─────────────────────────────────────☆
whiteclouds (/ 参考消息 /) 于 (Tue Mar 22 18:47:29 2011, 美东) 提到:
投诉人： Whiteclouds
投诉对象：我爱宝宝版主mitbbx及版副catdoudou
投诉标题：投诉我爱宝宝版主mitbbx及版副catdoudou大搞新闻网禁误导广大家长
投诉目标：罢免
投诉理由：
1. 事关每个人身心健康。你们凭什么封禁医药界的负面消息和非主流消息？
2. 关于疫苗利弊的讨论早已进入主流媒体了。你凭什么不让大家看到？
3. 药品（包括疫苗）近年屡有recall. 你凭什么禁止有关信息来误导家里有小宝宝的父母去盲目迷信药品质量？
4. 美加庸医遍地都是，医疗事故屡见不鲜。你凭什么制造版面气氛让家长对处方和诊断不过脑子的去盲信？
5. 凡事要听多方面意见，有点科学精神，你们动辄删贴封人缺乏领导版面的基本素质
6. 为人父母要首先自己要学会尊重不同意见，不然以后怎么教育好孩子？
7. 综上所述，建议罢免！
发信人: whiteclouds (/ 参考消息... 阅读全帖 |
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h******d
发帖数: 4761 | 40 找到了这个视屏的出处，以及实验的机构等信息。
本人没有任何立场，大家仅供参考。
（估计版上认得瑞典语的不多，故用google 翻译）
http://translate.google.com/translate?hl=en&sl=sv&tl=en&u=http%
page 3 第一个帖子
Thanks for all the comments. Testet av älgstudsare har utförts av FMV (Försvarets Materialverk) i Karlsborg, ett av världens främsta vapenlaboratorier.
The test of älgstudsare carried out by FMV (Defence Materiel Administration) in Karlsborg, one of the world's leading weapons laboratories.
Testfakta anlitar alltid oberoende... 阅读全帖 |
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r***e
发帖数: 2539 | 41 1. I don't like the concept of CSC either. It seems that more immuno-deficie
nt mice you use, you need less cells transplanted. I wonder if you just use
HELA cells, do you get the same result? then, there is a small number of CSC
in HELA cell culture too?
And what does this mean regarding to clinical practice?
4. More adencarcinomas are more due to mutations (Kras, EGFR), less due to
promoters. I tried different promoters, all leads to adenocarcinomas. I am
switching
to other mutations.
HGTPase:... 阅读全帖 |
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h********n
发帖数: 4079 | 42 I am so glad to read your thought. I would like to discuss a little more.
to 1: the term of CSC is controversy, but what if I say: "In lung adenocarcinoma, there is a population of tumor cells whose potency (in vivo) is much higher than other population in the same tumor. It is important to study this population of cells. How about we call it tumor initiating cell?"
what is your opinion to my above thought?
to 4: I don't agree with you on this point. Most lung cancer model use SPC or CCSP or C... 阅读全帖 |
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r***e
发帖数: 2539 | 43 Thank everyone for the discussion!
As pineseed pointed out, too many topics were discussed here.
But my personal interests are:
1. what is the cell origin of different type of lung cancers?
2. does cell origin or mutation decide tumor types?
3. how to model different type of lung cancer?
HGTPase, it seems you are working in this field (more lung development than
lung cancer?), and I hope you can give your opinions. We can also discuss in
private mails for technique details.
1. ... 阅读全帖 |
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r***e
发帖数: 2539 | 44 上次和大家讨论cancer stem cell 或者cancer initiating cell的问题，受益匪浅。当
时我认为primary tumor中可能存在一小部分的CSC，但是通常用的limited dilution在
免疫缺陷老鼠中长瘤的的方法说服力不强。当时我举例说established cancer cell li
ne比如说HELA，做transplantation的话，也能看到类似的结果，而HELA细胞里难道也有
cancer stem cell吗？今天看到几篇文章，竟然就是从细胞株中分离CSC，他们的说法是
"An alternative approach for isolating stem cell populations is through enri
chment of side population (SP) cells, SP cells are identified by the capacit
y to efflux Hoechst dye"，就是说这些细胞能通过这个机制获得drung resistance。
http://cancerres.aac... 阅读全帖 |
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p******d
发帖数: 3737 | 45 CSC这个概念看你怎么看。我觉得本身它是个毫无意义的概念，除非和临床结合。
临床上CSC的提出一部分原因是因为有一小部分的细胞对chemo有强烈的抵抗能力，在
chemo后导致
肿瘤的复发。这就和你说的sp细胞的概念扯上关系了，因为后来发现这些细胞表达的基
因例如
multiple drug resistant protein导致chemo drug被泵出了细胞外，导致了细胞对这
些药
物耐受，这也是sp细胞用来寻找各个组织干细胞的一个起源。
另外一个临床的原因是转移。很显然，转移的细胞导致新的肿瘤灶形成。这也是为啥
Weinberg实验
室会把CSC和EMT联系在一起了。
不论人类原发肿瘤本身或者建立的细胞系，在细胞表型上肿瘤常常是heterogeneous的
，病理上往
往要划定一定的百分比标准来判断是否某一标志物阳性，例如淋巴瘤的CD20或者乳腺癌
的ER受
体。还有关于你说的hela细胞，hela也是从人肿瘤里面分离出来的永生化细胞株。永生
化或者单克
隆筛选不等于获得的细胞株中每个细胞就在表型上完全一致。根据表面标志物来分，这
些细胞仍然
heterogeneous，尽管遗传... 阅读全帖 |
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s******s
发帖数: 13035 | 46 细胞系被hela污染是很正常的事情，前两年还有CNS的paper说这个事，
大概20%+的其他细胞其实都是hela.
CONTROL |
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l***g
发帖数: 19 | 47 想先做GST-pulldown，然后用pulldown产物电泳银染切胶回收去做MS。问题是，如果我
现在想用细菌中纯化的GST融合蛋白，应该bind多少蛋白到多少的beads上（100ul？）
，然后用HeLa细胞的裂解液来亲和吸附，应该大概用多少HeLa细胞裂解液？我感觉细胞
裂解液少了的话可能结合在GST融合蛋白上的蛋白太少了，在之后洗脱的过程中可能又
损失点，然后在银染的话可能看不出来。如果不用裂解液用动物组织，譬如rat或者
sheep的脑子，大概需要裂解多少克的脑子？多谢！ |
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b***2
发帖数: 348 | 48 就是HeLa细胞在跳舞。HeLa是一种恶性的癌细胞，容易迁移，在显微镜下追踪就像在跳
舞。 |
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w*********1
发帖数: 27 | 49 最近从别的实验室要了一个pEGFP-Tubulin质粒，转染HeLa细胞后本想拍活细胞里的微
观的，但是发现GFP信号无论在间期还是有丝分裂期看上去都是cytosolic without a
sniff of a tubule。起初怀疑是人家给我的质粒有问题，就自己找模板构建载体了，
自己构建了两个载体，一个是Tubulin-EYFP, 另一个是EYFP-Tubulin, 就是一个EYFP在
Tubulin C 端，一个在N端， 测序看读码框啥的都没问题。 但问题也来了，EYFP在
Tubulin C端的（Tubulin-EYFP）质粒表达效率特别低，虽然转染效率还可以，就是
EYFP的信号特别特别弱。 换成EYFP在Tubulin N端的（EYFP-Tubulin）质粒转染Hela之
后，效率倒是相当之后，荧光强度也超赞，但是和人家给我的质粒问题一样，都是
cytosolic without a sniff of a tubule。 请问各位老师有没有遇到相同的问题以前
？谢谢啦。 |
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E*********4
发帖数: 16 | 50 我的这个载体就带有GFP，所以看到的结果是，空载体包装病毒没有问题，感染Hela效
率很高。但是插入我们的基因的病毒感染的Hela就是一片漆黑，完全没有GFP。这是不
是说明病毒没有包装我的质粒？关于Flag－tag，在293T里面可以检测到，信号很强。
谢谢分享经验！ |
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