r******g
发帖数: 600 | 1 http://pnabio.com/products/KOCells.htm
你们看
Cell lines that we have generated knock-outs or knock-ins
HEK293 cells
HeLa cells (hypertriploid)
SKBR3 cells (hypertriploid)
HCT116 cells (diploid)
MCF7 cells (Hypotriploid)
K562 cells (hypotriploid)
CHO cells
NIH3T3 cells
We have successfully generated knock-out clones up to 4 copies in one round.
应该不难做吧
成功率应该不低，好想自己试一下 |
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t***l
发帖数: 335 | 2 你说的cell lines里用PEI只试过HepG2，不好转。
Hela其实很容易转染。 |
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O********4
发帖数: 113 | 3 我也觉得电镜该得，但不幸的是可能性还不如这个大呢，this is life, suck it up。
施这个是毫无疑问的，临门一脚得分，即使别人对这个领域贡献更大也没有用。不过也
许早年做功能的人会跟着得奖。
有意思的是他们用的是S. pompe 的 spliceosome, S. pompe 的spliceosome 一般人不
怎么研究，因为在体外无活性，这恰好成全了解结构。而Reinhard Lührmann他们都用
S. cerevisiae 或Hela cell 里面的spliceosome, 研究出了活性组装过程但不好解结
构。
不管怎么说，这是胰岛素后中国生物最大进展，还是要赞一下。 |
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a*******a
发帖数: 4233 | 4 这就是免疫缺陷小鼠模型。
和50年代给人移植hela结果转移了是一个意思。 |
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v********e
发帖数: 1597 | 6 这种情况你只能一一排除，
首先你的lenti假病毒转染Hela的效率，这种试验，可以找携带GFP的假病毒做。如果效
率不是问题，
第二，你可以拿上清去测P24，检测一下你包的病毒怎么样？或者拿第二次（我一般收
集两次，第一次是转染293T后的24小时，第二次是第一次收集后的24小时，然后用第二
次收集的做转导）收集的上清去抽提DNA去测你的假病毒有没有包装了你的质粒
第三你的flag－tag是不是好用？有些情况下，不好用，除非你已经用这种构建表达过
蛋白，也可以检测的到 |
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v**********m
发帖数: 5516 | 7 我的理解是商业途径来源的hela细胞株已经是单克隆细胞株，所有培养皿里的每个细胞
的遗传背景都是一样的。
你没必要在做稳定细胞株前还再筛选一次。
sure |
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D***a
发帖数: 516 | 8 最近克隆了几个基因到lentiviral载体里，有大有小，大的5k，小的0.3k。在293T细胞
里和包装质粒共表达做病毒，之后感染HeLa，再用puro筛。没感染的细胞都杀死了，感
染的细胞puro筛后活下来的做免疫荧光，转了小基因的细胞只有1%的是阳性，转大基因
的细胞都是阴性。westernblot也做了，小基因的能弱弱的看见，大基因的是阴性。质
粒序列没问题。
为什么puro抗性转进去了，我的基因转不进去？需要经验丰富的专家解答，谢谢。 |
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D***a
发帖数: 516 | 9 另外，我突发奇想，可不可以在hela细胞转染lentiviral载体和表达integrase的质粒
，是不是也能整合到基因组里面去？ |
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G***W
发帖数: 1967 | 10 Hela cell ???
Don't fool me... |
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F*******n
发帖数: 813 | 11 不是那个hela细胞系吗？
我不可能这么落后的，我自己没有亲自养细胞。我一直做in vivo
我看不起你们这些养细胞的。。
哼 |
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r**********1
发帖数: 1004 | 13 作为华理生物化工本科， 发酵专业的研究生。 做过毕赤酵母， 酿酒酵母， Hela，
紫杉醇，发过几篇工艺优化的文章。 不过没有实际真正操作过1000L的反应器（虽然设
计过， 也实习过， 也带学生实习过）。 有没有机会啊？ |
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z********i
发帖数: 610 | 14 找到了两个相互作用的蛋白，各种生物物理的方法证明了他们之间的直接相互作用。但
是，这个两个蛋白公转到hela细胞中，看不到任何的共定位。其中一个蛋白和cilia形
成相关，能到看到它定位在basal body，另一个蛋白功能未知，弥散分布在细胞中，细
胞核信号强一点。自己不是做cilia，对这块不熟悉。请教各位大牛，如何才能看到共
定位？谢谢！ |
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b***r
发帖数: 390 | 15 这两种蛋白可以相互结合吗？ 在hela 细胞有表达吗？ 如果有，说不定你标价的蛋白
和细胞内的天然蛋白结合。 酵母双杂交不是可以观察蛋白之间的结合吗？ |
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发帖数: 1 | 16 人生全部7篇论文：
论文
1,Human Bex2 interacts with LMO2 and regulates the transcriptional activity
of a novel DNA-binding complex. Chunyu Han, Hao Liu, Kang Yin, Yi Xie, Xiao
Shen, Yong Wang,Jiangang Yuan, Boqing Qiang, Yong-Jian Liu*and Xiaozhong
Peng* Nucleic Acids Research, 2005, Vol. 33, No. 20 6555–6565 SCI 8.552
2,GA signaling and CO/FT regulatory module mediate salt-induced late
flowering in Arabidopsis thaliana. Kexue Li, Youning Wang,Chunyu Han,
Wensheng Zhang, Huizhen Jia, Xia Li Plant Growth Re... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 17 This is a good point: Replicable vs. Not replicable.
To claim the replication of another research, one should get the same or at
least similar results
As the original paper using the experimental materials and protocols used by
the authors of
The original paper.
HeLa |
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S**********e
发帖数: 620 | 18 非常深刻的总结！
现在越来越觉得这个仇子龙并不单纯啊，既打韩又给自己台阶下
尤其是那个低于百分之五和p53，kras
谁没事整这两个基因啊，何况和他的神经生物八竿子打不着
HeLa |
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b********g
发帖数: 46 | 19 非常感谢大家热心的回复。
能够成功提取出chromatin是一件令人高兴的事情，不能够证明他是native state实在
是因为不知道该怎么证明。我认为native state必须是在一定的离子浓度，多巴胺, 和
一定蛋白浓度下的。然而这些信息是缺乏的。同时，在做冷冻电镜时，除了chromatin
associated proteins, 其他蛋白是需要除去的。否则，他们会妨碍，阻隔imaging.
眼见为实。目前chromatin领域内，最好的研究工具是（冷冻）电镜了。自从Olins夫妇
和chris woodcock发现了bead-on-a-string structure后，30 nm chromatin 的存在与
否一直是热门话题。体外重构的Li-zhu style double double helix无疑是令人眼前一
亮的研究。然而，ping zhu 最近发表的一篇30-nm chromatin fiber in Hela cells的
研究，并不是让人信服。他用的是目前最好的in situ 电镜成像法（cryo section,
Focus Ion beam minin... 阅读全帖 |
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c********n
发帖数: 225 | 20 问题总结
1.实验材料来源（Hyclone vs Gibco的培养基，以及原文没有特别提到的“Biolab”T4
PNK）会影响可重复性吗？
HyClone以及其他 T4 PNK 供应商，你们是不是要想一想自己的问题在哪里了？
还有，ThermoFisher可要注意了，你们的Lipofectamine® 3000可能有问题！
2.原文用于plasmid和guides （DNA）的0.5xTE，更新后 改成NaOH调出来的pH8.0的水。
先不谈怎么来用NaOH调出这个稳定的没有缓冲液的pH8.0的水，如果原因是由于NgAgo对
于EDTA这么的敏感，那么原文中用到的大约0.015-0.025mM的EDTA，是怎么做出的NBT文
章中的结果的？
3.关于细菌污染问题。从新闻报道和照片上看，韩春雨老师他们做实验是经常不戴手套
的，看来他们这样做细菌污染机率会减少。所以这些重复NgAgo实验的人们，你们重复
NgAgo实验的时候，带手套了吗？你们的实验材料有没有被细菌污染呢？
4.看来Mg2+的浓度，在不同的cell type也需要optimize
5.看来ss gDNA 二次转染... 阅读全帖 |
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i*****e
发帖数: 633 | 21 谢谢楼上二位指教。我也觉得癌细胞不能体外培养好像很不make sense。二楼说的是不
是hela cell。 |
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g*****x
发帖数: 3283 | 22 Have you ever heard of HeLa? |
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s******y
发帖数: 28562 | 23
你的朋友说的是从病人身上直接分离出来的原代癌细胞(primary cancer cell)。
的确是很难培养的，不同来源的癌细胞需要用不同的特殊培养液和环境，而且很多会死
掉。因为不同的癌细胞也有不同的恶性之分，有的癌细胞需要某些特定的环境才能生长
，其实生物学里面针对这个还有一个所谓的肿瘤环境的研究方向。
至于有些同学们给你回复说的Hela cell, 那些是在培养的癌症原代细胞里面被筛选出
来的一些生长特别强的癌细胞，可以在大部分培养环境下生长。
至于你说的那些干细胞啊 血脑屏障细胞 肝细胞之类，其实大部分都是那些经过体外训
化的有了一定变化的细胞，并不是原始的体细胞。如果是在人身上直接分离出来的原代
体细胞（(primary somatic cell)，培养起来也是非常麻烦的，也是需要非常特殊的培
养液和环境的。 |
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发帖数: 1 | 24 哇，胖老师好久不来，重出江湖，带来一股清风。
[在 sunnyday (胖头鱼。按斤卖就赚了) 的大作中提到：]
:你的朋友说的是从病人身上直接分离出来的原代癌细胞(primary cancer cell)。
:的确是很难培养的，不同来源的癌细胞需要用不同的特殊培养液和环境，而且很多会
死掉。因为不同的癌细胞也有不同的恶性之分，有的癌细胞需要某些特定的环境才能生
长，其实生物学里面针对这个还有一个所谓的肿瘤环境的研究方向。
:至于有些同学们给你回复说的Hela cell, 那些是在培养的癌症原代细胞里面被筛选出
:来的一些生长特别强的癌细胞，可以在大部分培养环境下生长。
:至于你说的那些干细胞啊 血脑屏障细胞 肝细胞之类，其实大部分都是那些经过体外
训化的有了一定变化的细胞，并不是原始的体细胞。如果是在人身上直接分离出来的原
代体细胞（(primary somatic cell)，培养起来也是非常麻烦的，也是需要非常特殊的
培养液和环境的。 |
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b*******H
发帖数: 830 | 25 虽然我也是外行，但以我多年来与细胞学家打交道的基础上，认为你那朋友说的是对的。
绝大多数原始的肿瘤细胞是没法在碟子里培养的。典型的所谓HeLa细胞，已经不是真正
意义上的肿瘤细胞了。能在培养的这些所谓肿瘤细胞都是transformed细胞。在一个合
作的项目里我们曾经犯了类似的错误，声称我们用这些“肿瘤细胞”做了这些那些，得
出了如此的结论，结果被评审专家一顿臭批，被骂外行。 |
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s*********y
发帖数: 292 | 26 得，你们也别重复了。你们从ATCC买的293T，HeLa什么的，统统都污染了一种东西。有
这个东西是做不出来NgAgo的。虽然韩的细胞能做出来，然而他的细胞因为停电都死了
，所以这个问题以后变成了一个历史学的考证问题，类似于“秦始皇他爹到底是不是吕
不韦” |
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c*********r
发帖数: 1312 | 27 谢谢分享这篇文章！刚才zxt也给我发了这篇文章，一定仔细看看。
这篇文章是用hela细胞sort之后做的吧？之后有人follow他们的工作在其它体系里做过
吗？我觉得用海胆做的话有两个优势，一是大量天然的同步的细胞，而是胚胎发育过程
里做。前者可以保证材料的可靠，而且和癌细胞有些区别；后者的意义在于也许可以找
到一些在胚胎发育过程中重要的调控机制。缺点也很明显，就是非主流生物。 |
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发帖数: 1 | 28 仇子龙的声称：
目前总结下我自己实验室对NgAgo的实验结果。
1，NBT Fig3c实验，对共转染的质粒表达的GFP蛋白确实可以看到显著的抑制表达作用
，但是DNA水平的切割并未看到，这个实验里面因为被切割的质粒有可能被降解，检测
不到突变也不能说明对DNA没作用，当然也不能排除，也许，NgAgo并非作用在DNA水平
对基因表达进行了抑制等可能性。
2, 基因组水平的实验重复，
a. 我们用NBT文章中的一模一样的ssDNA与薛天老师带回来的NLS-NgAgo进行实验，在
293细胞中无法重复NBT文章中的dyrk1a等基因的切割与Indel等等。没有在Hela细胞中
进行实验。
b. 我们自己设计了针对人源的kras, p53等基因的ssDNA，分别在293细胞中human kras
, p53基因上看到过测序水平的indel，且是ssDNA靶点区域的deletion，但是频率不高
，低于5%，同批比较的cas9切割效率20%。
c， 我们自己实验室还在重复，优化各种条件，比如筛选等等。
3，这是我们自己实验室的结果，其他的老师的结果我没有发言权，不评论
4，我呼吁一下，目前这些实... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 29 新发现丨细胞常温运输的高效简易方法！
2017-06-03 邓文生 等 细胞
2017年4月18日，武汉科技大学生命科学院邓文生教授在美国公共科学图书馆的期刊上
发表一篇题为“The analysis of viability for mammalian cells treated at
different temperatures and its application in cell shipment”的研究论文。主
要验证了在室温下运输细胞的简易方法的可行性。
目前，传统的细胞运输方法包括冷冻储存运输和充液法。细胞存活率较高，但是都只
能短距离运输，花费高。近几年，也还有一些关于细胞运输方法改进的报道，例如有用
agarose胶或matrigel基质与细胞混匀后，再在室温运输。这种种方法都非常繁琐复杂
，影响因素较多。
邓教授在英国做实验时，一个小的失误，意外发现室温下放置的细胞在第二天仍能保持
较高的活性。就想是否能够直接在室温的条件下运输细胞，从而简化细胞的运输方法。
为了验证这个方案的可行性，该实验室采用其常用的细胞系M2进行一系列验证。首先确
定细胞密度为1*105 ... 阅读全帖 |
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z********i
发帖数: 610 | 30 我就是这么做的，用HELA U2OS细胞。有一些文献上列出来的数据是70%左右，而我看到
的很少。
duplicate |
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g**********y
发帖数: 423 | 31 气功外气的抗肿瘤作用及增强免疫功能机理的实验研究(一)——气功外气对体内抗肿瘤
转移的作用
曹雪涛 叶天星 高也陶
【摘要】：正 已有报道,气功外气对体外培养的肿瘤细胞如胃腺癌79-01细胞、Hela细
胞、肺腺癌细胞、以及肝癌BEL-7402细胞有直接杀伤作用。临床上也有人用气功外气治
疗各种肿瘤患者,据称有效,但尚缺乏直接实验依据,对其抗肿瘤机理也不甚了解。为了
探讨气功外气在体内确切的抗肿瘤作用,本文以实验性动
【作者单位】： 第二军医大学 第二军医大学 第二军医大学附属长海医院 |
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s*******w
发帖数: 1879 | 32 这段正好跟我最近在看的那本讲hela的书重了。
很亲切。赫赫。
谢谢。
K. |
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l***i
发帖数: 2 | 34 各位虾虾们，说一下俺的情况，大家帮忙参考参考啦，感激不尽。毕业有个一年半载列
，一直在学校做tech , master美国拿的，就是千千万万做molecular biology的中的一
个小不点儿。Tech的工作死气白咧的往medical上靠，现在的lab是在medical school里
面，美其名曰 molecular and cellular medicine，做hela, 平日里的工作就是构建
几个mutation constructs, 纯化纯化蛋白，跑跑胶，最多搞个HPLC, FPLC啥么的，本
来还很有希望做个蛋白crystal, 刚刚听到不幸的消息被人抢了先，我沮丧阿~~~
老早就想着回学校去上课，俺不像很多虾虾们，牙一咬脚一跺就去了cs, statistic了
，俺没有出息的舍不得这个学了快十年的东东，（俺美丽的青春岁月啊~~~，）总是想
往上面靠靠（除了这个啥也不会啦）。想当年念大学的时候，就跟别人吹牛，说我毕业
了要进窑厂， 阿错了，是药厂，为解救人类开发新药，唬得人一楞一楞的，自己也觉
得哈伟大。
下面问题就严肃了，为自己想的几个办法，厚着脸皮给一些跟本 |
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T*********r
发帖数: 11175 | 35 之前听Hagiwara提到这想法
今天听了他的talk
http://arXiv.org/abs/0908.4403
很牛的想法
他们现在已经把helas改成NVIDIA显卡上的GPU可用
comfirm了很多过程，比如multijet＋w／z／ttb。。。
比CPU快了100倍 |
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s*****e
发帖数: 172 | 36 请问：由哪位知道怎样去inhibit活细胞（Hela cell)里面的kinesin (motor protein)?
或是有没有可以买到的药物？谢谢先！ |
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p******e
发帖数: 5174 | 37 凡是和理科有关的东西, 我见了一律眼晕
为啥她的细胞那么长寿, 她却死了?
呼唤儿童版的科普
到保
始被
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s**********s
发帖数: 7387 | 39 还是HeLa cell好，今天不想换就不换了，明天换也无所谓 |
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