s******s
发帖数: 13035 | 1 要长的快，容易养，最好能in suspension一类的，但是不能是hela这样
不正常的东西。最好是不用自己generate的可以买到的，但是要求要一公一母的。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 2 293细胞是男的还是女的来的？
我知道Hela 是女的。
另，293细胞其实应该更接近癌细胞吧 |
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a***u
发帖数: 155 | 3 我要用lipfectamine转siRNA，hela 细胞，是在20 cm的大dish里直接做好呢，还是先
在 10 cm的dish做transfection，然后移到 20 cm的大盘子里面长两天？我很讨厌用
lipfectamine，太毒了，但老板不愿意另买试剂了
谢谢！ |
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e**r
发帖数: 1144 | 4 Hela细胞，在没有血清的DMEM里培养的
DAPI染色发现细胞周边有很多部位被染色了
DIC下聚焦到顶面，发现表面变得很粗糙，这些粗糙的类似囊泡的东西可以被DAPI染色
可以确定细胞没有污染
这些东西是什么结构？ |
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j*******e
发帖数: 59 | 5 Please help me find the fulltext of the two papers:
1) Barnaby SN, Yu SM, Tsiola A, Fath KR, Banerjee IA., pH dependent
spontaneous growth of ellagic acid assemblies for targeting HeLa cells.
Journal of Nanoscience and Nanotechnology. 2011 Sep;11(9):7579-86.
2) Hui Ming Peng et al., 2011, Preliminary Study on Systematic Modeling and
Optimal Control of Dual Delivery Nanocarriers for Bone Regeneration.
Advanced Materials Research, Vol 282-283, pp147-152
Please send the papers to j*******[email protected]... 阅读全帖 |
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e**r
发帖数: 1144 | 6 同样的培养箱里其他细胞就没问题
有一批Hela用的是一样的培养基，没有这种现象
了？ |
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w*********n
发帖数: 439 | 8 如果就是把几个诱导凋亡的基因的表达载体转染
到哺乳动物细胞系比如293或者Hela，然后看看有没有凋亡的marker，比如DNA Ladder
，就像王晓东以前做的那样是不是已经过时了？ |
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s******y
发帖数: 28562 | 9 专业的发酵罐非常贵，一般实验室是买不起的。
我的建议是用Hela cell悬浮培养。对培养基要求不严。 |
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s*****g
发帖数: 87 | 10 各位有谁试过直接把RNA转进Hela 或者Hek293 细胞？
我们经常用lipofectmin 2000 或者 FuGene 转plamsid，根据原理上来看，转染DNA和
RNA应该是一回事，是否可以用同样的方法转RNA?
还有，转入细胞的RNA要多久会被degrade？有没有什么方法延缓RNA被细胞降解？
多谢！ |
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d****e
发帖数: 13 | 11 What is this? I transfected Hela cells with p27 fused to GFP by calcium
phosphate method. The GFP fluorescence localized to nuclei but there a few
bright spots in the nuclei corresponding to the bubbles under bright fields.
Is this normal? are those spots auto fluorescent? |
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c*******0
发帖数: 190 | 12 最近在研究一个核蛋白的功能，需要用到GFP-tag的质粒转染...实验室只有含小鼠序列
的质粒，试过转染到Hela和MCF7细胞表达都比较好...而且这个蛋白在小鼠和人的同源
性在95%左右...求问用这个质粒做出来的结果投稿会被拒么？ |
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a*****n
发帖数: 2835 | 14 原来如此，难怪我之前用HELA cell看到很不正常的细胞周期
a |
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t**********8
发帖数: 223 | 15 我的只是普通的cell line, 就是hela和另一个primary cell 比。我查了一下“ERCC
spike-in”，感觉主要是rna seq的时候用，不知道现在大家是不是qpcr也用了？ |
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s******y
发帖数: 28562 | 16 Mammalian cell 里面很多蛋白本身就有 4xHis, 会被Ni-NTA resin 一起
纯化拉下来。所以你的蛋白不能在如此多的背景蛋白中被看到。
如果你真的要用这个方法纯化蛋白的话，我的建议是：
1。用大量Hela 细胞，悬浮培养。
2。用high glucose medium.
3. 在你的蛋白上再加一个tag, 进行双重纯化。如果实在不能再加一个tag的话，也必
须至少在NTA-NI resin之后进一步用ion-exchange column + size exclusion column
进行再纯化。
COOMASSIE |
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m******h
发帖数: 38 | 17 Hela cell, 30nM perfect. |
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z********i
发帖数: 610 | 18 细胞是hela，glucose转运用glucose meter测的medium中glucose的含量，没有用
isotope。但是glucose代谢用的是isotope 3H标记的glucose，测isotope释放。 |
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l*******n
发帖数: 554 | 19 hela应该都会有。
不过你说的这种现象我们也碰到过类似的，但因为我们的电生理实验本身就是功能性实
验，所以我们的解释就是表达增多，但他们不工作，具体机理未知。 |
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c*****i
发帖数: 1392 | 23 与细胞大小形态有关，我以前用的两种细胞大概需要4x10e4/well，在96孔板。自己做
个dilution看看最好。 |
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z********8
发帖数: 818 | 26 下图绿色是Bodipy染的lipid droplet，红色是overexpressed protein。 请问大家这
个protein是在什么结构上？ 谢谢！ hela cells。 |
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J**l
发帖数: 493 | 27 一次次的跌跟斗，看来教训还是没够
前段时间做个实验需要某cell line，刚好实验室一个senior postdoc有，他也正在用
它做实验，于是跟他要了些，同时跟他简单讲了我需要用这个细胞做哪些实验，他听了
以后没有任何comments。
我拿到细胞以后用载体引入了一些表达constructs（都有GFP tag），然后花了很长时
间做出了几个stable cell lines；接下来，我打算用lentivirus来转染表达shRNA的载
体，这就需要drug selection（puromycin）来杀死未转染的细胞来实现得到stable
cell的目的。于是我就做了个kill curve，然后就很悲惨的发现这个细胞怎么杀都不死
。。当然这话夸张了，事实上是我需要正常用量10倍的药量才能杀死大部分的细胞。我
只好发信问这个给我细胞的postdoc，结果人家轻飘飘的回了一句话：Yes, the cells
I gave you are puro resistant. 我看了这话真是出离愤怒！我当初跟他讲过我以后
会用到puro selection，他听了没反应；而且，我觉得这是co... 阅读全帖 |
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c*******0
发帖数: 190 | 30 Just lower down the Plus reagent dosage by half from the protocol they
provided. The cytotoxicity is not a problem. |
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X******n
发帖数: 914 | 31 多浪费，快去sigma买一瓶Pei,配上1升够你实验室用几十年了。效率不比lipo2000差。 |
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X******n
发帖数: 914 | 32 MEF我很少瞬转，不过很多难转的肿瘤细胞都可以用PEI转的。 而且你可以它做病毒。 |
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m********o
发帖数: 13 | 35 同样质粒转293还好 你用western测还是用荧光？ |
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m******5
发帖数: 1383 | 38 楼主是专门做转运的？
可以考虑做 Invitro-nuclear import assay
就是用纯化的转运体系在digitonin permeablized 的Hela 细胞核上做。
因为整个体系都是体外重建的，理论上不会出现非直接影响的情况
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3261132/
不过好奇地问一下，这个化合物阻断核转运你们是propose和哪个转运蛋白结合？
importin beta? alpha? or exportin?
如果真的只特异某个subtype的importin的活性的话还是很有意思的，不过鉴于楼主能
在oocyte里做出来，可能性不大。 |
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j****x
发帖数: 1704 | 39 去年11月13号，NIBS李文辉博士的研究团队在eLife创刊号上首次发表了其开创性的研
究成果，即NTCP为HBV病毒的功能性受体，揭开了该领域近20年来一个未解之谜。随后
，这一发现及其相关报道立刻在本版引发的热烈的讨论，赞美，质疑，讥讽，各种论调
此起彼伏，着实热闹了一阵子。之前长期潜水的我，当时也不甘寂寞，一抒己见（http://www.mitbbs.com/article_t/Biology/31752161.html）。
转眼间一年就这么过去了，今天查资料的时候无意中看到，该文在google scholar上显
示的引用已经超过了40次。然而当时的各种讨论，想必已被大部分人所遗忘，回头再看
，不由得会心一笑。节前索性做一回顾以资纪念吧。
eLife首文之中，受质疑和诟病最多的，应该算是细胞模型（HepG2/Huh7）上并不理想
的感染/复制效率，以及非肝源性细胞上感染实验的缺失。尽管根据已有的知识和经验
，前者并不意外，后者乃是时间问题，但在当时，确实让很多尤其是非本领域的人士心
存疑虑，NTCP究竟真的是受体，或仅仅只是一个复制相关必需因子。
在今年10月份上海举办的第2... 阅读全帖 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 40 用GFP UV-corissing immunoprecipitated mRNAs assay
pls refer,
>
GFP-Based Method for Detection of mRNA-Protein Interactions
HeLa cells expressing N- or C-terminally EGFP/YFP-tagged proteins (Table S7)
were induced with tetracycline, irradiated with UV light, and lysed. GFP-
binding protein (GBP; GFP agarose trap, Chromotek)-immunoprecipitated mRNAs
were detected using an oligo(dT)25 probe fused to TRed dye (Sigma).
RNAs coimmunoprecipitated with GFP/YFP-tagged proteins were identified by
RNASeq. D... 阅读全帖 |
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E*****e
发帖数: 54 | 41 就是一般的质粒如pEGFP－N1， 转到Hela或者293T里
还有一个问题是，质粒会随细胞分裂而复制吗？ 谢谢 |
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s**2
发帖数: 1287 | 42 老子最近也是一个日本实验室的结果重复不出来。
HeLa细胞，加药一个小时，收细胞蛋白，做Western。够简单的吧，就是重复不出来。
新买的药。用了两个公司的抗体。我试了三次未果，大怒，想发邮件质问他们。老板说
：算了，咱们做别的吧。 |
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s****l
发帖数: 395 | 43 necroptosis只是necrosis的一种(HeLa cell没有RIP3同样可以necrosis)，其他的
necrosis好像研究的不多 |
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k***g
发帖数: 4904 | 44 这个。。我也是觉得Teflon属于非常惰性。。。可是我们实验中用到的Hela和HepG2确
实是长在Teflon PFA microchannel里了，而且PDMS channel更是常用来养细胞，这个
是确实观察到的现象啊。所以我才想问问有什么其他原因没有。
,
Edition, |
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r******k
发帖数: 446 | 45 就是我overexpress p53的一个mutation进到hela cell，然后做western。 我不知道那
些是unsepecific bands 还是因为我lysis buffer不强 p53有dimer之类的没打开。。 |
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d**********g
发帖数: 129 | 46 还有组织样品啊，可以测序啊，提蛋白啊，知道HeLa细胞的来源吧？只是这样就要有道
德问题。
另外个人认为，解剖学，显微镜以及这个基础上衍生的组织学和微生物学，真是现代医
学的基础。当然分子医学做测序位点，现在临床上也用，面没有那么广 |
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v*******e
发帖数: 11604 | 47 我是民科，给你回答一下：
因为DNA damage。这是积累性的，所以必然会衰亡，否则细胞成了癌细胞，就和Hela细
胞那样，不衰亡但是主人死了。
DNA damage导致细胞衰亡。多细胞生物进化出机制，DNA damage会触发某些pathway，
导致衰（老，senescence）or（死，apoptosis）亡。
能，方法：1. 饥饿，引起macrophage，细胞新陈代谢发生变化；2.远离破坏DNA的东西
（辐射，致癌物质。。。）3.氧气饥饿。。。4.telomerase。。。（双刃剑） |
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P*******D
发帖数: 523 | 48 Thanks, ArtyArty! This probe does not have organelle specificity, as we
discussed in the paper. so we cannot distinguish between the cyto and mito
pools of GSH. this will certainly be our next step.
In terms of toxicity, we have not measured IC50 yet. during the 1-2 h
experiment, we did not observe any apparent toxicity. However, this does not
mean it does not have long term toxicity.
The highest probe concentration we used was 1 uM. For HeLa cells, we can use
the concentration as low as 20 nM. ... 阅读全帖 |
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e****p
发帖数: 354 | 49 在HELA 分别和一起中KNOCKDOWN 2 基因A和B，先前已证明两者coIP.
用WESTERN测P21, KNOCKDOWN A P21上调2倍，KNOCKDOWN B P21也上调4倍，但同时
KNOCKDOWN A和B，P21反而不变了，没有协同效应？ 百思不得其解。
请教各位大侠！是否有这样的例子，如何解释啊。 |
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s******y
发帖数: 17729 | 50 用另外一个你熟悉的给你解释吧，一般software design里面有个OCL，也就是对于特定
的某个应用的时候是有OC，细胞复制也是这样一个道理，正常细胞有个限制的，癌细胞
不受这个限制，比如经典的模式hela细胞就是突破那个限制，如果你真有兴趣，给你一
个关键词 hayflick limit，你可以放狗
崩溃 |
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