t****f
发帖数: 366 | 1 以前没有做过cell biology,现在想用fluorescence labeling看看感兴趣的几个蛋白在
细胞中的位置动态. 他们主要在cardiomyocyte的作用. 请问有经验的xdjm们用什么样
的cell line比较合适? 希望是普通cell culture就能deal with的, 不用用到动物, 因
为我们这儿不能做.
谢谢!! |
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i****g
发帖数: 3896 | 2 北大邓宏魁和汤超发的：
邓宏魁与汤超研究组在《细胞》（Cell）发表封面论文报道细胞重编程过程中的创新方
法和理论
日期： 2013-05-27 信息来源： 生命科学联合中心
北京大学生命科学院邓宏魁研究组和北京大学定量生物学中心汤超研究组合作，首次证
明小鼠体细胞重编程可由调控分化的基因完成，并在此基础上提出细胞命运转变的“跷
跷板模型”。2013年5月23日，该成果研究论文“Induction of pluripotency in
mouse somatic cells with lineage specifiers”于《细胞》（Cell）期刊以封面文
章形式在线发表。《细胞》同期还配发了希伯来大学Nissim Benvenisty教授对于该工
作的评论文章。
“Seesaw模型”的landscape图
细胞命运决定的“跷跷板模型”
2006年，日本科学家Shinya Yamanaka发现向小鼠体细胞转入胚胎干细胞特异因子（
OCT4, SOX2, KLF4, c-MYC）可以完成体细胞的重编程。在此之后，细胞重编程领域普
遍认为向目标细胞状态的转变需要靠在目标状态中特异高表达的... 阅读全帖 |
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i****g
发帖数: 3896 | 3 邓宏魁今年爆发了，又一篇Science：
《科学》（Science） 杂志发表北京大学邓宏魁团队的重大研究成果——使用小分子化
合物逆转“发育时钟”
日期： 2013-07-18 信息来源： 生命科学学院
7月18日，国际学术权威杂志Science杂志（Science Express）刊登了北京大学生命科
学学院邓宏魁教授和赵扬博士带领的研究团队在生命科学领域的一项革命性的研究成果
——用小分子化合物诱导体细胞重编程为多潜能干细胞。该成果开辟了一条全新的实现
体细胞重编程的途径，给未来应用再生医学治疗重大疾病带来了新的可能。
在这项研究中，邓宏魁团队仅使用四个小分子化合物的组合对体细胞进行处理就可以成
功地逆转其“发育时钟”，实现体细胞的“重编程”。使用这项技术，他们成功地将已
经特化的小鼠成体细胞诱导成为了可以重新分化发育为各种组织器官类型的“多潜能性
”细胞，并将其命名为“化学诱导的多潜能干细胞（CiPS细胞）”。
哺乳动物细胞只有在胚胎的早期发育阶段具有分化为各种类型组织和器官的“多潜能性
”，而随着生长发育成为成体细胞之后会逐渐丧失这一特性。人类一直在寻找方法让已
分化的成体... 阅读全帖 |
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s****9
发帖数: 932 | 5 不知道楼上的两个人怎么回答你的问题的？你的问题这么笼统。
你是想overexpress BM－derived dendritic cell还是splenic dendritic cells，还
是tissue dendritic cells？Human的还是老鼠的？各种感染都有不同的protocol？In
vivo还是In vitro？有的retrovirus效果就非常好，有的lentivirus也很难。
楼上的回复的就随口说说，也不attach文献什么的，不知道楼主获得有用信息没有？
哎。。。。 |
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s*******y
发帖数: 136 | 6 哪位讲讲 inflammatory cell 和 tumor cell中 glucose-6 phosphatase的比较？
这个版上的大牛很多，肯定有人懂的。 |
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l*******u
发帖数: 449 | 7 i don't understand why Cell Stem Cell will accept the MDS paper. Basically,
it is very similar to the Cell paper about breast cancer. Have to say that
the animal work itself is well done. |
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s*******7
发帖数: 399 | 8
听前辈们说好像只要是Cell和Nature有竞争关系的99%的可能性Cell会完败。
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呵呵，cell系列那个剩下1%能胜出的大概就是 neuron（不仅今年的if，明年neuron继
续领先nature neuroscience几乎成定局）。 |
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w**f
发帖数: 38 | 9 To define MMTV-Cre expression pattern, I crossed MMTV-Cre mice with Rosa-YFP
reporter mice. Very nice GFP fluorescence signal was seen in ductal trees
of Cre-postive/Rosa-YFP (+/-) mouse mammary glands. I then isolated mammary
epithelial cells using the Stem Cell kit (Collagenase/Hyaluronidase
digestion). No GFP-positive cells were detected using FACS analysis. Can
anyone give some suggestions on how to preserve GFP for FACS? Or can anyone
recommend one good protocol to cut sections from frozen ... 阅读全帖 |
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T**********r
发帖数: 287 | 10 绿卡申请准备中，已审了6篇，review要突破个位数，方向为development, genetics,
cell division, cell death, phagocytosis, endocytosis, reprogramming, stem
cell, regeneration, and diabetes
请站内联系，多谢了！ |
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h*****s
发帖数: 153 | 11 Molecular Cell和Cell Metabolism是什么档次的杂志？和Nature子刊比呢？对找教职
有帮助吗？ |
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h*****c
发帖数: 505 | 12 要多少钱啊？
都要买些什么东西啊
我们这边做一些表面处理的试验，想检测一下处理后材料的生物相容性什么的，准备做
一下cell culture study, 下面是从文献中找到的试验方法
Cell culture experiments were performed using mouse pre-osteoblast
MC3T3-E1 subclone 14 and rat fibroblast Rat1 cell lines provided by
American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA). Disks
of the titanium substrates with a diameter of one centimeter were placed in
24-well culture plates and incubated in alpha minimum essential medium
(a-MEM, Invitrogen Corporation, USA) and Dulbecco’s m... 阅读全帖 |
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s******y
发帖数: 28562 | 13 和前老板写的一篇文章，投Cell Metabolism被拒了，然后主编建议我们转投Cell
Report. 不知道他们是真的觉得我们的文章适合那个杂志，还是现在cell集团的标准拒
信都是这么写的。 |
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x*****p
发帖数: 38 | 14 cell research有认可度？cell reports好歹算个cell子刊，虽然是open access的。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 15 和前老板写的一篇文章，投Cell Metabolism被拒了，然后主编建议我们转投Cell
Report. 不知道他们是真的觉得我们的文章适合那个杂志，还是现在cell集团的标准拒
信都是这么写的。 |
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x*****p
发帖数: 38 | 16 cell research有认可度？cell reports好歹算个cell子刊，虽然是open access的。 |
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Z******t
发帖数: 206 | 17 制造iPS的四个基因oct4 klf4 sox2 myc
可不可以先做stable cell line stably 表达其中三个
再转染剩下的那个基因得到iPS cell
这样生成iPS的效率会不会比同时转染四个基因高？
生成的iPS cell里外源基因表达都会被silenced
那如果只转染其中三个基因 再做selection 是不是可以稳定表达这三个外源基因不被
silenced？ |
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A******d
发帖数: 571 | 18 iPS cells, glycocorticoids, and/or neuronal progenitor cells
有没有以上关键字方面的专家？感兴趣的同学请把相关简历粘帖发给我站内信箱，我会
发出审稿邀请。谢谢！ |
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b**z
发帖数: 1351 | 19 看发表的文章质量阿
另外，除非CELL想砸自己招牌想以后大放水挣钱
否则，这个CELL REPORTS会比国内的cell research发展前景好 |
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s*******7
发帖数: 399 | 20 是的，阿戈推测 Cell Reports 第一个IF在 6.7 左右（2014年6月出来）。
貌似简写CR都是不错的杂志: Cancer Research, Circulation Research, Cell
Research, Cell Reports。
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“阿戈”即“阿根廷探戈”
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a*******a
发帖数: 4233 | 21 你有其他文章什么的么，如果没有，想在美国找工作，绝对cancer res.认可度更高。
如果你已经有了几篇文章为了绿卡考虑，我建议cell res. cell res 13年影响因子可
能要破15，更方便吹
好。 |
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j******1
发帖数: 1315 | 22 我们用细胞筛选药物，看到细胞G0/G1 arrest，细胞死亡，想做点机理。cell
necrosis最常用的方法有哪些？请大牛指点。 |
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D*a
发帖数: 6830 | 23 iPS的来源现在是吵的一个点，到底是每个细胞都有potential （stochastic model）
还是只有一部分细胞有potential（叫什么model来着），双方CNS灌水中，还没有定论
，至于就算证明了只有一部分细胞能被重编程，也不一定就是这个Muse cells
我是stem cell（未）入门级水平 |
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b********g
发帖数: 46 | 24 请教，
最近遇到个棘手的问题，如何把plasmid transfer to neural stem cell? 查到一些方
法，如1)直接incubation plasmid with cells 2)电击 3）virus。不知道如何使用
virus transfect these neural stem cells? 有没有方法介绍或者试剂盒？ |
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h********0
发帖数: 944 | 25 很多研究caner的文章一开始都是拿fibroblast cell做in vitro的实验，而不是
拿cancer cell line, 这是为什么? |
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h********0
发帖数: 944 | 26 So if you have some discovery in fibroblast cells, how do you translate it
to cancer cells? |
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m*****y
发帖数: 857 | 27 【 以下文字转载自 WashingtonDC 讨论区 】
发信人: mystery (如果信箱满了，可以写信给Jasony), 信区: WashingtonDC
标 题: job opportunity (cell therapy)
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Aug 6 20:48:14 2014, 美东)
small-sized pioneering biotech company in Montgomery county looking for a
manufacturing associate.
contact me if you
1. have MS/BS in biology etc
2. Work experience in cell therapy
3. Experience in GMP cell banking is a plus.
4. opt, j2, or H1 transfer ok. |
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z*****0
发帖数: 4 | 28 求审稿机会－Breast/Prostate cancer, stem cell, cancer stem cell, gene
expression regulation
希望牛人推荐一些审稿机会！ 小弟已经审过一些小杂志，包括Plos One. 帮老板审过
SC, CSC, NCB. 谢谢！ |
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p*******y
发帖数: 133 | 29 总觉得将来十年stem cell技术会有长足发展，或许存cord blood是明智的。
不过最近随便翻了些信息，好像现阶段用自身cord blood能治愈的病不太多，用到的几
率是几千分之一。 而且最近stem cell的研究好像用体细胞可以转换成stem cell. 如
果这样的话，cord blood是不是将来就没什么特殊用处了？
还有如果有多个小孩，是不是每一个都要存呀？
多谢指教 |
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g*********3
发帖数: 177 | 30 赞分享。
你举得例子可能和TF的versatile有关（本人不是做mouse的，可能没有理解对），cell
-type specific enhancer/TF我觉得在有些例子里不一定全对。
第二种方法感觉不太容易实现啊，很多基因的表达都普遍（不知道有没有理解对）。
对于marker，做mouse的理解是什么：用于FACS的还是能够induce regular cells into
specific stem cell的marker？
（对于你的例子，我有一些分析过的data肯能帮你能explain一些东西 已发邮件。）
谢谢。 |
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z****u
发帖数: 1007 | 31 lineage tracing和transplantatation研究的是两种不同过程里干细胞的反应。
lineage tracing是看的homeostasis, transplantation看的更类似于injury repair.
这两种过程里干细胞的来源，potential可以很不一致。相比下，lineage tracing研究
的更接近生理过程，后者更具有实际应用价值。
transplantation后的重建曾经是很多干细胞研究的金标准。但具有transplnation 后
重建组织功能的细胞却有可能对homeostasis没有contibution. 一个例子是nestin+
MSC. transplantation实验说它们能能在transplantation后成骨，但正常homeostasis
过程里其对骨的contribution很少。另外一个例子是NG2+ MSc,也是一样。在正常生理
条件下他们只参与pericyte turnover,对mesenchymal tissue没啥贡献，但一旦有损伤
发生它们会积极参与损伤修复。 hair follicle里的Gli1... 阅读全帖 |
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z*t
发帖数: 863 | 32 最近nature有一篇文章用transposon+barcode说即使是transplant后体内绝大多数造血
过程也是由progenitor cell而非stem cell负责的，当然他们主要是用老鼠，我怀疑在
人里做时间长了之后会不会看到stem cell的克隆。这个strategy对其它系统也应该适
用。
PS:我觉得很多组织器官因为turnover慢其实很少涉及到tissue homeostasis的概念，
血液系统，肠道，皮肤这种turnover速度很快的系统才涉及到homeostasis，所以只有
在challenge这些homeostasis比较慢的组织器官时才能找到特定细胞的功能
.
homeostasis
contribute |
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P*******D
发帖数: 523 | 33 请教一下大家，我们最近develop了一个能在live cell里面定量glutathione的
fluorescent probe，大家有什么建议，可以回答什么important的biological
questions？
Invitrogen卖一个叫thioltracker violet的probe，但是这个不能定量，只能定性的看
一下GSH的变化。尽管GSH probe的文章都发烂了，也没有一个能在live cell里面定量
的。
我们develop了一个probe （ThiolQuant Green）可以很好的定量细胞里面的GSH (
reduced form only)。我们把这个probe用于confocal microscope和flow cytometry，
能很好的和cell lysate GSH measurement correlate.
相比起来redox GFP or YFP，ThiolQuant Green是直接测量reduced form GSH，而不是
measure GSSG GSH ratio。我们的probe potentially和roGFP c... 阅读全帖 |
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P*******D
发帖数: 523 | 34 谢谢你的回复。
这些invitrogen卖的probe，我们都研究过，而且我也和invitrogen R&D联系过，
invitrogen他们承认他们的probe都不能在live cell里面定量，所以对我们的probe很
感兴趣。
我先讲一下为什么commercially available的probe不能很好的在live cell里面定量：
1.现在卖的所有的GSH或者thiol probe都是基于不可逆反应的，例如monochlorobimane
。一般按照invitrogen的protocol，加10-20 uM的probe和GSH反应，反应后，产物发出
荧光signal。这里的主要challenge是GSH的浓度非常高，一般是1-10 mM。如果是uM的
probe和mM的GSH反应，如果给足够的反应时间的话，不论你是1 mM GSH，还是10 mM
GSH，所有的probe都会被consume掉，所以得到同样的荧光output。
2. one can argue，如果GSH和probe反应足够慢的话，低浓度的GSH反应就会更慢，高
浓度GSH反应快，这样就能区分出GSH浓度... 阅读全帖 |
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A******y
发帖数: 2041 | 35 Most people look at GSH depletion because the cells already have a lot of it
. Some cells if you treated them with high glutamate, it will block
cysteine uptakes and deplete its GSH level. Your probe has a Micheal's
acceptor, so I you will have toxicity around 10s microM, but it is probably
okay to do short term live cell imagining.
I wounder if you treated with certain compounds, would you be able to
determine specific GSH pool depletion because there is a cyto- and a mito-
pool of GSH.
Tsie... 阅读全帖 |
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P*******D
发帖数: 523 | 36 Thanks, ArtyArty! This probe does not have organelle specificity, as we
discussed in the paper. so we cannot distinguish between the cyto and mito
pools of GSH. this will certainly be our next step.
In terms of toxicity, we have not measured IC50 yet. during the 1-2 h
experiment, we did not observe any apparent toxicity. However, this does not
mean it does not have long term toxicity.
The highest probe concentration we used was 1 uM. For HeLa cells, we can use
the concentration as low as 20 nM. ... 阅读全帖 |
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y****g
发帖数: 94 | 37 不是不愿意做， cancer太复杂了。 现在cancer stem cell 在solid tumor里面似乎也
没有很好的研究体系。 所以不敢去做。 个人对embryonic stem cell和developmental
biology比较感兴趣。而且ES cell的应用性比较强。 |
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m*****r
发帖数: 1164 | 38 需要用不同的cancer cell line做transfection，打算用便宜的Polyethylenimine做转
染试剂。请教大家知道有哪些比较好转染的cell line。
目前想做以下cancer type和自己了解的cell line,还请大家不吝赐教。谢谢。
Lung Cancer: H1299
Hepatic cancer: Hep G2
Breast cancer: MCF7
Colon cancer: HCT116
Leukemia: K562
Prostate cancer: DU145
Glioblastoma: LN229
Melanoma: A375 |
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m*****x
发帖数: 114 | 39 投稿Cell 10多天了，可是在线状态还是11天前的“Being read and discussed by the
editors”
也不告诉是直接拒掉了，还是别的什么情况。
之前投science, nature,都是没有送去review，但是等的时间不长，5，6天就直接拒掉
了。
投过Cell的童鞋知道这是什么情况吗？
听说有些杂志拖了1个月没送去review，而是告知拒掉了。 Cell不会也这样坑爹吧。 |
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E**********1
发帖数: 73 | 40 初学免疫，有个疑问关于CD28。 CD28 确实是个很老的分子了。一些review或者
research article的intro部分直接一笔带过说CD28对T cell activation很重要。但是
仔细读文献发现CD28 CD4 T cell activation的重要性很清楚，但是对 CD8+ T cell
activation的重要性有争议，有正面有反面的证据。反面证据之一是CD28 KO mice对
LCMV有正常的CTL response，也可以reject allograft。希望专家出来解释一下现在主
流的观点，十分感谢！ |
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l****e
发帖数: 157 | 41 问个土问题：实验室的-80C冰箱只有底下一层有空，已经放了E.coli competent cells
（在试剂盒里）和一些准备裂解的E coli cell pallets （在离心管里）。现在需要冻
mammalian cell lines，已经把cryo tubes封在styrofoam rack里，准备放在-80C冰箱
，过几天再转到液氮罐。然后有个学生问说和E coli放在冰箱的同一层会不会被污染？
我自己觉得是个低概率的事情，因为各自都在封闭的管子里。但我也不是很肯定，想问
问大家这种情况会不会有顾虑？谢谢先。 |
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q******g
发帖数: 3858 | 42 好像一般用Hoechst
https://en.wikipedia.org/wiki/DAPI
DAPI can be used for fixed cell staining. The concentration of DAPI needed
for live cell staining is generally very high; it is rarely used for live
cells |
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f**r
发帖数: 5 | 43 最近可能需要做个简单的proliferation assay,就是转染个基因然后几天过后数细胞数
量。据说转染率在80%左右。首先其实想问的就是做这个试验需要注意什么么？
其次，如果结果阴性的话，还有必要作cell death assay么？我记得曾经读过一篇文章
，说一个东西对proliferation没影响，但对cell death有影响（忘了他们是用flow还
是什么了）。板上有前辈能解释一下cell death assay一般怎么做的么？谢谢。 |
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M*******C
发帖数: 183 | 44 不知道在大家手上work的怎么样？买过好几种抗体。
在我手里，trouble很多啊，要么一堆杂带，没有特异带；要么背景很脏很黑，也看不
到特异带；要么带是白色的，并且结果也不是想要的。而类似的问题，我handle其他公
司的，失败率没这么高。测同一个蛋白，abcam的很好用，clean，结果正确。cell sig
的乱七八糟。trouble呢，公司都宣称在他们手里好用。
他们的western protocol是这样的，很不一般，大家觉得合理吗
Block： 5% Milk TBST （他们说不能用BSA)
一抗： 5% BSA TBST 稀释
二抗： 5% Milk TBST
平时我们要么是block/一抗都BSA. 要么是牛奶block， 一抗直接在TBST. 二抗从来只
是TBST. work的抗体总是work了。
而cell sig 的， 有的抗体，即使完全按照他们的说法，甚至他们寄来 positive ctrl
， 也不work， 而他们的positive ctrl， 我用 abcam的抗体轻易检测出。 abcam 的
问题是现在卖的太贵。而cell sig的花了钱不w... 阅读全帖 |
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m******q
发帖数: 5 | 45 博后第三年
两次独立审稿经验，帮老板审过十次左右（IF 2-15)，最近几次老板都没怎么改直接发
给editor
方向：regenerative medicine, stem cell (iPSC), cardiac and other direct
lineage reprogramming, cardiology, epigenetics, single cell genomics and
data analysis.
phD training 很全面，基本上分子，细胞，遗传，动物，以及生物信息学分析都会。
请站内。万分感谢！ |
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发帖数: 1 | 46 Mol Cell Oncol. 2015 Oct 6;3(2):e1087452. doi: 10.1080/23723556.2015.1087452
. eCollection 2016.
Deacetylation of mitofusin-2 by sirtuin-1: A critical event in cell survival
after ischemia.
Sooyeon L1, Go KL1, Kim JS1.
Sirtuin-1 (SIRT1) is associated with longevity and cell survival. Recently,
we unveiled a new role of SIRT1 in hepatic ischemia/reperfusion (I/R) injury
and identified a novel interaction between SIRT1 and mitochondrial outer
membrane protein mitofusin-2 (MFN2), in which SIRT1-dep... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 47 Thanks
Suppose at passage 1 of cancer cell line, at certain loci, allele frequency
is 90% A and 10% B, that's what you mean by "并不是完全homogeneous"
Then keep cell passage and wait until P20, it becomes 10% A and 90% B, this
is genome instability that lead to more heterogeneity?
Is it because allele A itself directly being "mutated" into allele B, or
cancer cell carrying allele B compete better than allele A so B could
survive over A? |
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