b**********8
发帖数: 349 | 1 最近发现以前的beta actin内参在某个treatment下变化挺大，于是换用18S rRNA,波动
没那么明显了，但是CT 值只有8点多，查了下资料说18S rRNA 的丰度很高，PCR 反应
中很快就能饱和，大家是怎么解决这个问题的？ |
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e****p
发帖数: 354 | 2 做Northern blot， 看到清楚的目的条带，
但18S 28S位置上的有很强信号，查了PROBE并无太大同源性，PROBE 1400BP大小，用的
20ugTOTAL RNA
重复做了还是这样，有没有遇到这样的情况。有什么好办法?
多谢各位大虾 。。 |
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c******y
发帖数: 148 | 3 我也出现过这种情况
别人这么给我解释的，
如果你是用PCR产物做的探针,PCR的模板来自基因组的话，可能就会把一些28s 18s 基
因片段非特异扩增下来，然后被标记，而28 18RNA的量很大，所有会有信号
解决办法:
1， 使用来自质粒酶切的片段标探针
2，PCR纯化探针后，稀释1000做模板，换另一对内部引物继续PCR，纯化
3，合成oligo片段 |
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e****p
发帖数: 354 | 4 DADIAYOU 我问一下质粒酶切后还做用P32 DCTP做PCR 吧
cheerfly 割胶回收后PCR产物做探针，PCR的模板是CDNA，用OLIGODT 反转录的话，为
什么还会28 18S 污染呢？
WWWWLZ质粒做模板还是会有这种现象，你的建议是什么呢？还是探针位点问题？
非常感谢！ |
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G***G
发帖数: 16778 | 5 anyone knows how to get the locations of 18s DNA in human?
is it a known and publica information? |
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S**o
发帖数: 447 | 6 哪儿能得到18s RDNA的human reference library？
可以用它与NGS数据对齐吗？ |
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S**o
发帖数: 447 | 7 anyone knows the location of 18s rDNA for human?
how to know the location?
Is this information already known?
Does it change? |
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a****n
发帖数: 79 | 8 18S RNA一般只用在northern blotting里做内参吧, RealtimePCR还是actin,GAPDH,
tublin做内参比较常见 |
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m***o
发帖数: 272 | 9 用actin, GAPDH, TATA Binding protein(TBP), and 18s rRNA. Actin and tbp 显示
类似的降低，但是18s没变化。该选用那个来normalization呢？很多文章用18s，大家
用的时候是不是你的target gene 用1ulRT产物，而用18s的时候要稀释至少100倍呢，
不然Ct就在10，会不会因为量太高而显示不出该有的差异呢？作的是WT和knockout 老
鼠的liver，大家有没有什么好的建议？谢谢！
感觉选不好normalization， 做实验就好像有个定时炸弹在旁边一样不舒服。谢谢任何
建议！ |
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k****o
发帖数: 589 | 10 以前提RNA做qPCR几乎从未失手过。最近用了一个抑制剂处理细胞，结果qPCR时目标基
因扩增很正常，用来参照的18S rRNA却扩增得很奇怪。具体说来是18S的PCR log phase
来得提前，有些样品的RFU干脆没有log phase，从一开始就一直线性增加。重新配制了
primer，问题没有解决。用以前的老样品跑18S，一切正常。这种情况可能是什么因素
引起的？ |
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J**a
发帖数: 215 | 11 谢谢了！我做了TapeStation RNA Tape, 所以看的不是一个target mRNA transcript，
而是所有的total RNA profile。IP前后的RNA在TapeStation跑出来都是rRNA占绝大多
数，18S和28S的2个peak都很高。不知道TapeStation对mRNA的sensitivity怎么样，但
是我assume 18S，28S两个峰底下那些background就是mRNA，看上去这些mRNA并没有明
显的相对于18S,28S的峰有enrich。。。不知道这个正常么？ |
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J**a
发帖数: 215 | 12 多谢！请问一般用什么方法比较reliable的测出rRNA/mRNA ratio? 我做了TapeStation
RNA Tape, IP前后的RNA在TapeStation跑出来的trace都是rRNA占绝大多数，18S和28S
的2个peak IP前后都很高。不知道TapeStation对mRNA的sensitivity怎么样，但是我
assume 18S，28S两个峰底下那些看似background的就是mRNA，但是看上去这些mRNA并
没有明显的相对于18S,28S的峰有enrich。。。不知道这个正常么？ |
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H**7
发帖数: 8624 | 13 叔今天休息在家， 闲得蛋疼， 下载了今年十月份的这个列表， 总共 10982 个犯罪记
录。
下面列出前一千个记录：
10/13/2012 22 Murder 13D20 20D 7000-7099 ASHBURN
10/10/2012 21 Murder 5F10 18A 2200-2299 WIRT
10/14/2012 21 Murder 2A10 13R 4700-4799 MCEWEN
10/21/2012 01 Murder 1A30 20A 2000-2099 DUNLAVY
10/28/2012 00 Murder 8C30 13R 8100-8199 CRESTVIEW
10/22/2012 23 Murder 18F30 20A 6300-6399 WINDSWEPT
10/2/2012 04 Murder 19G10 13R ... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 14 Yarmouth Port, Massachusetts
From Wikipedia, the free encyclopedia
Yarmouth Port, Massachusetts
Census-designated place
Boardwalk at Bass Hole
Location in Barnstable County and the state ofMassachusetts.
Coordinates: 41°42′17″N 70°13′15″WCoordinates: 41°42′17″N 70°13′
15″W
Country United States
State Massachusetts
County Barnstable
Town Yarmouth
Area
• Total 6.47 sq mi (16.76 km2)
• Land 6.04 sq mi (15.65 km2)
• Water 0.43 sq mi (1.11 km2)
Elevation 52 f... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 15 在网上发现了一个圣诞节商店，商店的建筑很有特色，而且遍布全美国，大概有70多个
店铺，以后大家买圣诞节用品可以去那里，似乎各州都有。我们这里和麻州的地址是：
CHRISTMAS TREE SHOP AUGUSTA, GA, 239 ROBERT C. DANIEL JR. PARKWAY,
AUGUSTA EXCHANGE, AUGUSTA, GA 30909, 706.738.0570, CHRISTMAS TREE SHOP
, MAGNOLIA PARK, 1117 WOODRUFF ROAD, GREENVILLE, SC 29607. 864. 297.
3667
CHRISTMAS TREE SHOPS NATICK, 1298 WORCESTER ST. ROUTE 9, SHERWOOD
PLAZA, NATICK, MA 01760, 508.655.9800
CHRISTMAS TREE SHOPS SOMERVILLE, 177 MIDDLESEX AVENUE, ASSEMBLY SQUARE
... 阅读全帖 |
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l*****O
发帖数: 402 | 16 “从来没有”只有傻逼会用。USN F/A-18s vs. IRAF MiG-25s On the first night of
the first gulf war, two F/A-18s from the carrier USS Saratoga were flying
outside of Baghdad when two Iraqi MiG-25PDs interceptors from the 96th
Squadron engaged them. In the beyond-visual-range (BVR), one of the Iraqi
MiGs, piloted by Lieutenant Colonel Zuhair Dawood, fired an R-40 missile,
shooting down one of the F/A-18's as it was travelling Mach 0.92. The pilot,
Lieutenant Commander Scott Speicher, was killed. It is widely beli... 阅读全帖 |
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w*p
发帖数: 16484 | 17 没事，楼主在本版的名气和地位早就建立起来了
: “从来没有”只有傻逼会用。USN F/A-18s vs. IRAF MiG-25s On the first
night of
: the first gulf war, two F/A-18s from the carrier USS Saratoga were
flying
: outside of Baghdad when two Iraqi MiG-25PDs interceptors from the 96th
: Squadron engaged them. In the beyond-visual-range (BVR), one of the
Iraqi
: MiGs, piloted by Lieutenant Colonel Zuhair Dawood, fired an R-40
missile,
: shooting down one of the F/A-18's as it was travelling Mach 0.92. The
pilot,
: ... 阅读全帖 |
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w*****3
发帖数: 1582 | 18 Jul 24, 2013
Untitled
Running 6.10 km 41m:57s 8.7 km/h 6:52 min/km -
Jul 23, 2013
Untitled
Running 9.01 km 56m:39s 9.5 km/h 6:17 min/km -
Jul 22, 2013
Untitled
Running 8.42 km 49m:41s 10.2 km/h 5:54 min/km -
Jul 21, 2013
Untitled
Cycling, sport 89.78 km 4h:02m:31s 22.2 km/h 2:42 min/km -
Jul 20, 2013
Untitled
Running 8.88 km 1h:06m:18s 8.0 km/h 7:28 min/km -
Jul 1... 阅读全帖 |
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z***m
发帖数: 1602 | 19 我装了360，自从装好机器到现在，开机一直是18s。应该不是360的问题吧，楼主也可
以掐表比较下装和不装360的开机时间。18s和29s还是很容易测出来的。 |
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z***m
发帖数: 1602 | 20 我装了360，自从装好机器到现在，开机一直是18s。应该不是360的问题吧，楼主也可
以掐表比较下装和不装360的开机时间。18s和29s还是很容易测出来的。 |
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g******1
发帖数: 244 | 21 更新：跑了个琼脂糖电泳，28S 和18S条带很清楚，有少量Smear。但是5S最亮，18S 看
起来比28S亮一点。这是不是跟降解有关？ |
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a******8
发帖数: 56 | 22 RNA quality is low.
1. you have signal in the well, likely from protein.
2. besides 28s/18s RNA bands, you have higher mol weigh stuff in the gel
3. 28s/18s ratio should be above 2, while yours is almost equal, which
indicates substantial degradation
Get better RNA first. At least no protein should remain in your yield.
This will affect your RT reaction. |
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f*******r
发帖数: 36 | 23 各位大大，在下最近在成年小鼠颅骨中提RNA做real time PCR，碰到了很头疼的问题：
虽然产量不高，不过浓度和OD260/280看起来很正常，但是OD260/230 variation很大
，大都不到1.8，做内参18S波动也大到惨不忍睹。看看RNA的各项参数和18S的ct值，千
头万绪，看不出来什么东西影响了RNA的质量，或者RT-PCR。请帮忙出出主意，比如关
于提骨头totalRNA，做反转和real time PCR的trick，等等，跪谢！
ps 试剂部分，最近也有做细胞的提RNA》》real time PCR，看起来挺正常的，所以，
我个人觉得不是试剂的错儿。 |
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c********g
发帖数: 15629 | 24 http://zgrx.freeforums.org/topic-t35.html
方舟子与陈章良
对绝大多数海外学人来说，陈章良是一个耳熟能详的名字。这不仅仅是因为他是中国留
学生中回国时间较早（1987年）、回国之后地位上升得最快（1989年任北大正教授、
1992年起任北大生物系主任、生命科学院院长、1995年任北大副校长）、名气大得惊人
的一位人物，更是因为关于这个人的传闻一直不绝于耳。这是一些什么样的传闻呢？方
舟子曾在2000年12月16日专门就此撰写了一篇文章，题为《为什么不把陈章良立此存照
？》，其中说：
“目前网上对陈章良的指责主要有四点（估计都来源于《华夏文摘》几年前登过的一篇
攻击谈家祯、陈章良的文章，那篇文章充满不实之词，极不负责任）：
一、陈章良抄袭。
二、陈章良伪造恐龙蛋基因研究。
三、陈章良生活作风有问题。
四、陈章良学术成果太少。
对后面两点，不在我们打假范围。对前面两点，解释如下。”
http://www.xys.org/xys/ebooks/others/sc ... gliang.txt
方舟子说，“陈章良学术成果太少……不在我们打假范围”，显然是... 阅读全帖 |
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g*********r
发帖数: 9366 | 25 ☆─────────────────────────────────────☆
coarsening (草枯鹰眼疾，雪尽马蹄轻) 于 (Sun Jan 1 00:19:46 2012, 美东) 提到:
http://zgrx.freeforums.org/topic-t35.html
方舟子与陈章良
对绝大多数海外学人来说，陈章良是一个耳熟能详的名字。这不仅仅是因为他是中国留
学生中回国时间较早（1987年）、回国之后地位上升得最快（1989年任北大正教授、
1992年起任北大生物系主任、生命科学院院长、1995年任北大副校长）、名气大得惊人
的一位人物，更是因为关于这个人的传闻一直不绝于耳。这是一些什么样的传闻呢？方
舟子曾在2000年12月16日专门就此撰写了一篇文章，题为《为什么不把陈章良立此存照
？》，其中说：
“目前网上对陈章良的指责主要有四点（估计都来源于《华夏文摘》几年前登过的一篇
攻击谈家祯、陈章良的文章，那篇文章充满不实之词，极不负责任）：
一、陈章良抄袭。
二、陈章良伪造恐龙蛋基因研究。
三、陈章良生活作风有问题。
四、陈章良学术成果太少。
对后面两点，... 阅读全帖 |
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发帖数: 1 | 28 【 以下文字转载自 WoldMiscNews 俱乐部 】
发信人: bbz10 (冬去春来), 信区: WoldMiscNews
标 题: 嚴真點評：樸槿惠被人民拋棄 梁振英被老闆拋棄
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Dec 12 13:59:25 2016, 美东)
本週在亞洲政壇發生了兩件意料之中的大事：韓國總統樸槿惠被國會彈劾下台，香港特
首梁振英宣佈不智筮B任。看起來一個被動，一個主動，但實際上是一個被人民拋棄，
一個被老闆拋棄。
请点击下面短视频：
https://www.youtube.com/watch?v=TbXv5JyV3gw&t=18s |
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C**8
发帖数: 536 | 30 快点崩盘算了。不破不立。这么强撑着真他妈累得慌。
好死不如赖活着=温水煮青蛙。
乾淨、安全的空氣和水都沒了，再他媽怎麼求生都你妈逼是徒勞。
《中国求生手册》窜红网上
http://wp.me/p1romN-1id
***********************************
中國大陸從來都是GDP總量的巨人，人均GDP的矮子。GDP總量再高，富得都是那些權貴
階層和
統治階層，與屁民、賤民、草民、蟻民有何相干？只能更說明權貴階層和既得利益集團對
屁民、賤民、草民、蟻民的剝削和壓榨更狠了，所以GDP總量又創新高。
“最近一系列的統計數字顯示，中國經濟成長減緩的速度超過預期，迫使焦慮的中國決
策者辯論該採用那些手段來振興經濟，和保住共產黨統治合法性的最後一個大支柱”
“中共固執的領導人拒絕進行增強消費者支出和減少對投資的倚賴的真正經濟改 革，
高GDP成長在中國幾乎是神聖的，它是中國專制政權與人民的不成文合約：我們提供兩
位數的成長，來交換你們犧牲國內的權利和自由。中國的消費者從投資 領導的成長獲
益，享受了新機場、高鐵和擴大的公路系統，但工資成長不高、社會安全網缺乏、低利
率使... 阅读全帖 |
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d***h
发帖数: 97 | 31 F-35B Put On Probation; New Bomber To Go Forward
By Bill Sweetman w**************[email protected]
WASHINGTON
Defense Secretary Robert Gates has put the U.S. Marine Corps’ troubled F-
35B short-takeoff-and-vertical landing (Stovl) Joint Strike Fighter on “
probation,” while endorsing the U.S. Air Force’s long-coveted new bomber
program.
The F-35A and F-35C models emerged unscathed from Gates’ review. However,
the F-35B “is experiencing significant testing problems,” Gates said at
the Pentagon J... 阅读全帖 |
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c**i
发帖数: 6973 | 32 Transcript: DOD News Briefing with Geoff Morrell from the Pentagon. US
Department of Defense, Jan 26, 2011.
http://www.defense.gov/transcripts
/transcript.aspx?transcriptid=4758
The pertinent quote:
"Q: Back to F-35 real quick.
"MR. MORRELL: Okay.
"Q: Could you elaborate on the decision to grant Lockheed
permission to speak with Japanese companies on the F-35?
"MR. MORRELL: Well, I mean, when we were in Japan, and you
guys a... 阅读全帖 |
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H**F
发帖数: 177 | 33 从下面开始看， 日本地震， 9日开始小震，11日高潮，到现在还在不停的震，再抖啊
抖的日本会不
会沉？
Link: http://neic.usgs.gov/neis/qed/
2011/03/17 23:11:40 38.99N 142.60E 45 4.8 NEAR THE EAST
COAST OF HONSHU, JAPAN
2011/03/17 23:01:26 36.47N 143.95E 39 4.8 OFF THE EAST
COAST OF HONSHU, JAPAN
2011/03/17 21:24:24 39.09N 142.27E 59 4.8 NEAR THE EAST
COAST OF HONSHU, JAPAN
2011/03/17 21:18:25 37.84N 139.89E 57 4.7 EASTERN HONSHU,
JAPAN
2011/03/17 21:06:31 35.69N 141.28E 41... 阅读全帖 |
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k**u
发帖数: 10502 | 34 Michael Johnson 43.18s for 400m, world record. |
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m********3
发帖数: 3280 | 36 根据美国防部7日晚发表的声明，美军中央司令部当晚调动一架C-17和两架C-130运输机
，一共向辛贾尔山区投送了72捆应急物资。这批物资包括饮用水和食品，可满足数千人
的需求。此外，两架F/A-18s战斗机为此次空投任务护航。
声明特别强调，首次空投任务顺利完成。参与空投的空军力量来自中央司令部的数
个空军基地，不涉及任何地面部队。
声明还表示，美军未来将向伊拉克北部地区提供更多的食品和水。美国防部将与美
国务院、伊拉克政府、联合国以及非政府组织一道，共同化解当前的人道主义危机。 |
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w********t
发帖数: 12853 | 37 By MICHAEL PREGENT And MICHAEL WEISS
Aug. 12, 2014 6:55 p.m. ET
The Islamic State of Iraq and al-Sham, aka ISIS, captured hundreds of
millions of dollars of U.S. military equipment as the Iraqi Security Forces
fled the terrorist group's advance on Mosul in June. The result is that ISIS
now has some very sophisticated weapons it is using to take and hold
territory in Syria and Iraq.
Yet ISIS is not nearly so invincible as its weaponry and territorial gains
have made it seem. The terror group has ... 阅读全帖 |
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k****s
发帖数: 1209 | 38 March 23, 2015
Terrified US Aircraft Carrier Flees From Russian Subs To UK Safety
By: Sorcha Faal, and as reported to her Western Subscribers
The Naval Surface Forces (NSF) of the Ministry of Defense (MoD) are
reporting today that three nuclear-powered Akula-class submarines belonging
to the 24th Submarine Division of the Northern Fleet (NF) successfully “war
-gamed” the American aircraft carrier USS Theodore Roosevelt [photo 2nd
left] causing it to “flee in terror” towards the waters off the Ha... 阅读全帖 |
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F*****t
发帖数: 2580 | 41 德制105和150榴弹炮都被日军缴获过
105mm: 10.5cm leFH-18 field howitzer. It has been reported that China took
delivery of 48 of these guns during the German advisory period ca. 1936-1938
. At the time of their delivery these weapons were the most modern field
pieces in service in China. The Japanese reported having captured some of
these guns in 1937/1938
149mm: Rheinmetall commercial 15cm L/32 and 15cm sFH-18 field howitzers. It
has been reported in several sources that China took delivery of a total of
44 15... 阅读全帖 |
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b**********g
发帖数: 2012 | 44 08.24,24Uhr 按籍贯
名次 省/市 金牌 银牌 铜牌 总数 备注
1 辽宁 7.50 2.89 3.75 14.14 郭丹1/3S,杨秀丽1G,杜婧0.5G,于洋0.5G,许岩1B,刘子
歌1G,张宁1G,吴优0.5S,唐宾0.25G,金紫薇0.25G,王娇1G,王楠1/3G,郭跃1/3G,
于洋0.5B,马琳1/3G,张文秀1B,郭跃1B,王楠1S,女曲7/18S,马琳1G,女排3/12B,艺术体操
4/6S,
2 江苏 6.84 1.33 0.58 8.75 陈玲1/3S,陈艳青1G,黄旭1/6G,肖钦1/6G,陈若琳0.5G,仲
满1G,黄海洋1/4S,包盈盈1/4S,蔡赟0.5S,邱健1G,肖钦1G,陆春龙1G,陈若琳1G,张希0.5B
,赵蕊蕊1/12B,
3 山东 3.75 1.58 0.58 5.92 张娟娟1G,张娟娟1/3S,姜林1/3B,王峰0.5G,刘春红1G,谭
淼1/4S,杜丽1G,谭宗亮1S,周雅菲1/4B,奚爱华0.25G,
4 广东 3.67 2.67 2.22 8.55 陈燮霞1G,冼东妹1G,杨伊琳1/6G,李宏利1S,林跃0.5G,谢
杏 |
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F******k
发帖数: 7375 | 48 200, 2853, missed by 7s. |
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G********p
发帖数: 3504 | 49 I don't understand why WB is still at its 18s. It may be a worrying sign
for SINA. But who knows.., sina is under value even at this point |
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s*******s
发帖数: 115 | 50 不是自取。就是他们给的一小张中文条，上面写着7月7日取。 但我已经给了他们USPS
的Express回邮信封带18S邮票。今天已经7号了，查USPS tracking，我那个号码居然还说
There is no record of this item. 竟然还没寄出吗？ 难道还要到明天才到啊。我
是距离芝加哥车程4-5小时的地方。 |
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