f*******r
发帖数: 36 | 1 各位大大，在下最近在成年小鼠颅骨中提RNA做real time PCR，碰到了很头疼的问题：
虽然产量不高，不过浓度和OD260/280看起来很正常，但是OD260/230 variation很大
，大都不到1.8，做内参18S波动也大到惨不忍睹。看看RNA的各项参数和18S的ct值，千
头万绪，看不出来什么东西影响了RNA的质量，或者RT-PCR。请帮忙出出主意，比如关
于提骨头totalRNA，做反转和real time PCR的trick，等等，跪谢！
ps 试剂部分，最近也有做细胞的提RNA》》real time PCR，看起来挺正常的，所以，
我个人觉得不是试剂的错儿。 |
D***s
发帖数: 5613 | 2 230的吸收主要受盐和多糖的影响，
你尝试提取的RNA再过一根新的Qiagen柱子纯化看看会不会好点
也就是你第一次抽出来之后不管质量怎么样，先用DNase I处理，
然后用新的Qiagen RNeasy的column纯化一下
【在 f*******r 的大作中提到】
: 各位大大，在下最近在成年小鼠颅骨中提RNA做real time PCR，碰到了很头疼的问题：
: 虽然产量不高，不过浓度和OD260/280看起来很正常，但是OD260/230 variation很大
: ，大都不到1.8，做内参18S波动也大到惨不忍睹。看看RNA的各项参数和18S的ct值，千
: 头万绪，看不出来什么东西影响了RNA的质量，或者RT-PCR。请帮忙出出主意，比如关
: 于提骨头totalRNA，做反转和real time PCR的trick，等等，跪谢！
: ps 试剂部分，最近也有做细胞的提RNA》》real time PCR，看起来挺正常的，所以，
: 我个人觉得不是试剂的错儿。
|
f*******r
发帖数: 36 | 3 谢谢回复 看来不纯还是主要原因
【在 D***s 的大作中提到】
: 230的吸收主要受盐和多糖的影响，
: 你尝试提取的RNA再过一根新的Qiagen柱子纯化看看会不会好点
: 也就是你第一次抽出来之后不管质量怎么样，先用DNase I处理，
: 然后用新的Qiagen RNeasy的column纯化一下
|
q***7
发帖数: 144 | 4 Please try this company's RNA isolation kit which is much better than Qiagen
kit.
http://www.greenbioresearch.com/mitotal-rnamini-using-qiagen-ki |
