i*********0
发帖数: 915 | 1 这个问题可能问的比较的挫：我从同事们拿来几个cDNA的样品（不同gene 的KO HSC的
样品），想看看一个target gene的表达，在不知道同事们做1st strand synthesis 起
始RNA 样品量的情况下，仅靠reference gene （比如beta-actin）和target gene 的
相对ct数值的差异能确定不同样品中target gene 的表达么？样品浓度差异会不会对结
果造成影响？ |
l********e
发帖数: 415 | 2 差得不多的话(比如说5倍以内), 应该没关系. 反正最后都要用house keeping gene
normalize一下的. 不放心的话, 可以做2个house keeping
【在 i*********0 的大作中提到】
: 这个问题可能问的比较的挫：我从同事们拿来几个cDNA的样品（不同gene 的KO HSC的
: 样品），想看看一个target gene的表达，在不知道同事们做1st strand synthesis 起
: 始RNA 样品量的情况下，仅靠reference gene （比如beta-actin）和target gene 的
: 相对ct数值的差异能确定不同样品中target gene 的表达么？样品浓度差异会不会对结
: 果造成影响？
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d****i
发帖数: 2346 | 3 个人理解：用reference gene矫正过以后的同一个group里各个sample如果数值稳定结
果就可以用。 |
f*****f
发帖数: 195 | 4 严格来说，样品浓度不同会导致rt-pcr效率不同，一般最好得确定pcr线性范围，不过
rt本身是相对定量，所以尽量保证reference gene的Ct相当。
【在 i*********0 的大作中提到】
: 这个问题可能问的比较的挫：我从同事们拿来几个cDNA的样品（不同gene 的KO HSC的
: 样品），想看看一个target gene的表达，在不知道同事们做1st strand synthesis 起
: 始RNA 样品量的情况下，仅靠reference gene （比如beta-actin）和target gene 的
: 相对ct数值的差异能确定不同样品中target gene 的表达么？样品浓度差异会不会对结
: 果造成影响？
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i*********0
发帖数: 915 | 5 谢谢大家的评论。我准备先做一个house keeping gene 的qPCR，然后做dilution，把
它们的ct值调到相当，再做我要的target gene 的qPCR吧。 |
