m***o
发帖数: 272 | 1 I am using sybr green qPCR,当测试primer时，用1,1:10,1:100,1:1000,1:10000
cDNA dilution.经常会出现这种情况:用所有5个浓度，primer efficiency会140%，如
果用最稀释的3个，efficiency会好些105%。查查是PCR inhibitor的问题。
如果这样的话，这个primer还是可以用的。
我的问题是：是不是应该把cDNA 也要稀释至少100倍才可以得到可信的结果呢？
谢谢！ | z**********u
发帖数: 22 | 2 查查是PCR inhibitor的问题
这个是怎么查的
【在 m***o 的大作中提到】
: I am using sybr green qPCR,当测试primer时，用1,1:10,1:100,1:1000,1:10000
: cDNA dilution.经常会出现这种情况:用所有5个浓度，primer efficiency会140%，如
: 果用最稀释的3个，efficiency会好些105%。查查是PCR inhibitor的问题。
: 如果这样的话，这个primer还是可以用的。
: 我的问题是：是不是应该把cDNA 也要稀释至少100倍才可以得到可信的结果呢？
: 谢谢！
| m***o
发帖数: 272 | | C*******e
发帖数: 4348 | 4 那就稀释100倍
一般来说cDNA reaction用作模板的时候最少也要稀释10倍，而且用量不超过PCR体积的
1/10
（20 ulPCR反应里最多用2 ul稀释的模板）
【在 m***o 的大作中提到】
: I am using sybr green qPCR,当测试primer时，用1,1:10,1:100,1:1000,1:10000
: cDNA dilution.经常会出现这种情况:用所有5个浓度，primer efficiency会140%，如
: 果用最稀释的3个，efficiency会好些105%。查查是PCR inhibitor的问题。
: 如果这样的话，这个primer还是可以用的。
: 我的问题是：是不是应该把cDNA 也要稀释至少100倍才可以得到可信的结果呢？
: 谢谢！
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