c*********r
发帖数: 181 | 1 正在做土壤古细菌鉴定，DNA已经提取出来了，现在用了一个文献的方法用巢式PCR扩增
16SDNA，但是一直不成功。用别的文献方法，别的引物能够扩增出来条带，说明里面应
该是有古细菌DNA的。
我用的文献方法是：cindy H. Nakatsu (2000): soil community analysis using
DGGE of 16S rDNA Polymerase Chain reaction products.
请教各位大仙，能否给我一点指导？
谢谢！ |
p****n
发帖数: 9263 | 2 古细菌这种狗东西皮尔厚馅儿小，你有没有用爆米花方法破裂细胞壁？
【在 c*********r 的大作中提到】
: 正在做土壤古细菌鉴定，DNA已经提取出来了，现在用了一个文献的方法用巢式PCR扩增
: 16SDNA，但是一直不成功。用别的文献方法，别的引物能够扩增出来条带，说明里面应
: 该是有古细菌DNA的。
: 我用的文献方法是：cindy H. Nakatsu (2000): soil community analysis using
: DGGE of 16S rDNA Polymerase Chain reaction products.
: 请教各位大仙，能否给我一点指导？
: 谢谢！
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c*********r
发帖数: 181 | 3 我用别的引物发现能P出来，现在的问题是为什么这个特异的引物对做不出来？好几篇
文献都用这个P出来了。加BSA，ACETAMIDE，各种方法我都试过了。 |
c*********r
发帖数: 181 | |
p****n
发帖数: 9263 | 5 铁罐子里加高压，然后“砰”...
【在 c*********r 的大作中提到】
: 顺便问一下，什么是爆米花方法？
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C*******e
发帖数: 4348 | 6 你用通用引物p过么
出不出条带？
【在 c*********r 的大作中提到】
: 正在做土壤古细菌鉴定，DNA已经提取出来了，现在用了一个文献的方法用巢式PCR扩增
: 16SDNA，但是一直不成功。用别的文献方法，别的引物能够扩增出来条带，说明里面应
: 该是有古细菌DNA的。
: 我用的文献方法是：cindy H. Nakatsu (2000): soil community analysis using
: DGGE of 16S rDNA Polymerase Chain reaction products.
: 请教各位大仙，能否给我一点指导？
: 谢谢！
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c*********r
发帖数: 181 | |
h**********r
发帖数: 671 | 8 用nanodrop看一下DNA浓度和质量，然后严格的控制加入的模板量。好像太多也不容易
出来，默认你是用kit提的DNA
仅供参考。 |
c*********r
发帖数: 181 | |
A*******e
发帖数: 284 | 10 别的引物是啥引物？ 要不是古细菌特异引物， 十有八九扩出来的是真细菌。 |
g***j
发帖数: 40861 | |
