m*******3
发帖数: 25 | 1 我想检测一个激酶对底物的磷酸化，从大肠杆菌中纯化了蛋白，进行体外磷酸化反应，
然后用
sigma的丝氨酸特异的磷酸化抗体进行检测，结果发现预染的marker显出了非常深的带
，不知为什
么，谢谢大家！ |
g***s
发帖数: 30 | 2 我的意见是：你的目的条带肯定很弱，导致曝光时间很长，Marker上的一些非特异性反
应也被显出来了。 个人意见，不知道对不对 |
o**d
发帖数: 3080 | 3 Using anti-p-substitute antibody or kinase assay should be much better. |
b***n
发帖数: 36 | 4 Sigma的这个P-ser antibody我用过，假货啊
还是用32p灵敏一些
虽然伤身体 |
k******0
发帖数: 1073 | 5 试试Phos-tag胶，有时可以把磷酸化的蛋白质分开。
Marker带，我也经常在用不同很好的抗体的时候看到。原因未知。 |
z********i
发帖数: 610 | 6
【在 b***n 的大作中提到】
: Sigma的这个P-ser antibody我用过，假货啊
: 还是用32p灵敏一些
: 虽然伤身体
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m*******3
发帖数: 25 | 7
这个 marker在黑暗下荧光就非常亮，不怎么压就显出大黑团，谢谢了
【在 g***s 的大作中提到】
: 我的意见是：你的目的条带肯定很弱，导致曝光时间很长，Marker上的一些非特异性反
: 应也被显出来了。 个人意见，不知道对不对
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m*******3
发帖数: 25 | 8
啊，不能用啊，看来只能同位素了
【在 b***n 的大作中提到】
: Sigma的这个P-ser antibody我用过，假货啊
: 还是用32p灵敏一些
: 虽然伤身体
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m*******3
发帖数: 25 | 9
感谢，哪儿有卖，贵不？
【在 k******0 的大作中提到】
: 试试Phos-tag胶，有时可以把磷酸化的蛋白质分开。
: Marker带，我也经常在用不同很好的抗体的时候看到。原因未知。
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m*******3
发帖数: 25 | 10
I don't quite understand, could you please explain this in more detail?
what is anti-p-substitute antibody? I am doing in vitro kinase assay.
【在 o**d 的大作中提到】
: Using anti-p-substitute antibody or kinase assay should be much better.
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r******y
发帖数: 21907 | 11 可以考虑33P，就是贵 但是安全性更好
【在 m*******3 的大作中提到】
:
: I don't quite understand, could you please explain this in more detail?
: what is anti-p-substitute antibody? I am doing in vitro kinase assay.
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