s******n
发帖数: 110 | 1 请教各位专家：某激酶T随着细胞ATP水平的增加而增加活性；它有两个不同的底物A和B
。现在要测T激酶在递增ATP的情况下的Km，可以用A或B做底物来分别测定它们的磷酸化
水平，取最大的磷酸化水平的一半时的ATP值而获得。用不同的的底物A或B来测量，所
得到的Km会不同吗？换句话来说，激酶的Km会因为底物的不同而不同吗？我的理解是激
酶的Km是它自己的特性（受ATP影响），而与底物无关，对吗？
万分感谢！ |
e****s
发帖数: 1125 | 2 个人认为，应该是有可能不同的。
比如说，如果底物A/B可以allosteric 影响另一个底物ATP和酶的结合，那么Km/ATP就
会不同了。
和B
【在 s******n 的大作中提到】
: 请教各位专家：某激酶T随着细胞ATP水平的增加而增加活性；它有两个不同的底物A和B
: 。现在要测T激酶在递增ATP的情况下的Km，可以用A或B做底物来分别测定它们的磷酸化
: 水平，取最大的磷酸化水平的一半时的ATP值而获得。用不同的的底物A或B来测量，所
: 得到的Km会不同吗？换句话来说，激酶的Km会因为底物的不同而不同吗？我的理解是激
: 酶的Km是它自己的特性（受ATP影响），而与底物无关，对吗？
: 万分感谢！
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s******n
发帖数: 110 | 3 激酶检测（kinase assay）是在试管中进行的（in vitro），每次只有一个底物，要么
是A，要么是B，而且都是纯化的蛋白。因此它们之间的影响被消除了。 |
b******y
发帖数: 627 | 4 What emases meant is that A or B or both might allosterically regulate ATP'
s binding affinity to kinase and therefore the Km of ATP can be different
when A or B as substrate due to differential allosteric effects from A and B
. |
s*****i
发帖数: 315 | 5 个人觉得应该用经典的底物，或是领域广泛接收的底物，但是底物的不同应该不会影响
最终结论
你测量的时候是增加ATP的浓度，底物的浓度恒定。曲线也是ATP的曲线，跟底物无关。
其实换个思路，你可以尝试用同一个底物，但是底物的浓度有差别，比如1nM A 和 0.
1nM A, 看看得到的ATP Km有没有变化。这个跟A和B的区别是类似的吧？
没有尝试过，不好下结论。
不过，ATP浓度升高的时候，激酶活性不一定严格遵循Michaelis-Menten kinetics。
参见本期cancer cell 那篇featured article
http://www.cell.com/cancer-cell/abstract/S1535-6108(13)00134-7
所以当出现奇怪结果的时候，要三思，不一定是实验出错了，也许就是新发现。
和B
【在 s******n 的大作中提到】
: 请教各位专家：某激酶T随着细胞ATP水平的增加而增加活性；它有两个不同的底物A和B
: 。现在要测T激酶在递增ATP的情况下的Km，可以用A或B做底物来分别测定它们的磷酸化
: 水平，取最大的磷酸化水平的一半时的ATP值而获得。用不同的的底物A或B来测量，所
: 得到的Km会不同吗？换句话来说，激酶的Km会因为底物的不同而不同吗？我的理解是激
: 酶的Km是它自己的特性（受ATP影响），而与底物无关，对吗？
: 万分感谢！
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s******n
发帖数: 110 | |
