C**S 发帖数: 522 | 1 需要在老鼠出生后诱导KO,前一阵用tamoxifen 1mg连续5天,没有检测到KO。有人说要
用4OH-tamoxifen。会是这种原因吗?
还有,我查了一下sigma,有两种4OHT,一种50mg,$190;一种25mg,$380。哪种效果好
? |
G********e 发帖数: 528 | 2 不会
TAM就可以,如果对老鼠
cell culture的话用OHT
【在 C**S 的大作中提到】 : 需要在老鼠出生后诱导KO,前一阵用tamoxifen 1mg连续5天,没有检测到KO。有人说要 : 用4OH-tamoxifen。会是这种原因吗? : 还有,我查了一下sigma,有两种4OHT,一种50mg,$190;一种25mg,$380。哪种效果好 : ?
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l**********n 发帖数: 240 | 3 用tamoxifen连续5天后,可以多等几天再测蛋白。有的蛋白半衰期很长。
【在 C**S 的大作中提到】 : 需要在老鼠出生后诱导KO,前一阵用tamoxifen 1mg连续5天,没有检测到KO。有人说要 : 用4OH-tamoxifen。会是这种原因吗? : 还有,我查了一下sigma,有两种4OHT,一种50mg,$190;一种25mg,$380。哪种效果好 : ?
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i*********0 发帖数: 915 | 4 tamoxifen
这个东西可以在体内被代谢一下,变成4-oht吧。 |
C**S 发帖数: 522 | 5 Thanks. I did wait for 5 days after the last injection.
【在 l**********n 的大作中提到】 : 用tamoxifen连续5天后,可以多等几天再测蛋白。有的蛋白半衰期很长。
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C**S 发帖数: 522 | 6 Another question: Do I have to use female mice? |
D*a 发帖数: 6830 | 7 不用非用母的吧,公的母的都会被KO的
你试试加量呢?
我们实验室有人做的,量具体不知道,是早晚各一次持续五天,他们第一次摸的时候弄
了三种不同浓度不同长度的protocol来实验。
另外你的cre真的管用吗?我们隔壁实验室也用cre在另一个器官做ko,我们用的是同一
只flox的老鼠,他们的就效率很低 |
G********e 发帖数: 528 | 8 顺便请教,你的蛋白去到多干净,或者genotypeing?
【在 l**********n 的大作中提到】 : 用tamoxifen连续5天后,可以多等几天再测蛋白。有的蛋白半衰期很长。
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S******9 发帖数: 2837 | 9 老鼠诱导用tamoxifem是work的。
但是不同的cre不一样的,有些cre需要gastric lavage才行,大多数是IP。
我做过有ve-cad Cre和Tie Cre无论用那种方法都没有work。我Tie Cre用过每天灌胃
1mg,连续3周也没work。文献有报道6周食物加Tamoxifen。
有几个系统剔除的cre,一般IP 10天, 每天1mg, 在3~4周开始,然后停药1周以后可
以用,老鼠剔除效果在95~99%之间。 感觉IP 5天的,剔除率大概在92~95%。这个都是
根据不同的target定的。
再者,有些cre对于不同组织剔除IP的老鼠年龄也有很大关系,有些脑血管内皮剔除需
要在新生鼠24小时内IP一次,这个时候就需要用4-OH,估计是新生鼠肝脏功能还没有成
鼠成熟,对于Tamoxifen的代谢利用不足吧。 |
C**S 发帖数: 522 | 10 The one I used is ve-cad cre ...... Did you get it from UCLA?
【在 S******9 的大作中提到】 : 老鼠诱导用tamoxifem是work的。 : 但是不同的cre不一样的,有些cre需要gastric lavage才行,大多数是IP。 : 我做过有ve-cad Cre和Tie Cre无论用那种方法都没有work。我Tie Cre用过每天灌胃 : 1mg,连续3周也没work。文献有报道6周食物加Tamoxifen。 : 有几个系统剔除的cre,一般IP 10天, 每天1mg, 在3~4周开始,然后停药1周以后可 : 以用,老鼠剔除效果在95~99%之间。 感觉IP 5天的,剔除率大概在92~95%。这个都是 : 根据不同的target定的。 : 再者,有些cre对于不同组织剔除IP的老鼠年龄也有很大关系,有些脑血管内皮剔除需 : 要在新生鼠24小时内IP一次,这个时候就需要用4-OH,估计是新生鼠肝脏功能还没有成 : 鼠成熟,对于Tamoxifen的代谢利用不足吧。
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S******9 发帖数: 2837 | |
D***y 发帖数: 693 | 12 I used oral gavage (0.8 mg/10g body weight). after 7 days, I can detect it
using rosa26 reporter mice.
【在 C**S 的大作中提到】 : 需要在老鼠出生后诱导KO,前一阵用tamoxifen 1mg连续5天,没有检测到KO。有人说要 : 用4OH-tamoxifen。会是这种原因吗? : 还有,我查了一下sigma,有两种4OHT,一种50mg,$190;一种25mg,$380。哪种效果好 : ?
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S******9 发帖数: 2837 | 13 Rosa26 work不等于在你的target上work。
it
【在 D***y 的大作中提到】 : I used oral gavage (0.8 mg/10g body weight). after 7 days, I can detect it : using rosa26 reporter mice.
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C**S 发帖数: 522 | 14 谢谢,是同一种。
请问你们最后换到哪一种cre了?
【在 S******9 的大作中提到】 : http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17072878
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s********l 发帖数: 58 | 15 问个弱弱的问题,tamoxifen和4OH-tamoxifen结合雌激素受体,会不会有非特异效应?
比如说,它的雌激素拮抗作用会否引起老鼠骨质疏松? |