C**S
发帖数: 522 | 1 需要在老鼠出生后诱导KO，前一阵用tamoxifen 1mg连续5天，没有检测到KO。有人说要
用4OH-tamoxifen。会是这种原因吗？
还有，我查了一下sigma，有两种4OHT，一种50mg，$190;一种25mg，$380。哪种效果好
？ |
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s********l
发帖数: 58 | 2 问个弱弱的问题，tamoxifen和4OH-tamoxifen结合雌激素受体，会不会有非特异效应？
比如说，它的雌激素拮抗作用会否引起老鼠骨质疏松？ |
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s********l
发帖数: 58 | 3 问个弱弱的问题，tamoxifen和4OH-tamoxifen结合雌激素受体，会不会有非特异效应？
比如说，它的雌激素拮抗作用会否引起老鼠骨质疏松？
如果用在细胞系，是不是应该先确定这个细胞系不表达雌激素受体？
如果是骨髓间充质细胞或者骨肿瘤细胞系，都是有可能表达雌激素受体的，这种情况下
用tamoxifen或4OHT的诱导系统就不太好了吧？
非常感谢！ |
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S**********e
发帖数: 620 | 4 tam只要和ert2结合就可以马上带领cre去咬loxp，其实都是一次搞定，不要太久不要太
多，否则副作用大，5天其实偏多。
还有tam必须通过肝脏变成4oh-tam才有效果，所以通过皮肤必须用4oh-tam |
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x*****8
发帖数: 10683 | 5 看您的回答，我意识到中国大学第一年普通化学教育真的还不如美国高中AP普通化学的
质量高。美国的数学和物理教育比中国简单，但是生物和化学教育比中国难。
我们知道阴极反应是：
2H+ + 2e -> H2
然后我们比较阳极反应：
2Cl- -> Cl2 + 2e
和
4OH- -> 2H2O + O2 + 4e
给大家最后一次机会查标准电极电位（还原电位）。
当然，我是学过一年大学物理化学的，在爱荷华又做了三年生物物理化学，在这个问题
上比一般同学强一点。 |
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G********e
发帖数: 528 | 6 不会
TAM就可以，如果对老鼠
cell culture的话用OHT |
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l**********n
发帖数: 240 | 7 用tamoxifen连续5天后，可以多等几天再测蛋白。有的蛋白半衰期很长。 |
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i*********0
发帖数: 915 | 8 tamoxifen
这个东西可以在体内被代谢一下，变成4-oht吧。 |
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C**S
发帖数: 522 | 9 Thanks. I did wait for 5 days after the last injection. |
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C**S
发帖数: 522 | 10 Another question: Do I have to use female mice? |
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D*a
发帖数: 6830 | 11 不用非用母的吧，公的母的都会被KO的
你试试加量呢？
我们实验室有人做的，量具体不知道，是早晚各一次持续五天，他们第一次摸的时候弄
了三种不同浓度不同长度的protocol来实验。
另外你的cre真的管用吗？我们隔壁实验室也用cre在另一个器官做ko，我们用的是同一
只flox的老鼠，他们的就效率很低 |
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G********e
发帖数: 528 | 12 顺便请教，你的蛋白去到多干净，或者genotypeing？ |
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S******9
发帖数: 2837 | 13 老鼠诱导用tamoxifem是work的。
但是不同的cre不一样的，有些cre需要gastric lavage才行，大多数是IP。
我做过有ve-cad Cre和Tie Cre无论用那种方法都没有work。我Tie Cre用过每天灌胃
1mg，连续3周也没work。文献有报道6周食物加Tamoxifen。
有几个系统剔除的cre，一般IP 10天， 每天1mg， 在3~4周开始，然后停药1周以后可
以用，老鼠剔除效果在95~99%之间。 感觉IP 5天的，剔除率大概在92~95%。这个都是
根据不同的target定的。
再者，有些cre对于不同组织剔除IP的老鼠年龄也有很大关系，有些脑血管内皮剔除需
要在新生鼠24小时内IP一次，这个时候就需要用4-OH，估计是新生鼠肝脏功能还没有成
鼠成熟，对于Tamoxifen的代谢利用不足吧。 |
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C**S
发帖数: 522 | 14 The one I used is ve-cad cre ...... Did you get it from UCLA? |
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D***y
发帖数: 693 | 16 I used oral gavage (0.8 mg/10g body weight). after 7 days, I can detect it
using rosa26 reporter mice. |
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S******9
发帖数: 2837 | 17 Rosa26 work不等于在你的target上work。
it |
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C**S
发帖数: 522 | 18 谢谢，是同一种。
请问你们最后换到哪一种cre了？ |
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w*e
发帖数: 740 | 19 他们2个都只结合突变的ER，就是我们用的CREER的“ER”
而不结合FEMALE老鼠体内正常的ESTROGEN RECEPTOR。
当然这都是理论上的// |
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D*a
发帖数: 6830 | 20 我记得是会结合雌激素受体，具体作用没研究过
而且刚听见的talk，还会结合到dna 上造成dna damage，普通老鼠没关系会修复了，但
是talk的那个本来打算用induceble的cre来看dna damange的一个蛋白，结果tam让老鼠
全死了，不得已改成传统的cre了
她提到过出了一篇文章是关于这个的，你搜搜吧，她也没说详细
还看见过一篇文章说tam跟igf1 receptor还有点什么关系的 |
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S******9
发帖数: 2837 | 21 Tamoxifen对于乳房的雌激素受体是antagonist的作用，对骨骼是agonist，这就是为何
可以用于乳癌和绝经后骨质疏松的病人的原因。但是由于对子宫内膜雌激素受体有
partial agonist的作用，所以增加子宫内膜癌的患病率。
现在一般用raloxifene是乳房和子宫内膜雌激素受体的antagonist |
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s********l
发帖数: 58 | 22 tam肯定是可以结合内源性雌激素受体的，否则也不会用作临床。
我觉得这个有点心细胞培养的支原体污染一样，很多人清楚，只是闭口不提而已。
tam还可以激活PKC， |
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D*a
发帖数: 6830 | 23 多不多要看一次剂量，其实单次剂量小点，还是五天效果好于短点大剂量
tam注射进去就进肝脏代谢了，皮肤敲除还是通过血管到皮肤的，并不是抹在皮肤的，
不需要用4oh-tam |
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m******e
发帖数: 432 | 24 我没有看错吧。这篇文章的第二页说: Because Cl- oxidation occurs more easily
than H2O oxidation,...
我查了电势：
Cl2(g) + 2e = 2Cl- (1.3595 V)
O2(g) + 4H+ = 2H2O (1.229 V)
O2 + 2H2O + 4e = 4OH- (0.401 V)
应该是可逆符号，这里用等号, [HCl] = 1 M. 怎么算都是水更容易被氧化呀？
牛人现身来指教指教吧 |
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m******e
发帖数: 432 | 25 谢谢你的回复，另外一个问题：为什么水的氧化不会是O2 + 2H2O + 4e = 4OH- (0.401
V)这个反应呢？ |
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