r*****t
发帖数: 4793 | 1 想从基因组DNA扩一个2kb的片断
用invitrogen的taq搞了半天都没有
普通的taq也试了，platinum也试了
有时候一片空白，有时候一堆杂带
请哪位推荐个效率高点的酶
到时包子感谢 |
M****m
发帖数: 2142 | 2 takara HS taq？我们3kb的用普通酶也没有问题，是不是你ｐｒｉｍｅｒ不好？
【在 r*****t 的大作中提到】
: 想从基因组DNA扩一个2kb的片断
: 用invitrogen的taq搞了半天都没有
: 普通的taq也试了，platinum也试了
: 有时候一片空白，有时候一堆杂带
: 请哪位推荐个效率高点的酶
: 到时包子感谢
|
C*******e
发帖数: 4348 | 3 基因组DNA是自己提的么？
会不会是模板不好
如果不是高GC%的序列什么的
一般用Taq扩2kb不应该有问题啊
或者有没有control？
会不会模板里有inhibitor？
稀释看看会不会好些 |
r*****t
发帖数: 4793 | 4 谢谢！
确实那段序列GC比较高，我是用Qiagen的tissue blood cell DNA purification的那个
kit提的基因组DNA，不知道怎么回事 |
r*****t
发帖数: 4793 | 5 模板里有inhibitor是什么意思？ｔａｑ酶的ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ吗？我用ｋｉｔ提的
ＤＮＡ，应该比较干净吧 |
s******s
发帖数: 13035 | 6 试一下phusion? 不过我的经验，plantium还是
挺好用的，高GC的我也批过，多数能批出来。少数
出不来的，换其他的多半也出不来。最容易做的就
是重新设计引物了。
【在 r*****t 的大作中提到】
: 谢谢！
: 确实那段序列GC比较高，我是用Qiagen的tissue blood cell DNA purification的那个
: kit提的基因组DNA，不知道怎么回事
|
n***w
发帖数: 2405 | 7 我觉得应该不是酶的问题吧。
你设个control，用另一对引物p另一个模版，看能不能p出来，这样你就知道是酶的问
题还是其他问题了。
2kb用taq应该不是问题。 |
Z******5
发帖数: 435 | 8 扩高GC的片段，我一直都是Takara的 primerstar 和 LA-taq/GC Buffer 1 一起做，哪
个能扩出来用哪个。
这个很难说，虽然GC含量都很高，但是有些片段用primerstar扩的很好，有些用 LA-
taq/GC Buffer 1 扩的很好。
总之为了节省时间，多试几个酶，几个温度梯度。 |
s****l
发帖数: 395 | 9 加DMSO试试，用自己提的taq比较好，至少浓度有保证
【在 r*****t 的大作中提到】
: 想从基因组DNA扩一个2kb的片断
: 用invitrogen的taq搞了半天都没有
: 普通的taq也试了，platinum也试了
: 有时候一片空白，有时候一堆杂带
: 请哪位推荐个效率高点的酶
: 到时包子感谢
|
