B****m
发帖数: 63 | 1 plantium Taq 就是invitrogen公司的吧？我还没见到其它公司给Taq酶取这么变态的名
字。前段跟一个哥们还专门研究过，它家的plantium含义是hotstart的意思，与保真性
无关。并且还死贵。
要fidelity，尝试一下NEG的Q5吧。前天刚看了他家的介绍，说比Taq保真200倍。 |
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n**********u
发帖数: 77 | 2 Taq 哪一个公司的sensitivity 高一点？ ex taq 说有 3' to 5' exonuclease 活性
，所以proofreading activity 高一点，这个可以理解，但是为什么后面又说ex taq
有high sensitivity 呢？ 这个有关联吗？ |
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r*****t
发帖数: 4793 | 3 想从基因组DNA扩一个2kb的片断
用invitrogen的taq搞了半天都没有
普通的taq也试了，platinum也试了
有时候一片空白，有时候一堆杂带
请哪位推荐个效率高点的酶
到时包子感谢 |
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Z******5
发帖数: 435 | 4 扩高GC的片段，我一直都是Takara的 primerstar 和 LA-taq/GC Buffer 1 一起做，哪
个能扩出来用哪个。
这个很难说，虽然GC含量都很高，但是有些片段用primerstar扩的很好，有些用 LA-
taq/GC Buffer 1 扩的很好。
总之为了节省时间，多试几个酶，几个温度梯度。 |
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d*p
发帖数: 534 | 5 I may need to do large scale cloning, which needs a huge amount of Taq. So I
would like to purify the Taq by myself.
I'll greatly appreciate if you could mail me one. I may email you a Fedex
account.
Many thanks. |
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y****d
发帖数: 46 | 6 Taq酶的特征之一是会在PCR之后在3'端加上polyA尾，这方便了作TA克隆，但是我现在
的实验不希望有这个polyA尾，是否什么办法把它去掉，变成和pfu类似的平末端？谢谢！
补充：实验必须用Taq酶，不能换成pfu或Phusion之类的酶。 |
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p**********t
发帖数: 2636 | 7 ExTaq is great for PCR amplification from low consentration or highly
degraded DNA template. It is much more sensitive than many other taq that I
tried.
My former lab ruitinely deals with decades' old plant samples with lots of
secondary compounds. We tried many diffent taq and settled on ExTaq
No idea about the connection between exonuclease and sensitivities. |
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n**********u
发帖数: 77 | 8 ex taq 比哪些好？ 可以说一下吗？ 我订了Fermentas 的dream taq，有人用过吗？
I |
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p**********t
发帖数: 2636 | 9 没用过dream taq. 比较过QiaGen的Taq, Promega,PrimeStar,还有Golden什么的（好久
不用忘了） |
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f*p
发帖数: 52 | 10 不至于大多数吧，30%左右
应该在taq里面。
此外TAQ数据质量不是特别好 |
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M****m
发帖数: 2142 | 12 takara HS taq？我们3kb的用普通酶也没有问题，是不是你ｐｒｉｍｅｒ不好？ |
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C*******e
发帖数: 4348 | 13 基因组DNA是自己提的么？
会不会是模板不好
如果不是高GC%的序列什么的
一般用Taq扩2kb不应该有问题啊
或者有没有control？
会不会模板里有inhibitor？
稀释看看会不会好些 |
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n***w
发帖数: 2405 | 14 我觉得应该不是酶的问题吧。
你设个control，用另一对引物p另一个模版，看能不能p出来，这样你就知道是酶的问
题还是其他问题了。
2kb用taq应该不是问题。 |
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s****l
发帖数: 395 | 15 加DMSO试试，用自己提的taq比较好，至少浓度有保证 |
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s******9
发帖数: 283 | 16 赐教一个问题，不知道版上有高人知道不：
Illumina在cluster generation protocol里，1st strand synthesis用Taq，然后
cluster generation时换成了Bst。为什么不简单点都用Bst？ |
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E***u
发帖数: 60 | 17 两段p出来以后直接合一起用LA Taq overlapping PCR
不要搞silent mutation了 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 18 LZ please try below (I) to (IV) four strands overlap PCR
your target 7kp=2kp(I)+2kp(II)+2kp(III)+1kp(IV)
if you did not know downstream any conservative sequence information
your 3' RACE can use ligation-anchored PCR
就是用内切酶
//en.wikipedia.org/wiki/Restriction_enzyme
对应的人工引物锚定long mRNA 的3'端 做人工锚定引物
i.e. by NotI it should be inserted to 3'端 5'GC---GGCCGC
from
//en.wikipedia.org/wiki/Restriction_enzyme
Enzyme Source Recognition Sequence Cut
NotI Nocardia otitidis
5'GCGGCCGC
3'CGCCGG... 阅读全帖 |
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y****d
发帖数: 46 | 20 是的，不想要polyA，只是到引物的末端就可以了。
能否详细说说pfu处理的条件？是否需要先把Taq酶除去？
有相关的文献或资料吗？感谢！ |
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s********n
发帖数: 2939 | 21 记得Taq好像是加3'-A吧，klenow没办法补齐的吧? |
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s******s
发帖数: 13035 | 24 phusion
当年实验室一共三种酶
home-made Taq: 做colony PCR筛选用
phusion：做clone，尤其是大片段，那个省时间啊
Plantium HIFI：phusion不work的时候用，比如bisulfite PCR |
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f****e
发帖数: 679 | 25 2nd this. The amplification efficiency of Taq drops sharply when the
amplified fragment is more than 6-7 kb. Phusion works ok for 10 kb, plus it
is fast, saves a lot of time. |
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c********u
发帖数: 250 | 26 简直见鬼了，放在-20的taq昨天还好好的，今天拿出来变得特别粘，简直比封片子的树
脂还粘，取了一点跑了PCR，完全不work。这是怎么回事啊 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 28 LZ U R Lab 有老印不? 莫非她/他 偷偷加了点10% DMSO 到那个 Tag 1 ml tube 了
? !
Taq DNA Polymerase (Native & Recombinant)
www.invitrogen.com › ... ›
Standard PCR EnzymesTaq is inhibited 47% at a concentration of 10% DMSO |
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H*g
发帖数: 2333 | 30 Call the technical support, complain and try to obtain a replacement. At
least let them know what you have experienced.
简直见鬼了，放在-20的taq昨天还好好的，今天拿出来变得特别粘，简直比封片子的树
脂还粘，取了一点跑了PCR，完全不work。这是怎么回事啊 |
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s***m
发帖数: 6197 | 31 粘还是只是glycerol比较多呢？
有没有试试把taq混匀 |
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n**********u
发帖数: 77 | 32 下一部要做TA克隆的，所以是taq，要high sensitiviy的，对于fidelity要求不是那么
的高 |
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s******s
发帖数: 13035 | 33 以前用life的plantium hifi taq，很好用 |
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o********n
发帖数: 100 | 34 Hi 大家好。
请教一下各位做高频交易研究的同好， 小弟所在部门现在购入了TAQ tick data, 包括
quote
data和trade data两部分。 但是由于现在大多数trade都是在darkpool中成交的，因此
小弟想请
教一下， darkpool的成交记录是否会上报纸NYSE? 是以何种方式（延迟或未延迟）递
交的？
谢谢 |
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s*****v
发帖数: 360 | 35 dark pool trades are reported in realtime, and shown in TAQ. |
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A**A
发帖数: 56 | 36 TAQ from NYXData categorizes these trades under exchange code "D". |
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o********n
发帖数: 100 | 37 谢谢各位的回答。
再问一下， 那么大家知道有什么信号会延迟report吗？ 发现TAQ里面总有固定周期交
易量上升的情况。不知到是否是因为algorithm trading的time frame原因还是因为某
种延迟报告机制在起作用？ |
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s******s
发帖数: 13035 | 38 都是理论家。
实际上，pfu+taq能比Taq大概准确6倍，显然不是一部分Taq合成，一部分pfu合成
就能解释的。你要能证明就算pfu一点错误也不出，也只有1/6的amplicon是Taq
合成的，实际上Taq用量要比pfu高。
我的解释是，polymerase在体外合成DNA是一个dynamic的过程，尤其是错配以后，
会导致Taq的移位不顺畅，造成减速/甚至掉落，然后高保真酶就会上去用3->5
exo活性把错配切掉，继续合成。 |
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s****n
发帖数: 234 | 39 Microwave method
(Use this for checking integrants)
Smear fresh colony using pipette tip on bottom/walls of a small PCR tube.
Microwave PCR tubes or strips (without lids) for 90 sec in PCR rack.
Resuspend dried out yeast in 25 ul of PCR reaction mix (with Taq already
added) and perform PCR.
Note: Do not overload PCR rack when microwaving--no more than 3 strips
of 8 tubes per microwaving or heat dispersal becomes an issue.
Alkaline lysis method
(Use this for cloning or for checkin... 阅读全帖 |
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c********n
发帖数: 225 | 40 【生物界的“坏小子们”】（二）PCR
三十几年以前，1983年，Kary Mullis 发明了Polymerase Chain Reaction
（PCR）。
这是一个disruptive technology。
生物研究领域被拓宽了，也影响到了人们生活的各个方面。
n年以前，大学秋季刚开学的时候，有这么一个讲座。
幻灯片投影的大屏幕上是一张意大利某教堂的地砖图案。
“See，the Double Helix has always been there！”
演讲者不停的前后左右摇摆着，一只脚还在 “一二三”，“一二三二一” 不断
变换的踩着节拍。他穿着一套有点别扭的深蓝色西装，里面是件浅蓝色衬衣，
没有打领带，领子就这么随意的竖起来。他的眼睛里时不时发射出一点“闪
闪”的光，随意的扫一扫满满的几百人的阶梯教室。
不管以前有没有读过有关他背景的信息，看到这么一个人，站在这么一个正式
的Scientific Seminar的讲台上，都会震惊一下 - 这真就是Kary
Mullis，inventor of PCR， 诺奖获得者？
接下去，Kary Mullis 谈到了他如何在高速公路128上... 阅读全帖 |
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S*******m
发帖数: 34 | 41 I found the following paragraph on this webpage. I agree with him.
http://www.molecularstation.com/forum/microbiology-forum/20624-pfu-
polymerase-mixed-taq-polymerase.html
Pfu polymerase mixed with Taq polymerase
That won't work. Pfu is a polymerase. It's not capable of
proofreading without polymerizing. So, it won't follow Taq around and
act as a high fidelity proofreader. If you mix the two enzymes, you'll
have some strands of DNA that are high fidelity (which were synthesized
by Pfu), and oth... 阅读全帖 |
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C*I
发帖数: 4736 | 42 一直在误导，现在还在误导。 说说明corona virus 不可以从蝙蝠直接传染给人，必须
经过一个中间宿体性的其它动物才能传染给人。所以，病毒发生后，就故意误导全国人
民去海鲜市场找证据，找其它野生动物的麻烦。 而且还是病毒所去找的，找完了还装
模做样化验呀，分离呀什么的。最后把责任全部推给了海鲜市场的动物。可是那种动物
，一直不敢说，说了其它相关已经在人就会去早那种动物监测。 所以压根不说，打马
虎眼。
事实上，早在2013 年，就是这个武汉病毒研究所，已经从来自云南的蝙蝠身上所携带
的corona virus中分离出第一株蝙蝠SARS类似样的冠状病毒的活病毒，其中就包含了类
似于S类型的基因。从而证实这株病毒能够使其接受和SARS病毒相同的受体，并能够感
染人的细胞。对此新发现，武汉病毒所还把它以武汉病毒研究所的英文简称命名“WIV1
”，以彰显这一发现的重要价值和属于自己第一个发现的巨大研究成果。这个成果刊载
于2013年11月的《自然》杂志。
就是说，从云南弄回来的这种蝙蝠所携带的类似于sars的 corona virus， 可以不经过
其它受体/宿体，而直接传染给人。 他们... 阅读全帖 |
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C*I
发帖数: 4736 | 43 一直在误导，现在还在误导。 说说明corona virus 不可以从蝙蝠直接传染给人，必须
经过一个中间宿体性的其它动物才能传染给人。所以，病毒发生后，就故意误导全国人
民去海鲜市场找证据，找其它野生动物的麻烦。 而且还是病毒所去找的，找完了还装
模做样化验呀，分离呀什么的。最后把责任全部推给了海鲜市场的动物。可是那种动物
，一直不敢说，说了其它相关已经在人就会去早那种动物监测。 所以压根不说，打马
虎眼。
事实上，早在2013 年，就是这个武汉病毒研究所，已经从来自云南的蝙蝠身上所携带
的corona virus中分离出第一株蝙蝠SARS类似样的冠状病毒的活病毒，其中就包含了类
似于S类型的基因。从而证实这株病毒能够使其接受和SARS病毒相同的受体，并能够感
染人的细胞。对此新发现，武汉病毒所还把它以武汉病毒研究所的英文简称命名“WIV1
”，以彰显这一发现的重要价值和属于自己第一个发现的巨大研究成果。这个成果刊载
于2013年11月的《自然》杂志。
就是说，从云南弄回来的这种蝙蝠所携带的类似于sars的 corona virus， 可以不经过
其它受体/宿体，而直接传染给人。 他们... 阅读全帖 |
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C*I
发帖数: 4736 | 44 Published: 30 October 2013
Isolation and characterization of a bat SARS-like coronavirus that uses the
ACE2 receptor
Xing-Yi Ge, Jia-Lu Li, Xing-Lou Yang, Aleksei A. Chmura, Guangjian Zhu,
Jonathan H. Epstein, Jonna K. Mazet, Ben Hu, Wei Zhang, Cheng Peng, Yu-Ji
Zhang, Chu-Ming Luo, Bing Tan, Ning Wang, Yan Zhu, Gary Crameri, Shu-Yi
Zhang, Lin-Fa Wang, Peter Daszak & Zheng-Li Shi
Nature volume 503, pages535–538(2013)Cite this article
Abstract
The 2002–3 pandemic caused by severe acute respirator... 阅读全帖 |
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s******s
发帖数: 13035 | 45 建议
1.pfu掺三倍taq, 用taq批，pfu校对
2.注意hot start
3.换酶，phusion/hifi taq |
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s******s
发帖数: 13035 | 46 6倍就是pfu的准确度，很多commercial的mix就这样称的，应该会有
实验证实，你可以自己去查。
Taq不是永动机，会fall off是常识，尤其是有mismatch，或者非正常
dNTPs. 在fall off的mismatch位置，pfu虽然浓度低，但是有相对优势。
Btw, Taq错配老是fall off也是不能用Taq批长片段的原因 |
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L******s
发帖数: 2349 | 47 和别的没比过，但相对于Taq、Vent之类，Phusion的效率绝对高的多。我从cDNA libra
ry里扩增某些gene的cDNA，taq做不出来的，换Phusion就全做出来了，而且cDNA libra
ry的用量可以减到用taq时的1/10，可能再低也行，不过没有去试。
RTp
但是 |
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q*****d
发帖数: 445 | 48 最近要做library, 使用这个实验室的方法进行易错PCR
（http://www.msg.ucsf.edu/agard/Protocols/PCR_Random_Mutagenesis.htm），酶
是NEB的Taq,但是效果一直不是很好，35 cycle PCR的浓度还是很低，30cycle特别的少
，请问
大家有什么方法提高产量吗？还是我的方法不够好，谢谢大家。
PCR Random Mutagenesis
Materials
1. Parental plasmid
2. Oligos surrounding region to be mutagenized
3. Error-prone PCR buffer (10x is 100mM Tris-HCl, pH8.3; 500mM KCl,
70mM MgCl2, 0.1% (w/v) gelatin.)
4. 10mM MnCl2 (stock) (make sure there is no brown coloring to
stock soln; if there is it means... 阅读全帖 |
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m*********n
发帖数: 215 | 49 你这是啥基因啊？ 有可能是你用的taq／pfu etc.等酶用来selection的基因。我们曾
经需要genotype Lacz，觉得总是污染，但是genotype其他基因都没问题。和楼主一样
所用东西都用新的之后还是不对。后来发现换了一种taq酶之后就好了。我们一致认为
是之前用的那一种taq用lacz筛选过。楼主可以换个公司的酶试试。 |
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n***w
发帖数: 2405 | 50 需要用pGEM T-easy这个vector,
pcr是用phusion做的，得到的是blunt end,
问一下3'端加A，
我是直接在PCR reaction里加一点taq呢（看thermo网站说加A前纯化很重要。。。）？
还是说purify以后再用taq，72度20分钟（这一步还要纯化吗？还是直接可以往下做？
）。
我上次用了purified的和taq一起，然后纯化了，然后TA，结果没连上，都是载体自连
。。。
请有经验的说说。
谢谢～～ |
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