t****p
发帖数: 1504 | 1 最近想在一个比较原始的细胞上建个大的突变库，发现在这个物种上转质粒随机
integrate到genome上的效率大概为1/2000。按这个效率，我需要转上千次才能达到我
要求的库容量。
我怎么记得人的细胞转病毒的话转化率可以高到90%以上？如果是质粒transient
tranfection的话，效率有多高呢？我在想这个原始细胞又没有细胞壁，大小也跟人的
培养细胞差不多，转化效率的上限是否能跟人的细胞差不多。哪怕是转化效率提高几倍
，也能大大减少我的工作量。
OK，问题是：
１：人的培养细胞的转化效率有多高？
２：一般情况下，提高转化效率可以从改变哪几个方面的参数入手？（我用电转，不排
斥其他方法）
３：有一点不太明白，比如人的细胞共同转几个质粒（比如产生ｉｐｓ的时候就共同转
了２４个病毒质粒），为什么转化效率不会大大下降？有人提出说质粒可以缠绕在一起
，一起转化，我很难接受这样的理论。
哪位达人解惑一下。 |
n********k
发帖数: 2818 | 2 do u have the retro/lentiviral system with your system? was it linear or
circular? there are quite a few factors
need to be worked at before u can do it well if no one has done it before...
BTW, ur reasoning about the
transfection efficiency is a bit LOL:))
【在 t****p 的大作中提到】
: 最近想在一个比较原始的细胞上建个大的突变库，发现在这个物种上转质粒随机
: integrate到genome上的效率大概为1/2000。按这个效率，我需要转上千次才能达到我
: 要求的库容量。
: 我怎么记得人的细胞转病毒的话转化率可以高到90%以上？如果是质粒transient
: tranfection的话，效率有多高呢？我在想这个原始细胞又没有细胞壁，大小也跟人的
: 培养细胞差不多，转化效率的上限是否能跟人的细胞差不多。哪怕是转化效率提高几倍
: ，也能大大减少我的工作量。
: OK，问题是：
: １：人的培养细胞的转化效率有多高？
: ２：一般情况下，提高转化效率可以从改变哪几个方面的参数入手？（我用电转，不排
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t****p
发帖数: 1504 | 3
no
was it linear or circular?
either in our system. Linear in my case.
there are quite a few factors need to be worked at before u can do it well
if no one has done it before...
what factors?
BTW, ur reasoning about the
【在 n********k 的大作中提到】
: do u have the retro/lentiviral system with your system? was it linear or
: circular? there are quite a few factors
: need to be worked at before u can do it well if no one has done it before...
: BTW, ur reasoning about the
: transfection efficiency is a bit LOL:))
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t****p
发帖数: 1504 | 4 竟然没人愿意回，我自己再顶一顶。
【在 t****p 的大作中提到】
: 最近想在一个比较原始的细胞上建个大的突变库，发现在这个物种上转质粒随机
: integrate到genome上的效率大概为1/2000。按这个效率，我需要转上千次才能达到我
: 要求的库容量。
: 我怎么记得人的细胞转病毒的话转化率可以高到90%以上？如果是质粒transient
: tranfection的话，效率有多高呢？我在想这个原始细胞又没有细胞壁，大小也跟人的
: 培养细胞差不多，转化效率的上限是否能跟人的细胞差不多。哪怕是转化效率提高几倍
: ，也能大大减少我的工作量。
: OK，问题是：
: １：人的培养细胞的转化效率有多高？
: ２：一般情况下，提高转化效率可以从改变哪几个方面的参数入手？（我用电转，不排
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y***i
发帖数: 11639 | 5 整合率和转化率不是一回事。后者只要进细胞就够了。前者要组装入染色体，当然难太
多了。
很多细胞系用kit的话也能到很高的转染率。但整合率难说。
转染的主要障碍是进入细胞的过程，要么进不去，进去了大家一起进去，所以可以同时
转染很多质粒。
【在 t****p 的大作中提到】
: 最近想在一个比较原始的细胞上建个大的突变库，发现在这个物种上转质粒随机
: integrate到genome上的效率大概为1/2000。按这个效率，我需要转上千次才能达到我
: 要求的库容量。
: 我怎么记得人的细胞转病毒的话转化率可以高到90%以上？如果是质粒transient
: tranfection的话，效率有多高呢？我在想这个原始细胞又没有细胞壁，大小也跟人的
: 培养细胞差不多，转化效率的上限是否能跟人的细胞差不多。哪怕是转化效率提高几倍
: ，也能大大减少我的工作量。
: OK，问题是：
: １：人的培养细胞的转化效率有多高？
: ２：一般情况下，提高转化效率可以从改变哪几个方面的参数入手？（我用电转，不排
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