由买买提看人间百态

topics

全部话题 - 话题: 表达方法
首页 上页 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 下页 末页 (共10页)
J*G
发帖数: 6489
1
发信人: bridged (断桥:向100在线努力,有事写信), 信区: triangle
标 题: 王四新:民主,为什么离不开表达自由?
发信站: 一路BBS (Wed May 6 13:53:14 2009), 本站(yilubbs.com)
王四新 中国传媒大学 副教授
什么是表达自由,从最基本的含义上来讲,比如按照国际人权条约确立的标准,就是
任何人都有持有意见的自由,和使用书面的或口头的或任何他所喜欢的方式,不分国界
地寻求、接受和传递各种信息和思想的自由。
如果没有正当的理由,比如公共安全、保护他人名誉和隐私或为了公共的卫生和道
德,和合法的依据及合理的方式、方法,政府不得限制表达自由。此外,当私主体的行
为构成对信息自由流动和表达自由的侵犯时,政府也有义务予以干涉。
民主离不开表达自由,信息能否自由流动以及公民能否充分地享有表达自由,是民
主政治得以开展的前提,也是衡量政府是否是民主政府的标尺。
政府如果是民主的,就需要市民感受到政府是他们自己的,是代表他们的,要做到
这一点,政府就必须让市民们感受到政府随时倾听着市民的声音,随时以各种各样的方
m*******r
发帖数: 202
2
我们发现在小鼠中knock out我们的靶基因X可以显著地促进细胞的增殖。我们的靶基因
X是一个重要的抑制性转录因子。随后,我们用分别来自wild-type和knockout小鼠的组
织做了RNA-seq分析,想鉴定出我们靶基因X最重要的介导因子。我们获得了很多差异性
表达的基因。请问大家是用什么方法或标准首先从这些差异性表达的基因里筛选出候选
的最重要的介导因子的?然后,再设计实验进行验证。
C********g
发帖数: 9656
3
来自主题: Translation版 - 吴乃龙:也谈英文写作
发布者 siyu 在 11-04-11 08:04
·吴乃龙·
近来读了一些刊登在《华夏文摘》以及其它网络刊物上的有关英文写作的文章,颇受启
发。我也来写一篇,凑凑热闹。
写好英文,诸如简单的便条,电子邮件,复杂的论文,专着(书),不容易。这里说的
“写好”,主要是指用词恰当,语法正确,表述清楚,文理通顺(最基本的要求),
再加上有文采,幽默,典故,等等。我是学理工科的,主要谈谈我在写科技论文和专着
(书)方面多年来所积累的经验和体会。其中的一般原则,对一般的写作也会有用。
1. 多读。
听是说的基础,(阅)读是写的基础。学习写作知识固然重要,但在“读”的时候看别
人怎么样写更为重要。“读书破万卷,下笔如有神”,对中文和英文都是对的。既要读
专业方面的文章和书,也要读一些非专业的东西如报纸,杂志。在专业文章中加入一些
非专业的元素如幽默(当然要恰当),可以使文章更有趣。
2. 多记。
“读”是看别人写,“写”是自己写。模仿是二者之间的桥梁。阅读的时候要把常用的
短语,句型,表达方法,写作格式等等尽量记在脑子里。(词汇问题过于基本,不在此
文提及。)可以写在纸上,以供反复朗读,帮助记忆,... 阅读全帖
S****9
发帖数: 8108
4
赫赫,搞笑跟一个,声明是ZT哈:
那天老美突然问了我句:你们中文里关于做爱,有多少种表达方法?
来一则,发生在我和另外一名美国留学生之间。当时他们都已经被诸如“戊、戌、
戍、戎、戒”或者“己、已、巳”这样的汉字给折腾得快疯了,我很得意,经常有
意无意就在他们面前夸耀中文的博大精深。结果有一天,这老美终于忍不住了
那天我又跟他们说起中文里关于“妻子”有多少种说法,“吃饭”又有多少种说法,
如此等等。说着说着,这老美突然问了我一句:“K,你们中文里关于做爱,
有多少种表达方法?”
我听他这么问,也没想许多,就拿出张纸来开始给他写,穷举了从文雅的
云雨交媾到粗俗的XX(注,此为屏蔽)等大概三十来种中文里关于做爱的
表达方式,完了把纸递给他,心想:你小子这下得服气了吧?
孰料那老美接过纸后扫了一眼,淡淡说道:“K,我们英语里关于做爱的表
达方式实在是太多了,一张纸写不下,今晚回去我e-mail给你吧。”
我愣住了,茫然地点了点头,说了声好。
那天晚上,我在自己的邮箱里看到了下面这份长得不像话的列表……
English words and phrases for sexual intercour... 阅读全帖
m*******r
发帖数: 202
5
我们发现在小鼠中knock out我们的靶基因X可以显著地促进细胞的增殖。我们的靶基因
X是一个重要的抑制性转录因子。随后,我们用分别来自wild-type和knockout小鼠的组
织做了RNA-seq分析,想鉴定出我们靶基因X最重要的介导因子。我们获得了很多差异性
表达的基因。请问大家是用什么方法或标准首先从这些差异性表达的基因里筛选出候选
的最重要的介导因子的?然后,再设计实验进行验证。
n******7
发帖数: 12463
6
来自主题: Biology版 - RNA-seq测的也不是绝对表达值吧
恩,这个同意
我是在琢磨一个基于绝对表达值的方法,如果各个gene表达值不是那么可比,这方法就
不那么有意义了
T*****e
发帖数: 247
7
不知道我理解的对不对。楼主你标题说这个蛋白要形成dimer,但是在背景中没有再提
到dimer。
我根据你的介绍,和seraphzc的回复,提出这样一种想法:
不知道你对研究神经突触的一些工具有没有了解,比如GRASP,大概的意思就是把荧光
蛋白拆成两个部分,然后在A神经细胞表达其中一部分,再在B神经细胞表达另一部分。
如果这两个细胞靠的够近的话,你就能看到荧光。
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18255029
在你这种情况下,可以表达两个不同version的膜蛋白。其中一个version(1)带部分
GFP,另一个version(2)带另一部分GFP。如果他们能正常形成dimer,那你应该能看
到荧光。
但你的model似乎有一点复杂。虽然你的标题说是看dimer的形成有没有变化。但实际上
,我不确定你想看到有或无的dimer结合,还是你model里面更具体的“激酶活性区更靠
近”。
如果是前者的话,你可以参考我上面提到的方法。如果是后者的话,设计起来可能更复
杂。你也许要用FRET,或者这篇文章能给你灵感。
http://www.nature... 阅读全帖

发帖数: 1
8
1月23日,成千上万的抗议者走上委内瑞拉首都的街头,表达对执政党和现任总统马杜
罗的抗议。在如林一般举起来的支持者的手臂面前,35岁的反对派领袖自行宣布担任“
临时总统”,并立刻得到美国为首的西方国家和拉美邻国的承认。委内瑞拉当局的统治
面临严峻的挑战,政权轮替将很有可能和平成功。委内瑞拉发生的事情,再次告诉我们
一件事,那就是:只有人民上街,才是改变政权的唯一办法。
为什么这么说?因为,不仅在类似中国和北韩这样的专制独裁国家,人民没有办法通过
选举等体制内手段改变政权;就是在民主国家,人民上街也是最有效,最直接的政权轮
替方式。委内瑞拉并不是完全的专制国家,它早就具备了完整的宪政民主制度。但是民
主制度并不能保证一个腐败了的政权,可以自行修正自己的错误。在查韦斯四任总统任
期和他的接班人马杜罗的任内,反对派不是没有试图通过选举的方法推翻他们的统治,
但是都无法撼动对方,这里有委内瑞拉选民非理性选择的原因,也有反对派不能团结一
致推出共同领导人的因素。
接下来,委内瑞拉反对党继续探索体制内解决问题的方式,并得到了大部分民意的支持
。2015年12月举行的国会大选,反对派在167席中一举... 阅读全帖
w******n
发帖数: 4955
9
“共情”(empathy),也称为神入、同理心,共情又译作同感、同理心、投情等。
由人本主义创始人美国心理学家卡尔·兰塞姆·罗杰斯(CarlRansomRogers,1902-1987)
提出的,是指设身处地地体验他人的处境,对他人情绪、情感具备敏锐的感受力和理解
力,在与他人交流时,能进入到对方的精神境界,感受到对方的内心世界,能将心比心
地理解对方过去及现在的情感、想法和体验,做出积极回馈,产生情感共鸣,促进沟通
交流,同时,保持思维缜密,引导对方回归理性。作为一种积极有效的沟通方法在医疗
卫生、教育教学、心理咨询等领域广泛应用。笔者作为一名国家三级心理咨询师和反邪
教志愿者,应用“共情”方法,打开了“法轮功”痴迷者甄某的心锁。
尊重和接纳是“共情”的前提 
教育挽救人员对法轮功痴迷人员的态度决定“共情”是否产生或“共情”的程度。
甄某,女,1940 年4月出生,今年75岁,家住大庆市萨尔图区。甄某早年和爱人两地分
居,吃尽了苦头。为了和爱人团聚,她放弃了外地当教师的正式工作来到大庆,没过几
年安稳日子,爱人就早早病逝了。这对她是一个非常沉重的打击,她认为自己心强命不
强... 阅读全帖
z**********i
发帖数: 12276
10
来自主题: Colorado版 - 最有用的教子12种方法 zt (转载)
【 以下文字转载自 afterschool_k12 俱乐部 】
发信人: sunnyshen (sunnyshen), 信区: afterschool_k12
标 题: 最有用的教子12种方法 zt
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Mar 6 13:45:11 2013, 美东)
一、给孩子随性玩耍的时间,不要把生活安排得太有规则
美国儿童教育学者汤姆斯·阿姆斯壮指出,自由玩耍比有计划性的活动,对学龄前
的孩子来说更为健康有益。父母要避免将孩子的时间塞满各种活动。所有的孩子都需要
有一些无所事事,随性玩耍的时间。
二、教导他关怀别人
快乐的孩子需要能感受到自己与别人有某些有意义的连结,了解到他对别人的意义
。要发展这种感觉,可以帮助孩子多与他人接触。你可以和孩子一起整理一些 旧玩具
,和他一起捐给慈善团体,帮助无家可归的孩子。也可以鼓励孩子在学校参与一些义工
活动。专家指出,即使在很小的年龄,都能从帮助他人的过程中,获得 快乐。并养成
喜欢助人的习惯。
三、鼓励他多运动
陪你的孩子玩球、骑脚踏车、游泳…,多运动不但可以锻练孩子的体能,也会让他
变得更开朗。保持动态生活可以适... 阅读全帖
s****n
发帖数: 4902
11
【 以下文字转载自 FilmStudies 俱乐部 】
发信人: leftmind (左脑), 信区: FilmStudies
标 题: 构造通俗小说/剧本的一种方法
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Oct 18 13:01:46 2010, 美东)
关键句:通俗小说的创作过程是读者阅读过程中产生快感过程的逆向工程。你时刻要考虑的是怎么使读者产生阅读快感。假设你要写一个通俗小说,目标是吸引你的潜在读者读两遍。要让人读两遍,这很不容易。
一. 具体写作过程
1.你需要很多很多的有趣细节(发生在角色身上的事件语言等等),有的甚至跟最后的主题并无太大关系。但这些细节是吸引读者读下去的重要动力,并且这些细节往往会给角色带来作者原本没有想到的性格的丰富性和多面性。这就是信息的复杂性。
你需要在结尾部分有个twist(读者喜欢悬疑,这是重要的阅读习惯)。让读者看到这里,嘴里发出“啊”的一声,是你想达到的效果。所谓twist可以前文埋伏下暗示,但毫无征兆,然后在结尾爆发;也可以利用读者的惯常阅读套路阅读习惯,用一些惯常套路桥段把读者往一个方向引导,然后twist往反方向反转。
2.你需要在... 阅读全帖
l******d
发帖数: 5255
12
【 以下文字转载自 FilmStudies 俱乐部 】
发信人: leftmind (左脑), 信区: FilmStudies
标 题: 构造通俗小说/剧本的一种方法
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Oct 18 13:01:46 2010, 美东)
关键句:通俗小说的创作过程是读者阅读过程中产生快感过程的逆向工程。你时刻要考虑的是怎么使读者产生阅读快感。
假设你要写一个通俗小说,目标是吸引你的潜在读者读两遍。要让人读两遍,这很不容
易。
一. 具体写作过程
1.你需要很多很多的有趣细节(发生在角色身上的事件语言等等),有的甚至跟最后的主题并无太大关系。但这些细节是吸引读者读下去的重要动力,并且这些细节往往会给角色带来作者原本没有想到的性格的丰富性和多面性。这就是信息的复杂性。
你需要在结尾部分有个twist(读者喜欢悬疑,这是重要的阅读习惯)。让读者看到这
里,嘴里发出“啊”的一声,是你想达到的效果。所谓twist可以前文埋伏下暗示,但
毫无征兆,然后在结尾爆发;也可以利用读者的惯常阅读套路阅读习惯,用一些惯常套
路桥段把读者往一个方向引导,然后twist往反方向反转。
2... 阅读全帖
x********e
发帖数: 2275
13
还断章呢?
方舟子最后一句话是整段的重点,是他要表达的核心意思。前面一句话,是用来做他的
靶子的,世界反兴奋剂机构的看法是被方舟子的后面一句话否定掉的。
地球人都知道世界上没有绝对可靠的检测方法。但在中国运动员无端受质疑的时候,他
来这么一句貌似公道的废话“实际上目前的检测方法不可靠。”,难道是为了表达对中
国运
动员的支持?
H****h
发帖数: 1037
14
【 以下文字转载自 Thoughts 讨论区 】
【 原文由 rongyuan 所发表 】
转载自“素心学苑”http://www.nease.net/~luolian/zhangwuchang
/maijuzhech05.html
思考的方法(下)
五、例子远胜符号
推理时可用例子,也可用符号;有些人两样都不用,只是照事论事,
随意加点假设,就算是推理。后者是茶余饭后不经心的辩论,算不上
是认真的思考。有科学性的思考,用例子是远胜用符号的。
数学是以符号组合而成的一种语言;严格来说,任何语言文字都是符
号。画面是没有符号的,但也是表达的一种方式。用大量的字来表达
画面,就成了例子。思想是抽象的。要证实抽象思想的正确性,数学
就大有用途,因为它是最严谨的语言。但有效的思考方法却是要将抽
象现实化。画面比符号较接近现实,因此较容易记;所以在思考上,
用例子就远胜用符号了。
以善用数学而负盛名的经济学者,如森穆逊(P.Samuelson)、阿罗
(K.Arrow)、乌沙华(H.Uzawa)、史得格斯(J.Stiglitz )等人
,都是以例子帮助思考的。以数学求证是得了大要之后的事。其他少
M*********s
发帖数: 144
15
来自主题: NextGeneration版 - [转载] 应付小孩闹脾气的方法
了以前看过的那些应付小孩闹脾气的方法吧。耶鲁大学(Yale University)和伦敦国
王学院(King's College London)的研究人员表示,对很多人来说,关禁闭、奖惩表
、不准看电视这些方法事实上都不会导致长期的行为变化。
而经过验证,一套名为“家长管理培训”的技巧对苦于应对孩子难以驾驭行为的家庭十
分有帮助,美国和英国的临床医师已经开始采用这套方法。
这套方法旨在指导家长鼓励孩子的可持续行为变化,是由耶鲁大学和伦敦国王学院的育
儿研究临床中心共同开发的。
研究人员说,即使是激烈的发脾气,或到了骑在家长腿上的地步,也可以得到约束。
Getty Images
一套名为“家长管理培训”的技巧对苦于应对孩子难以驾驭行为的家庭十分有帮助。
研究表明,这些行为似乎一定程度上受到了遗传因素的影响,但家长也会无意识地起到
推波助澜的作用,比如只在孩子尖叫或哭闹时会关注到孩子,而在孩子安静玩耍的时候
就不关注了。
耶鲁大学心理学教授、耶鲁育儿研究中心(Yale Parenting Center)主任卡兹丁(
Alan Kazdin)说,仅仅褒奖好的行为并不是特别有效。世界上每个家长... 阅读全帖
d*******i
发帖数: 1423
16
南京大学生命科学学院,江苏MicRNA生物学与生物技术工程研究中心等处的研究人员发
现植物的微小核糖核酸(microRNA)可以通过日常食物摄取的方式进入人体血液和组织
器官。并且,一旦进入体内,它们将通过调控人体内靶基因表达的方式影响人体的生理
功能,进而发挥生物学作用。这一研究成果公布在Cell research杂志上。
生物通报道:来自南京大学生命科学学院,江苏MicRNA生物学与生物技术工程研究中心
等处的研究人员发现植物的微小核糖核酸(microRNA)可以通过日常食物摄取的方式进
入人体血液和组织器官。并且,一旦进入体内,它们将通过调控人体内靶基因表达的方
式影响人体的生理功能,进而发挥生物学作用。这一研究成果公布在Cell research杂
志上。
领导这一研究的是南京大学生命科学学院张辰宇教授,其研究组主要从事人体及细胞能
量代谢的分子作用机理及其相关疾病的发病机理研究,在国际顶级学术期刊在Cell,
Nature, Science及其系列杂志发表多篇文章,具体参见专访南京大学生科院院长张辰
宇:勿以善小而不为。
据EurekAlert报道,微小核糖核酸(microR... 阅读全帖
d*******i
发帖数: 1423
17
南京大学生命科学学院,江苏MicRNA生物学与生物技术工程研究中心等处的研究人员发
现植物的微小核糖核酸(microRNA)可以通过日常食物摄取的方式进入人体血液和组织
器官。并且,一旦进入体内,它们将通过调控人体内靶基因表达的方式影响人体的生理
功能,进而发挥生物学作用。这一研究成果公布在Cell research杂志上。
生物通报道:来自南京大学生命科学学院,江苏MicRNA生物学与生物技术工程研究中心
等处的研究人员发现植物的微小核糖核酸(microRNA)可以通过日常食物摄取的方式进
入人体血液和组织器官。并且,一旦进入体内,它们将通过调控人体内靶基因表达的方
式影响人体的生理功能,进而发挥生物学作用。这一研究成果公布在Cell research杂
志上。
领导这一研究的是南京大学生命科学学院张辰宇教授,其研究组主要从事人体及细胞能
量代谢的分子作用机理及其相关疾病的发病机理研究,在国际顶级学术期刊在Cell,
Nature, Science及其系列杂志发表多篇文章,具体参见专访南京大学生科院院长张辰
宇:勿以善小而不为。
据EurekAlert报道,微小核糖核酸(microR... 阅读全帖
r******t
发帖数: 629
18
用de3是因为实验室有这个cell line,不用买。其实没de3也没关系。
37度有inclusion body,30度压根不表达蛋白。降温表达的目的就是增加可溶性呗。
鉴定方法是sdspage,而且蛋白本身是红色的,瞄一眼就知道是否表达。
T*****e
发帖数: 247
19
又到周末了,大家也许有点闲暇。版上讨论用果蝇做研究的不是很多,我在这里抛砖引
玉,挑战一下大家。
第一次挑战的题目:如何设计果蝇中的最强荧光报告基因?
简单的背景:
果蝇作为重要的模式生物,个体小,生长周期短,易于饲养,易于观察,染色体数目少
,能吃能睡能学习,各种研究都可以用它。种种优点让果蝇成为重要的生物学研究模型
。对研究人员来说,果蝇同时具备的一大优势是,有数不清的遗传学研究工具可以用。
就算你自己生造一种,也并不费时费力。这两年特别火的CRISPR更是把这一点推向了高
潮。那么,最常见的一种研究手段就是用一些人为设计的转基因工具,操控果蝇的基因
表达,从而改变某些细胞中的基因功能。以过表达为例,一个简单地UAS驱动的转基因
,加上时间空间特异性的Gal4 line,就可以非常容易的实现超高的表达量。为了防止
某些同学说太高的表达会杀死细胞,我这里限定只能使用荧光蛋白。因为是外源性的,
一般不大会干扰正常的细胞生理功能。
挑战的方法很简单,我在这里写一个UAS驱动的报告基因,如果你觉得其中哪个部分有
提高的空间,能够让这个转基因的表达量提高,就算挑战成功。
为了不放水,我先写一... 阅读全帖
m**c
发帖数: 7299
20
【 以下文字转载自 GayStudy 俱乐部 】
发信人: msgc (为了下一代免遭变态残害), 信区: GayStudy
标 题: 关于戒除同性恋方法的启示与建议
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Oct 22 17:02:55 2012, 美东)
关于戒除同性恋方法的启示与建议
[ 作者:真实自我 来自:本站原创或来自网络 点击数:3699 文章录入:
丑男孩 ]
  续《如何摆除同性恋经典》
  关于戒除同性恋方法的启示与建议(以下纯属个人建议)
  近一段时间,很多网友和我聊天都想戒除同志,其实戒除同志并不像大家想象
的那么复杂,很多人是因为学习或者工作的压力,有的人是生理的问题(当时是指人体
的发展规律,例如三十岁左右假性同性恋的概率高),所以正确认识同性恋很重要。
  很多人一开始是出于好奇或者寻求刺激,殊不知你已经陷入了魔爪。
  其实目前很多原因导致大家有这种趋向。本人认为是自己身心都不平衡所导致
的。建议大家有空多多修身养性。了解事物真是的面目,发展的看问题。重新找回真实
的自我!
  戒除方... 阅读全帖
m**c
发帖数: 7299
21
【 以下文字转载自 GayStudy 俱乐部 】
发信人: msgc (为了下一代免遭变态残害), 信区: GayStudy
标 题: 关于戒除同性恋方法的启示与建议
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Oct 22 17:02:55 2012, 美东)
关于戒除同性恋方法的启示与建议
[ 作者:真实自我 来自:本站原创或来自网络 点击数:3699 文章录入:
丑男孩 ]
  续《如何摆除同性恋经典》
  关于戒除同性恋方法的启示与建议(以下纯属个人建议)
  近一段时间,很多网友和我聊天都想戒除同志,其实戒除同志并不像大家想象
的那么复杂,很多人是因为学习或者工作的压力,有的人是生理的问题(当时是指人体
的发展规律,例如三十岁左右假性同性恋的概率高),所以正确认识同性恋很重要。
  很多人一开始是出于好奇或者寻求刺激,殊不知你已经陷入了魔爪。
  其实目前很多原因导致大家有这种趋向。本人认为是自己身心都不平衡所导致
的。建议大家有空多多修身养性。了解事物真是的面目,发展的看问题。重新找回真实
的自我!
  戒除方... 阅读全帖
m**c
发帖数: 7299
22
【 以下文字转载自 GayStudy 俱乐部 】
发信人: msgc (为了下一代免遭变态残害), 信区: GayStudy
标 题: 关于戒除同性恋方法的启示与建议
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Oct 22 17:02:55 2012, 美东)
关于戒除同性恋方法的启示与建议
[ 作者:真实自我 来自:本站原创或来自网络 点击数:3699 文章录入:
丑男孩 ]
  续《如何摆除同性恋经典》
  关于戒除同性恋方法的启示与建议(以下纯属个人建议)
  近一段时间,很多网友和我聊天都想戒除同志,其实戒除同志并不像大家想象
的那么复杂,很多人是因为学习或者工作的压力,有的人是生理的问题(当时是指人体
的发展规律,例如三十岁左右假性同性恋的概率高),所以正确认识同性恋很重要。
  很多人一开始是出于好奇或者寻求刺激,殊不知你已经陷入了魔爪。
  其实目前很多原因导致大家有这种趋向。本人认为是自己身心都不平衡所导致
的。建议大家有空多多修身养性。了解事物真是的面目,发展的看问题。重新找回真实
的自我!
  戒除方... 阅读全帖

发帖数: 1
23
苏西·登特
一月戒酒(Dry January)才刚结束,那些‌‌‌‌“暂时&#
8204;‌‌‌”戒酒的人马上就恢复痛快豪饮的状态(on the booze)
。‌‌‌‌“booze‌‌‌‌”(暴饮)
这个词似乎带有一点蔑视的意味,还可能含有大量颓废的色彩。它听起来很摩登,但实
际上已经有500年的历史,它由荷兰语中表示‌‌‌‌“过量饮
酒‌‌‌‌”的‌‌‌‌“buizen‌
;‌‌‌”发展而来。该词最早出现在伊丽莎白时期的戏剧《粗鲁的接
待》(Jack Drum's Entertainment)和一句很精辟的话中——‌‌‌
‌“你需要痛饮一番‌‌&#... 阅读全帖

发帖数: 1
24
最后还得老老实实回到做重组蛋白这条老路上来
成都--(BUSINESS WIRE)--三叶草生物制药,一家全球临床阶段,致力于创新及变革性
生物制药研发的生物制药公司,今天宣布在哺乳动物细胞内成功表达 “S-三聚体” 新
型冠状肺炎病毒(2019-nCoV)重组蛋白疫苗,并在成都高新区政府和成都市公共卫生
临床医疗中心的大力协助下,用新获得的 “S-三聚体” 抗原在多例病毒感染患者康复
后血清中检测到病毒特异性抗体。重要的是,三叶草是全球第一家披露一个新冠病毒疫
苗候选物可以被病毒感染患者的抗体所识别,这一结果表明 “S-三聚体” 重组抗苗保
留了新冠病毒S-蛋白抗原天然的结构,因此 “S-三聚体” 疫苗有望在人体中诱导保护
性的免疫反应。
如同HIV(艾滋病毒), RSV(呼吸道合胞病毒)及 Influenza Virus (流感病毒)的
表面抗原结构一样,这次在中国武汉发现的新型冠状肺炎病毒2019-nCoV也是RNA病毒,
其表面抗原S蛋白也具有天然三聚体结构,病毒通过其三聚体抗原(S蛋白)与宿主细胞
表面ACE2受体结合,从而进入人体细胞,导致发烧、肺部感染等疾病。
在中国科学... 阅读全帖
w*********0
发帖数: 325
25
拒绝谣言,请尊重你的表达权
上周朋友给我打电话,说湖南好些人在“三月三”吃地米菜煮鸡蛋后中毒身亡,于是她
家把地米菜都扔掉了。后来长沙市卫生局等机构调查发现,地米菜有毒纯属谣言。近日
,又有一则关于“北京小学生被拐走并盗割眼角膜”的消息在网络上流传后被辟谣。
谣言总是层出不穷,而且有些还变相重复出现,比如大学男生被色诱偷肾、乘坐地
铁遭遇迷药等。如何杜绝谣言传播呢?这样的道理虽是众所周知,但现实中并非人人都
能遵守,就是面对一则消息时,需养成核实的习惯,谨防轻易被它牵着鼻子走。
在互联网时代,每个人都有了自己的表达平台,人们在享受表达自由的时候,不能
忘却与自由相伴的责任。你发布的信息将在公共领域传播,可能对社会产生影响,你就
应该对自己的信息负责。著名新闻人普利策对记者的要求是“核实,核实,再核实”。
那个年代,记者是信息的传播者;现在,大家都可以成为信息的传播者,相应地,大家
也需要树立核实的观念。
拒绝谣言,既是一种态度,也是一项技术活儿。人们传播谣言时往往心理恐慌,或
者有某种偏见,前者见于“艾滋病人滴血传播病毒”的流传、人们在日本地震期间抢购
食盐,后者见于药家鑫案中猜测药是... 阅读全帖
T*****n
发帖数: 897
26
【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: Tonyvan (Tony), 信区: Biology
标 题: microarray及real time PCR发现了一些基因表达降低,但却不能用WB及ELISA证明怎么办?
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Mar 23 21:00:10 2012, 美东)
我们做microarray发现了一些基因表达降低,随后用real time PCR 也得到确认。但我
们试图用western blot及ELISA的方法去证明蛋白表达也降低时却遇到麻烦,因为
western和ELISA显示蛋白表达正常。有点想不通。大家遇到过这样的情况吗?
a*o
发帖数: 25262
27
来自主题: LeisureTime版 - 表达
动物的表达方式只是要满足它切逼的需要,就如母的发情的时候,碰到个公的,就交配
了,然后就分道也许永远也再也见不着了。这是动物的天性,当然有些动物也是成双成
对让另外一种动物“人”去赞美。。
但是那些都只是动物的天性,活着的意义。
相反,人所谓有“智慧”就是美其名曰附加的装饰词。有了“智慧”其实就把直接的表
达用掩盖的方法表达出来,也可以说是伪装。。
其实哲学,心理学研究不就是反“伪装”把人重新归纳成为动物行为的东西?让人把要
表达出来的譬如“性”直接表达出来,不用扭扭捏捏地脸红装着不需要?
S******e
发帖数: 393
28
当时我转的蛋白较大,检测tag可以看到表达,但用蛋白本身抗体检测就看不大出来差
异,说明表达量还不够高。
MCS后一般有stop condon, 所以你的stop condon 没测出来应该没大问题。
我做transfection的质粒一般A260/280 是大于等于1.9, Qiagen kit prep.
plasmid浓度最好1ug/ul 以上。
我觉得你看不到差异的原因很可能是表达量还不够,但你没有tag也没法检测它是否已
表达,你把效率提上去再检测看看,我觉得还是很有希望。
提高转化效率也是我一直的问题,但我估计我转的质粒比你大,我前几天在这问过这个
问题。 你先用脂质体方法试两次,LTX或lip2000, 若还不行,建议你再try电转,据说
效率高出很多。
s******y
发帖数: 28562
29
来自主题: Biology版 - Cre小鼠GFP fusion蛋白表达困扰
我们也有类似经历,不过幸运的是我们转进去的只是一个单独的GFP
reporter, 看不到就拉倒了,反正有其他方法来知道哪个是transgenic老鼠.
我们的感觉是很多转进了老鼠内部的基因会有可能被体内的机构关起来不让
表达,或者表达大大降低。
你的情况,最好是这样:
1。把组织提出来做western blot
2. 用anti-GFP 来加强荧光。
我们一向都用Roche mouse anti-GFP,他家的抗体stock solution稀释得比较高,所以
用的时候不能稀释太多(所以比较不经用),但是特异性比较高。

invitrogen) ,结果很失望,发现GFP表达弱,且阳性细胞少;同样的Cre line 和
ROSA26-YFP杂交后,同样的染色,YFP表达很强,阳性细胞很多。
lox

发帖数: 1
30
BBC
作者:
苏西·登特
一月戒酒(Dry January)才刚结束,那些‌‌‌‌“暂时&#
8204;‌‌‌”戒酒的人马上就恢复痛快豪饮的状态(on the booze)
。‌‌‌‌“booze‌‌‌‌”(暴饮)
这个词似乎带有一点蔑视的意味,还可能含有大量颓废的色彩。它听起来很摩登,但实
际上已经有500年的历史,它由荷兰语中表示‌‌‌‌“过量饮
酒‌‌‌‌”的‌‌‌‌“buizen‌
;‌‌‌”发展而来。该词最早出现在伊丽莎白时期的戏剧《粗鲁的接
待》(Jack Drum's Entertainment)和一句很精辟的话中——‌‌‌
‌“你需要痛饮一番‌&... 阅读全帖
s****y
发帖数: 1574
31
作者:南桥
最近出门,在芝加哥转机的时候,遇到一个家长,说和我们来自美国中南部的同一个城
市。她说以前在中文学校见过我们一家,家里分别在上高中和初中的两个孩子过去也上
中文学校,但是越学越头大,怨声载道。这个家长还算开明,让孩子们退出了中文学校
。又是一个熟悉的结局。
海外中文学校多为家长自发组建的周末补习班,带着孩子来上中文学校的家长出发点不
一。有的家长觉得学会中文孩子以后找工作机会更多,我以前认识一 个家庭,家里老
大老二年龄相差颇大,老大大学毕业后,本有机会外派中国,其薪水会是现有薪水的双
倍,但是老大从小没有学会中文,错失良机。家长抱着亡羊补 牢心态,把老二送到中
文学校上学。还有的家长是为了让孩子上中学后,把中文当“外语”,好迅速通过AP(
美国大学预修课程)考试,省钱省学费。更多的家 长,是想让孩子会一些中文,留住
过去文化的根。这种初衷无可指摘,甚至让人产生敬意。
结果却让人十分失望。我们周围不少家庭的孩子,中文学校是上一上,歇一歇,有一搭
没一搭,辍学率也高。在美国的ABC (出生于美国的华裔儿童)中:“我恨中文学校。
”("I hate Chinese school... 阅读全帖
c***s
发帖数: 70028
32
著名物理学家霍金更新微博,发文鼓励高考生。网友表示:“真·学霸·锦鲤”、“觉得自己充满力量”、“学到了高考的最正宗的表达方法”。
霍金微博截图
霍金(资料图)
6月6日,著名物理学家霍金更新微博,发文鼓励高考生。网友表示:“真·学霸·锦鲤”、“觉得自己充满力量”、“学到了高考的最正宗的表达方法”。
微博原文:
你们中的许多人即将参加#2016高考#,我在这里祝愿你们,新一代的科学人才,金榜题名。这是你们勤学不辍的顶峰,也标志着你们美好未来的开始。
在我成长的过程中,我的父母一直很重视教育。我很庆幸这一路来学习给我带来得无数的机会。无论你励志成为一名医生、老师、科学家、音乐人、工程师或是作家 —— 请勇往直前地追逐你的梦想。你们是下一代的大思想家和意见领袖;未来将因你们而生。
新闻链接
霍金开通微博发文带中文翻译 粉丝超百万
媒体称,知名宇宙学家霍金也开了微博,并在12日发出第一条带有中文翻译的微博,粉丝已迅速增至百万。
霍金在微博发文向大陆网友问好,并表示上次拜访中国是在2006年,当时在北京参加一场物理会议,经历非常难忘;至于首次造访中国则是在1985年,当时乘坐火车游历了大陆。
霍... 阅读全帖
k***g
发帖数: 7244
33
其实现在也用牛顿的符号体系(譬如 \dot{x} ),主要用在对时间 t 求导的问题以及
相关微分方程上,所以不仅在物理学上习惯这样用, 其它和时间相关的学科譬如宏观
经济学,也习惯用 dot 来表示导数;
莱布尼兹符号是一般普遍的表达方法,但是在某些具体的情况下,也用其他人的符号体
系,譬如解 PDE 是用的一般都是欧拉的表达方法 (用D来表示求导,或者进一步简写为
f_x),解 ODE,一般用拉格朗日的符号,f'
c*****1
发帖数: 3240
34
来自主题: History版 - [合集] 美国显然更像罗马帝国
☆─────────────────────────────────────☆
genghishan (大汉) 于 (Mon Feb 15 17:41:19 2010, 美东) 提到:
欧洲=古希腊,文明古国,内部基本同宗的城邦(英法德等日耳曼人后裔建立的国家)
争斗不休。
美国=古罗马,发迹于西部(罗马之于希腊,美国之于欧洲)落后的文明的角落,凭借
超群的军事能力,吃苦耐劳的百姓,坚韧不拔的公民兵以及优越的自然地理环境后来居
上,先征服当地部落(印第安人)和驱除外部凯尔特人,希腊人,迦太基人势力(美国
击败英国殖民,驱逐北美大陆上,西班牙,法国,荷兰等国家的势力)统一意大利半岛
。在二次大战里面彻底击败纳粹德国,取代大英帝国成为世界霸主(罗马击败皮尔斯王,彻底征服意大利南部希腊人移民城市;罗马在Battle of Pydna里面,决定性的击垮马其顿王和证明罗马中队战阵对希腊重步兵方阵的优势,彻底征服希腊本土)。
罗马现在像第二次布诺战争结束(前苏联=迦太基)后,基本成为世界独大,但是带来的后果就是中产阶级在廉价的奴隶劳动力(made in China, Mexican il... 阅读全帖
l**m
发帖数: 2675
35
来自主题: NextGeneration版 - 我家的睡训纪录
男娃五个半月,之前姥姥姥爷在 听不得哭 每天要花很久哄睡 一哭基本就要抱起来安
抚或喂奶 后来居然一度发展为必须要奶睡 只要没睡着放进crib里就大哭 夜里还要喂
一到两次。 趁着姥姥姥爷和爷爷奶奶交接的空挡 我们两个狠心父母立刻着手开始了残
酷的睡训-let it cry!
首先规律睡觉时间:每天下午4点吃,7点洗澡,7点20再喂 喂饱就放进crib 让娃自己
睡 哭就采用2-5-10-15-20。。。安抚节奏
第一日:娃没明白怎么回事 哭猛了 哭了10分钟就太累睡着了 我们以为睡训很容易 夜
奶吃了一次 吃完由于是半夜不方便睡训 就co-sleep了
第二日:娃哭了一个小时 终于累睡 半夜还是夜奶+co-sleep
第三天:哭了50分钟 累睡 夜奶+co-sleep 我们开始纠结 怀疑睡训方法 担心会对
孩子产生不好的影响
第四日:爷爷奶奶来了 为了让他们能好好休息一下 整夜co-sleep+奶睡
咨询了一下外国同事,同事说:你完全不需要愧疚,娃哭不代表他悲伤,只是他要表达
不想睡觉的想法,哭是他唯一的表达方法,作为父母 知道充足睡眠对娃的成长是非常
重要的 是正确的 那... 阅读全帖
V***l
发帖数: 2108
36
来源:爱思德语网
德语似乎要比英语更难说出口,如果是在国内学习的同学,学完初级后似乎还没多少人
能开口说的,即便是那些在德国学习并通过了DSH的同学,他们的口语水平似乎并不比
德国三岁小孩强很多。和听力一样,口语也是国人的传统弱项。
如何提高口语?方法很多,请选择适合你的和能实现的:
A. 找语言伙伴。如果你在国内,要尽力去找,比较费劲,但也不是不可能,比如
很多大学都有中德学院,里面有有一些来自德语国家的留学生,你们可以用交换的方式
,一个学德语教汉语,另一个学汉语,教德语,只要用来表达了,天天开口说德语,虽
然刚开始时都难以理解对方,对话简直就象鸡同鸭讲,最后还得配上不少的表情和动作
才能让对方破译。但是渐渐的,口语会取得很大的进步。值得一提的是,德国人的性格
比较冷漠,所以要学会激发他们说话的意愿,所以会提问题就显得非常重要,多问问他
们对身边事物的个人看法,他们会变得很健谈的,你从中也能学到正确的表达。
B. 自言自语。如果你平时就有自言自语说中文的习惯,那么从现在开始,改成自
言自语说德语。如果没有这种习惯,那就去培养吧,这是一种有利于健康的行为。如果
你不是那种喜欢说话的人
x**********g
发帖数: 75
37
"神既然是万能的,为什么只有独子?就不能多生几个?"
我估计一个原因是神是灵,灵的数量表达方法与我们所见的物质世界的数量表达方法可
能不完全相同,因此不能完全将我们的数量思维方式生搬硬套地应用于思考上帝。
"天主/基督教号称神只有独子,然后把独子以外的都称为异端,是为了垄断吧?"
对异端的判定与其对耶稣基督的认信有重要关系,但不是仅根据这点。将打着基督教旗
号其实不是基督教的宣布为异端是应该有的鉴别,难道为了博得“没有垄断”的虚名就
应该将不是基督信仰的反承认为正统吗?
"为什么道成肉身这事从亘古至今只发生了辣么一次,就不能多来几次么?是神做不
到还是不想做还是其它?"
我觉得是因为完全没有必要也没有可能再有一次道成肉身,因为已经发生了,并且一直
持续到今天,还会持续到将来。耶稣基督今天难道不是肉身吗?
"基督教宣传“神把独子赐下,为人类舍命”,要求人们因此相信,与--大陆铲党宣
传“红旗是革命烈士的鲜血染红的”,因此要求老百姓爱党--的逻辑,是不是一致的?
" "
关键是这两种宣称是否是事实,是否将所有的与此有关的必要事实都如实地告诉了人们
,是否为了获得人们的好感而隐瞒了某些重要相... 阅读全帖
x**********g
发帖数: 75
38
"神既然是万能的,为什么只有独子?就不能多生几个?"
我估计一个原因是神是灵,灵的数量表达方法与我们所见的物质世界的数量表达方法可
能不完全相同,因此不能完全将我们的数量思维方式生搬硬套地应用于思考上帝。
"天主/基督教号称神只有独子,然后把独子以外的都称为异端,是为了垄断吧?"
对异端的判定与其对耶稣基督的认信有重要关系,但不是仅根据这点。将打着基督教旗
号其实不是基督教的宣布为异端是应该有的鉴别,难道为了博得“没有垄断”的虚名就
应该将不是基督信仰的反承认为正统吗?
"为什么道成肉身这事从亘古至今只发生了辣么一次,就不能多来几次么?是神做不
到还是不想做还是其它?"
我觉得是因为完全没有必要也没有可能再有一次道成肉身,因为已经发生了,并且一直
持续到今天,还会持续到将来。耶稣基督今天难道不是肉身吗?
"基督教宣传“神把独子赐下,为人类舍命”,要求人们因此相信,与--大陆铲党宣
传“红旗是革命烈士的鲜血染红的”,因此要求老百姓爱党--的逻辑,是不是一致的?
" "
关键是这两种宣称是否是事实,是否将所有的与此有关的必要事实都如实地告诉了人们
,是否为了获得人们的好感而隐瞒了某些重要相... 阅读全帖
C**********B
发帖数: 24
39
来自主题: Computation版 - 有限元是个烂数值方法;
ls的: 不管lz是跳梁小丑还是经验丰富,不管我有没有看出来他是在干什么,也不管想拜他为师的人怎么想,在这个自由发表意见的地方,你要想得到被人的尊重,不想被别人攻击,在表达自己观点的时候就要尊重别人的观点,不要去攻击他人。否则讨论就变成了吵架,而你自己也是得不到尊重的。当然,在论坛上这种事情经常发生,怕你也习以为常了。我对你这种行径的反感是我不大上论坛的主要原因之一。如我前面所说,要不是需要给侄女找专业信息,我也不会偶然看到这个版面,来跟你胡搅蛮缠。发第四个帖子就是跟人针锋相对,感觉很不爽。
你如果对他人观点不屑一顾,可以一笑了之。但如果你要发表言论,就算是反对的言论
,也应该要以尊重他人为基础。lz的确有不少漏洞,我也不敢苟同他这个帖子和其他几个帖子里的很多观点。但他自称经验丰富,我无法也无时间去确认,也不愿去争这个口舌,当时更是没有时间去浏览其他帖子了解别人和lz在其他帖子里的争论。所以为了避免吵架也就假设他的确经验丰富,然后来表达我的不同观点。难道我不攻击人就是把他当大师了?笑话!如果你也知道一点要尊重他人,你有什么好笑的?在你叫别人擦亮眼睛的时候,你有没有意识到你的眼睛已经被自... 阅读全帖
s*****2
发帖数: 117
40
有多检测方法的BER,比如a,b,c,d等4种方法。
其中a是最优的,其他三种方法是suboptimal的
想比较一下在某几个点的时候这几种次优方法的performance loss,
请问该用和表达式来表达各种方法的performance loss?
比如:-10*log(b' ber/a's ber)
还是:-20*log(b' ber/a's ber)
or -*log(b' ber/a's ber)
或者其他表达式?thanks
p****p
发帖数: 3360
41
再谢版主把这个版开起来了!
我用果蝇做神经行为学。希望多多了解对神经细胞、neural circuit的functional
manipulation都有什么方法,各有什么优点?
我先说两个能想得起来的:
1. 组织特异性表达离子通道,K,Na,trp channels, channelrhodopsin etc。K,Na
通道constitutive 的表达容易杀死细胞,channelrhodopsin用光来激活,可是有时候
光也会干扰结果。
2. 阻断vesicle traficking。
3. ???
l******d
发帖数: 5255
42
来自主题: _FilmStudies版 - 构造通俗小说/剧本的一种方法
假设你要写一个通俗小说,目标是吸引你的潜在读者读两遍。要让人读两遍,这很不容
易。
一. 具体写作过程
1.你需要很多很多的有趣细节(发生在角色身上的事件语言等等),有的甚至跟最后的主题并无太大关系。但这些细节是吸引读者读下去的重要动力,并且这些细节往往会给角色带来作者原本没有想到的性格的丰富性和多面性。这就是信息的复杂性。
你需要在结尾部分有个twist(读者喜欢悬疑,这是重要的阅读习惯)。让读者看到这
里,嘴里发出“啊”的一声,是你想达到的效果。所谓twist可以前文埋伏下暗示,但
毫无征兆,然后在结尾爆发;也可以利用读者的惯常阅读套路阅读习惯,用一些惯常套
路桥段把读者往一个方向引导,然后twist往反方向反转。
2.你需要在情节的前半部埋伏下很多很多伏笔,至少有五个伏笔。草蛇灰线是吸引读者
读第二遍的重要条件。记得天龙八部吧,在第一部木婉清初见段誉爹娘的时候,不喜欢
段誉父亲,心中思量幸好段誉长得象妈。到第五部才揭示出段誉父亲另有其人。
这种伏笔是可以使读者看第二遍的时候发出“嗯”的声音,并且会心一笑,有了智力上的优越感,和自以为跟作者的虚幻的共鸣感。对吸引读者读第二遍很重要。... 阅读全帖
l******d
发帖数: 5255
43
来自主题: _FilmStudies版 - 构造通俗小说/剧本的一种方法
20.纯感受段落加入逻辑情节的方式——段落的双重功能
例子:
Take this Waltz 2011
(是个恋爱片,当然显然是个出轨片。
Sarah Polley,导演水平比第一部away from her强不少,后者是在是太闷了,除了老
头老太太估计很难看得动。剧本水平不好说了。
看看sarah的简历婚姻状况,感觉sarah这厮在片子里加入了自己的真实感受。片子里有
个情节,出轨少妇泳池运动馆内洗澡后,与跟踪的拉车贱男下午喝酒,女的情绪上来,
就说:I want to know what you do to me?男的立马开始描述加入俩人偷情,他会怎
么怎么爱抚少妇,直至如何如何××OO她。女的受不了离席回家,见到老公,就洗了个
澡——诸位,不要想歪了直奔下三路而去。人导演实际想说的是少妇听君一席话,产生
了不洁感。是心理变化,不是生理变化!
里面诸多裸丑女洗澡的画面,真是惨不忍睹,这显然是女性导演在向全体观众和世界的
宣示与逆反。
Michelle Williams越来越难看(这点跟sarah polley差不多),但演戏水平还没降低
。她和scarlett johannson... 阅读全帖
l******d
发帖数: 5255
44
来自主题: _FilmStudies版 - 构造通俗小说/剧本的一种方法
20.纯感受段落加入逻辑情节的方式——段落的双重功能
例子:
Take this Waltz 2011
(是个恋爱片,当然显然是个出轨片。
Sarah Polley,导演水平比第一部away from her强不少,后者是在是太闷了,除了老
头老太太估计很难看得动。剧本水平不好说了。
看看sarah的简历婚姻状况,感觉sarah这厮在片子里加入了自己的真实感受。片子里有
个情节,出轨少妇泳池运动馆内洗澡后,与跟踪的拉车贱男下午喝酒,女的情绪上来,
就说:I want to know what you do to me?男的立马开始描述加入俩人偷情,他会怎
么怎么爱抚少妇,直至如何如何××OO她。女的受不了离席回家,见到老公,就洗了个
澡——诸位,不要想歪了直奔下三路而去。人导演实际想说的是少妇听君一席话,产生
了不洁感。是心理变化,不是生理变化!
里面诸多裸丑女洗澡的画面,真是惨不忍睹,这显然是女性导演在向全体观众和世界的
宣示与逆反。
Michelle Williams越来越难看(这点跟sarah polley差不多),但演戏水平还没降低
。她和scarlett johannson... 阅读全帖
m*****n
发帖数: 1270
45
上周朋友给我打电话,说湖南好些人在“三月三”吃地米菜煮鸡蛋后中毒身亡,于是她
家把地米菜都扔掉了。后来长沙市卫生局等机构调查发现,地米菜有毒纯属谣言。近日
,又有一则关于“北京小学生被拐走并盗割眼角膜”的消息在网络上流传后被辟谣。
谣言总是层出不穷,而且有些还变相重复出现,比如大学男生被色诱偷肾、乘坐地铁
遭遇迷药等。如何杜绝谣言传播呢?这样的道理虽是众所周知,但现实中并非人人都能
遵守,就是面对一则消息时,需养成核实的习惯,谨防轻易被它牵着鼻子走。
在互联网时代,每个人都有了自己的表达平台,人们在享受表达自由的时候,不能
忘却与自由相伴的责任。你发布的信息将在公共领域传播,可能对社会产生影响,你就
应该对自己的信息负责。著名新闻人普利策对记者的要求是“核实,核实,再核实”。
那个年代,记者是信息的传播者;现在,大家都可以成为信息的传播者,相应地,大家
也需要树立核实的观念。
拒绝谣言,既是一种态度,也是一项技术活儿。人们传播谣言时往往心理恐慌,或
者有某种偏见,前者见于“艾滋病人滴血传播病毒”的流传、人们在日本地震期间抢购
食盐,后者见于药家鑫案中猜测药是“官二代”、“李刚门”中传播... 阅读全帖
m****m
发帖数: 395
46
来自主题: Biology版 - 请教一下膜蛋白表达问题
膜蛋白难表达是很正常的事。
先把各种可能性一一排除,然后确定原因。各个击破。一次改变一个条件,一次解决一
个疑问。
关于测序的事,如果可以的话,还是想想办法做一下。
先从涂板开始,每个菌落小量摇菌,检测质粒的存在,还有生长活性。标记好有质粒的
菌,挑选最有活力的菌进一步做表达蛋白,有几个问题需要解决:OD生长到多少的时候
开始换培养基最好?(一般是对数生长期吧,不过自己也可以试一下在不同生长期)。
更换培养基后,多久以后开始诱导?(我一般是1个小时以后,不过你可能不同,要试
一下)。分几个不同的温度进行诱导(更换培养基后就用这个温度)、诱导多久后膜蛋
白表达量最高?(这个就要麻烦你要每隔一段时间取点菌去测一下有没有蛋白了)最后
决定最佳诱导温度和时间,还有你说的IPTG量的问题,也可以试一下,抗生素的浓度也
要控制好,太高菌就不长了,太低么要长杂菌。最后裂解细菌,看你用什么方法了,裂
解完离心后膜蛋白有可能在上清液里,也有可能在PELLET里。确定这个以后,就可以开
始纯化了。总之每个步骤都要严格监控,别把蛋白弄丢了。
小小建议呈上,希望对你有所帮助,祝你成功~ 实在不行,最后可以去做
T*****n
发帖数: 897
47
我们做microarray发现了一些基因表达降低,随后用real time PCR 也得到确认。但我
们试图用western blot及ELISA的方法去证明蛋白表达也降低时却遇到麻烦,因为
western和ELISA显示蛋白表达正常。有点想不通。大家遇到过这样的情况吗?
c******r
发帖数: 3778
48
来自主题: mitOCEF版 - 【OCEF2012年历】还是植物
西北狼ps得非常好,哈哈哈,以假乱真啊。。。不过也正因为是以假乱真,所以真的有
点乱真。我的意思是,这个月亮实在太好看了,太大太圆太光彩夺目了,造成画面两个
中心。一般来说,一张照片只有一个主题,一个中心思想,虽然可以有无限多的细节慢
慢品味,但是都是为了表达同一个中心的。
而西北狼的月亮太好看了,造成喧宾夺主。
花好月圆怎么表达,这可没有一定之规。一百个人就有一百零一个不同的表达方式。但
是在中国文化中,基本相似的不是表达方法,而是意境。朦胧之中有清晰,清晰之外有
朦胧。这种不同层次的混合运用才能体现花好月圆。
我没有现成的照片来说明,所以就是信口开河而已:)
D**l
发帖数: 62
49
日本是我们的邻居,本来邻居之间应该搞好关系,不过这个邻居因为天然资源比较匮
乏,邻居又比较具有忧患意识,一直觉得自己是个很优秀的民族,应该拥有更好的土地
,更宽阔的资源,土地资源这些都是邻居一直想得到的东西,这也很容易理解,好的东
西谁都想拥有,但是如果是别人家的东西,你去硬抢那就是强盗土匪,不过对于日本民
族来说,没有什么比资源更重要了,这是首要的国家利益,一切都要为之让路,于是日
本这个邻居从古代开始动不动就来骚扰我们,小骚扰不计其数,更不用提近代在中国国
内发生的几次比较大的战争,日本都是急先锋,不过机缘巧合,日本最终也没有完全都
能得逞,不过在几次战争中,也从中国占了很多好处去了。
就原子弹而言,日本早就有制造核武器的能力了,日本的核能应用技术已经搞了很
多年,比如核电站等等,不比我们差,甚至可能比我们还先进,日本的火箭技术是世界
顶尖水平,在火箭的帮助下,核弹头应该可以打到中国的任何角落,只要日本愿意,随
时就可以造出大批的核武器。所以就算中国有原子弹,日本也是不怕的,在大家都有核
武器的前提下,核武器也就失去了震慑的力量,变成了摆设,谁都不敢动核武器,首脑
应该都怕死,所以... 阅读全帖
首页 上页 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 下页 末页 (共10页)