f**********r
发帖数: 18251 | 1 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: sautin (老将萨乌丁), 信区: Military
标 题: 震惊世界：海归院士施一公首揭老年痴呆症致病蛋白结构(图)
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Jul 4 12:33:21 2014, 美东)
施一公在发布会现场
今天上午，记者从清华大学获悉，著名结构生物学家、中科院院士、清华大学教授施一
公研究组在世界上首次揭示了阿尔茨海默症（俗称老年痴呆症）发病直接相关的人源γ
分泌酶复合物的精细三维结构，为理解γ分泌酶复合物的工作机制及阿尔茨海默症的发
病机理提供了重要线索。该成果于6月29日在英国《自然》杂志在线发表。
成果发布
"这是我职业生涯上，最重要的突破"
今天上午，在清华大学召开的发布会上，施一公教授展示了阿尔茨海默症发病直接相关
的人源γ分泌酶复合物的精细三维结构。
他在介绍他的研究组成果时表示，此前的研究表明，阿尔茨海默症的发生和大脑中淀粉
样斑块的形成密切相关。淀粉样斑块是由膜整合蛋白酶复合物γ分泌复合酶异常切割"
淀粉样前体蛋白"APP而产生过量易聚集的Aβ42肽所致。
γ分泌酶复合物可以理... 阅读全帖 |
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s******y
发帖数: 28562 | 2 这个就是这样的，你要想漏过去的反而漏不过去。
不想要漏过去的反而会哗哗的漏掉。
而且，这种concentrator 设计的时候不是为了分离蛋白用的，
像你这种用法，会让很多蛋白会卡在孔里或者粘在膜上，不可能全部漏过去的，
能弄到20%已经不错了，但是如果你测一下上方溶液里的蛋白含量，应该会小于80% |
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H****s
发帖数: 301 | 3 兄弟，可否指点迷津？我想找一个这样的蛋白：
（1）可以非特异性结合到人或者是动物细胞的脂（lipid）分子，而不是膜蛋白受体上。
（2）这种结合导致蛋白被细胞内吞。
（3）蛋白-脂分子结合的机制比较清楚。
非常感谢。 |
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W*********n
发帖数: 775 | 4 且那么多条带，每个条带都要100多刀，这么说我的四个样品，12泳道，120条带，要最
少12000刀？是不是太贵了点？老板觉得4000刀已经很多了。
这样的话，因为我想获取信息的蛋白不太可能在膜上，能不能裂解细胞，只获取细胞内
的蛋白来做分析，而不去裂解细胞膜上的蛋白？
您所谓的ＤＹＮＡＭＩＣ ＲＡＮＧＥ是啥意思啊，我菜鸟水平，你就科普一些来给建
议，呵呵，谢谢啦！ |
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w***7
发帖数: 1637 | 5 人家已经跟企业签约，并不仅仅是忽悠国家的钱，企业的钱没有那么好忽悠。说了，美
国这边有不少植物中成功表达药用蛋白的例子。
每一个表达系统都会有蛋白活性问题，细菌，酵母，细胞，和现在的植物，能得到有功
能的活性蛋白就行。你去问问你周围做结晶的，用的表达系统也是五花八们，并且很多
表达的是那种最难的膜蛋白。 |
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V********n
发帖数: 305 | 6 个人建议。不要光想着省试剂钱，你的时间也很值钱的。不如用最优化的条件做一遍，
得到正结果后再改进来省银子。几点你可能需要注意。
１）SC的抗体很多不靠谱。当然，也有好的。
２）最好不要用DSS。蛋白交联情况和处理时间有关，结果无法用其他实验验证。如果
是这一步的问题，你都无从查找。
３）低PH洗脱液可以从Agarose上洗脱抗体，但是否能保证打开蛋白－抗体的结合未知
，与多种因素相关。
４）你IP时的缓冲体系是什么，不会是１XCS的裂解液吧。
５）你蛋白上样太少了。直接加小体积上样Buffer煮，全上了做WB。
６）膜蛋白IP不好做。 |
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b******s
发帖数: 5365 | 7 不溶或者只是部分溶解的话蛋白部分保留结构，如果IFA能检测到，说明当蛋白保持二
级或者三级结构的时候还是可以被抗体识别的。如果他的sample还保留在buffer里的话
应该是可以被检测到的。
buffer里加了足够的protease inhibitor吗？cell lysate在什么条件下准备的？要排
除蛋白在准备过程中被分解的可能性。膜上看到分子量比较小的片断吗？也可以用
comassie blue染一下跑过的胶看看.WB做不出结果有太多可能性了 |
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z********g
发帖数: 48 | 8 如果STORM必须拍很多照片，然后进行图像处理才能得到高分辨的图像，是不是意味着
STORM不能监测动态过程？它的时间分辨常数又是在什么量级上？
对于生物样品（如蛋白二维晶体或密集表达的膜蛋白），AFM能在XY平面做出分辨率达
到1nm的表面形貌图像(topography)，Z方向的分辨率理论上能达到0.1nm，但要在较硬
表面（如半体导样品）。AFM除能成像之外，还能做力谱，这是它独特的地方，很多实
验室用它来做蛋白的折叠与去折叠。
Optical tweezer是另一做力谱的方法。做线性分子较多，如DNA与蛋白相互作用，mRNA
转录等。
个是跟 |
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z********g
发帖数: 48 | 9 如果STORM必须拍很多照片，然后进行图像处理才能得到高分辨的图像，是不是意味着
STORM不能监测动态过程？它的时间分辨常数又是在什么量级上？
对于生物样品（如蛋白二维晶体或密集表达的膜蛋白），AFM能在XY平面做出分辨率达
到1nm的表面形貌图像(topography)，Z方向的分辨率理论上能达到0.1nm，但要在较硬
表面（如半体导样品）。AFM除能成像之外，还能做力谱，这是它独特的地方，很多实
验室用它来做蛋白的折叠与去折叠。
Optical tweezer是另一做力谱的方法。做线性分子较多，如DNA与蛋白相互作用，mRNA
转录等。
个是跟 |
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a*****x
发帖数: 901 | 10 引子
各位看官,由小的给大家讲个故事吧.
我要讲的是一个三年前浮出水面的发现, 其间涉及长达30多年的研究工作, 数十篇对的
或者错误的文献, 案情扑朔迷离, 引人深思, 至今仍没有完全明了. 小的口才不好, 说
不清楚之处还请大家多包涵. 有钱的捧个钱场, 没钱的捧个人场…因为我相信这里做离
子通道的人很少, 所以我从最最基本的地方开始讲, 不耐烦者可以直接跳过无视…
因为我本人学生物的时候就最讨厌背东西, 所以我想呈现给大家的只是科学家在科研过
程中闪耀的思想的火花, 而非结论性的发现本身. 所以引用文献时间跨度很大, 希望大
家谅解.
既然是故事, 我们就从头说起…
亿万年以前, 地球上一片汪洋, 生命诞生其中. 为什么生命要诞生在海洋里呢? 没错,
因为海洋里有很多水, 而生命离不开水. 而很多人忽视的是, 海水里除了水, 还有很多
盐, 也就是溶液状态下的离子. 没有了离子, 同样不可能有生命. 不信你往MQ water里
面加一大坨蛋白质和DNA, 看看能不能变出小蝌蚪…所以, 生命也离不开离子. 为什么
离子如此重要呢? 因为离子提供了一种生物层面上最重要的作用力, 电磁... 阅读全帖 |
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u**********d
发帖数: 573 | 11 我猜想你的意思是说一个TF的complex可能在DNA上才最终完成装配。不管怎样，之前大
家做IP都是用WCE或者NE，那么调查TF在chromatin上的相互作用蛋白至少是方法上有创
新的，而且原理上我认为也是很有意义的。
如果你的TF和DNA结合弱，那么最好cross-link一下，提取细胞核，破核膜（可以简单
超声或者过注射器针头），得到chromatin沉淀，这样里面残留的游离TF就很少了，然
后用MNase或者超声得到单个nucleosome或者很短的chromatin片段，然后IP。
这个方法的问题也是很大的，就是chromatin上面蛋白太多，要设置好的对照，确保找
到的相互作用蛋白是特异地由你的TF决定才出现在那里，而不是chromatin上的常规蛋
白。找到的candidate也很难进一步做相互作用的验证，in vitro chromatin assembly
这些实验没有一定的积累难以完成。
TF |
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g***s
发帖数: 30 | 12 最近实验室有人在做一个蛋白激酶，这个激酶是和cell adhesion有关，但是不是膜蛋
白，应该只是membrane associated。我们想IP这个蛋白，buffer是1% triton，后来还
加了点SDS。结果每次裂解后，发现离心后上清中蛋白非常少。也尝试过不同的PH，所
以应该也不是等电点沉淀的问题。不知道各位有遇到过类似的问题吗，有什么好的尝试
条件？非常感谢 |
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d****u
发帖数: 1553 | 13 这是一种可能，还有一种可能是你的蛋白和膜上的什么东东结合了才能保持构象稳定。
你把细胞裂解了可能导致了蛋白相互作用的破坏，间接破坏了蛋白的稳定性。 |
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p*****m
发帖数: 31 | 14 井喷的原因就像你说的这种方法的普适性，然后美国政府的大量投钱做GPCR的结构基因
组，支持5，60号人工厂式的用这种方法去大量的筛GPCR的结构，基本能这样筛出来的
结构都差不多发了（甚至长晶体的条件都差不多），上海发的这些也是stevens实验室
他们这样筛出来的，因为用的美国结构基因组的钱，他们要在一个公开的网站上更新工
作的进展，上面都可以查到几年前这些蛋白的结构工作的进展。不知道他们为什么拿去
中国继续做发文章，不在美国做，可能因为stevens想全职回中国，希望培养自己的势
力，需要paper。另外这两篇nature，同样一个蛋白，结合了3个ligands，结构差不多
，ligangs结合位点有不同，这点其它GPCR里都看到过，很正常，而且不一定跟活性有
关系，就这样硬生生拆成两篇发，唯一可能的原因是purigergic receptor的药物靶点
重要性，即便这样，no idea how they got the second one published, mush have
bargained with Nature.
826个GPCR结构在业内一看就是个笑话，首先这80... 阅读全帖 |
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s****n
发帖数: 8912 | 15 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: sautin (老将萨乌丁), 信区: Military
标 题: 震惊世界：海归院士施一公首揭老年痴呆症致病蛋白结构(图)
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Jul 4 12:33:21 2014, 美东)
施一公在发布会现场
今天上午，记者从清华大学获悉，著名结构生物学家、中科院院士、清华大学教授施一
公研究组在世界上首次揭示了阿尔茨海默症（俗称老年痴呆症）发病直接相关的人源γ
分泌酶复合物的精细三维结构，为理解γ分泌酶复合物的工作机制及阿尔茨海默症的发
病机理提供了重要线索。该成果于6月29日在英国《自然》杂志在线发表。
成果发布
"这是我职业生涯上，最重要的突破"
今天上午，在清华大学召开的发布会上，施一公教授展示了阿尔茨海默症发病直接相关
的人源γ分泌酶复合物的精细三维结构。
他在介绍他的研究组成果时表示，此前的研究表明，阿尔茨海默症的发生和大脑中淀粉
样斑块的形成密切相关。淀粉样斑块是由膜整合蛋白酶复合物γ分泌复合酶异常切割"
淀粉样前体蛋白"APP而产生过量易聚集的Aβ42肽所致。
γ分泌酶复合物可以理... 阅读全帖 |
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I*********r
发帖数: 8 | 16 我不确定楼主的意思。你是想知道有活性蛋白是否是dimer?
如果你可以提纯蛋白，那做一个gel filtration，看看活性蛋白的大小，推测是否为
dimer。如果gel filtration能同时得到dimer和monomer，分别测定它们的活性啊。
或者是我理解错了？
dimer |
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s****n
发帖数: 8912 | 17 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: sautin (老将萨乌丁), 信区: Military
标 题: 热烈祝贺颜宁当选国家10大青年科学家
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Jul 10 09:35:31 2016, 美东)
好像在千人网看见的消息
付最近的媒体报道
清华大学教授颜宁：科学研究只有第一
来源：光明日报 作者：邓晖 2016-06-12 14:08:56
【归国情·创业梦】
一次次对人体细胞里“门”的探索，让“70后”教授颜宁为之着迷。
6月2日，清华大学生命科学学院颜宁研究组与中国疾控中心、中科院微生物所高福
院士研究组合作在《细胞》杂志发表论文，首次报道了人源胆固醇转运蛋白NPC1的4.4
埃分辨率冷冻电镜结构与埃博拉病毒GPcl蛋白复合体6.6埃分辨率的冷冻电镜结构，为
看清NPC1介导埃博拉病毒入侵的“门”提供了分子基础。一年多前，颜宁研究组更是解
开了一个困扰全球生物学家半个世纪之久的难题：率先解析出葡萄糖转运蛋白GLUT1的
三维晶体结构，让人们清楚看到葡萄糖进入人体细胞的“门”长什么样。
国际蛋白质学会青年科学家奖、赛克勒国... 阅读全帖 |
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v********a
发帖数: 646 | 18 把不同的蛋白样品定量后，load相同量的蛋白样品做Western Blotting，但是出来结果
，总是出现loading control 的量并不一致，有的多，有的少。非常苦恼。
请问：如何能作出loading control 一致的Western Blotting？
知道这个问题很low，但乡下人就是这么菜。恳请达人指教诀窍：怎样处理组织或者细
胞样品，从而使SDS-PAGE上样量一致？谢谢。
我的方法：
细胞或组织用RIPA裂解
超声3次，15s on/15s off
离心12000rpm，取上清
将上清做2x梯度稀释，然后用bca kit测定浓度
取相同量的蛋白跑page
转膜，wb |
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B********n
发帖数: 12753 | 19 以前觉得面包水分比例是不是搞错了
那么大比例的水分，那么粘手，肯定是我加多了
后来研究了一堆文字视频，顺带尝试了一堆，发觉，就应该是粘手的
现在我基本做中种（这里60%和40%面粉的概念，举例来说，就是好比你要做500g面粉的
面包，取当中60%，也就是300克做中种；余下200g留作第二天的主面团）
1 中种：总量里60%面粉 + 水 + 酵母 + 一半糖 （参照基本比例）
揉匀，室外1小时，然后进冰箱，12-24小时
2 主面团：余下40%面粉 + 水 + 另一半糖 + 盐 （参照基本比例）
揉匀，掺入中种，揉匀，KA 2档 5分钟
然后加入黄油继续2档5分钟
再上4档5分钟，一定能出手套膜
有些方子在1里不加糖，但是我试下来，不放糖发的效果没有放糖好
另外，KA搅拌的时候，我一般都先用Beater Blade，混合成团后，才换S头，这样能省
不少时间
---------------------
基本比例是
假设，面粉是1份，那么其它就是
水：占65%左右
酵母： 1%
盐： 1%-2%
糖： 5%-7%
油： 5%-7%
另外，几个含水量换算
全蛋： 75%
蛋黄： 50%
蛋白... 阅读全帖 |
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S*****s
发帖数: 242 | 20 吃饭的家伙，天天看。还没见到一个膜蛋白能在膜上（或和生物膜一起）被结晶出来。
指教了。 |
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k******0
发帖数: 1073 | 21 ER和线粒体是有相连的膜，所以即使ER蛋白质和线粒体内膜蛋白质共免疫沉降，也并不
奇怪，可能通过未鉴定的外膜蛋白连接的。同时跨内外膜的线粒体复合体已经鉴定的也
有。
如Sunnyday说的污染情况也很可能。你需要根据自己数据判断是否make sense。
WB有时很tricky，浓度过低或未优化时可能就测不出。所以你的蛋白质在纯化的线粒体
未检测出来，而IP后检测出来，也不是少见。
如果能否分离到足够量，跑胶做质谱分析可能会提供你更多的信息。
contamination， |
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a*******n
发帖数: 156 | 22 这段小肽并不是再跨膜区，而是位于膜区跟胞外交界的地方
所以完全有可能病毒的膜蛋白有loop插到转运通道的筒形结构中，而这段小肽则是筒形
结构的一部分
实际上gp120跟cxcr4就是这么接合的 |
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c***s
发帖数: 70028 | 23 今年3月31日，在斯德哥尔摩举行的瑞典皇家科学院年会颁奖典礼上，清华大学生命科学学院院长施一公教授荣获2014年爱明诺夫奖。由于过去15年运用X-射线晶体学在细胞凋亡研究领域作出的杰出贡献，他成为爱明诺夫奖自1979年设立以来的第46位得主，同时也是首位获得该奖的中国科学家。
施一公1989年从清华大学生物系毕业后赴美深造，1995年获美国约翰霍普金斯大学医学院分子生物物理博士学位，后来历任美国普林斯顿大学分子生物学系助理教授、副教授、教授、讲席教授，是该系建系以来最年轻的终身教授。
2008年初，施一公放弃美国优厚的生活待遇和科研条件，全职回清华大学工作。“作出回国的决定，只用了一个晚上。很多人认为我疯了。连我在美国的亲戚都觉得我脑筋有问题。”
“就科研环境来讲，国内大学目前还无法与普林斯顿比肩，但回国就是出于一种特别朴素的感情，有什么好奇怪的呢？”他说。
施一公说，中国还有很多东西需要改进，从科教体制到大学教学和科研水平，相对于美国一流大学还有相当差距。比较起在美国，我觉得我回来以后可以对清华、对国家有更多的回馈，这种成就感对我来说很重要。
许多国外科学家认为，施一公会带动一流的海... 阅读全帖 |
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s****n
发帖数: 8912 | 24 施一公在发布会现场
今天上午，记者从清华大学获悉，著名结构生物学家、中科院院士、清华大学教授施一
公研究组在世界上首次揭示了阿尔茨海默症（俗称老年痴呆症）发病直接相关的人源γ
分泌酶复合物的精细三维结构，为理解γ分泌酶复合物的工作机制及阿尔茨海默症的发
病机理提供了重要线索。该成果于6月29日在英国《自然》杂志在线发表。
成果发布
"这是我职业生涯上，最重要的突破"
今天上午，在清华大学召开的发布会上，施一公教授展示了阿尔茨海默症发病直接相关
的人源γ分泌酶复合物的精细三维结构。
他在介绍他的研究组成果时表示，此前的研究表明，阿尔茨海默症的发生和大脑中淀粉
样斑块的形成密切相关。淀粉样斑块是由膜整合蛋白酶复合物γ分泌复合酶异常切割"
淀粉样前体蛋白"APP而产生过量易聚集的Aβ42肽所致。
γ分泌酶复合物可以理解成细胞膜上的一个蛋白酶体，或者更通俗地形容为垃圾粉碎机
。它的主要作用是降解细胞膜上的一些废物蛋白，把它降解成小的片段，让人体再吸收
、再利用。
获得γ分泌酶复合物的三维结构是目前世界生命科学领域最热门的研究课题之一，世界
上几十个实验室都在进行科研攻关，但几十年都未有收获。
... 阅读全帖 |
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s*****e
发帖数: 16824 | 25 解结构最难的是结晶，尤其是膜蛋白的结晶。是个经验活，要控制各种结晶条件，同时
还可能要修改蛋白的部分结构，不然结晶不了。所以每一个蛋白都需要摸索很久，的确
是民工活，要靠博士苦力试的，但是纯民工也干不了，没有固定的流程。 |
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发帖数: 1 | 26 数据显示，近年来我国出国留学人数持续增长，然而近有8成的留学人员选择归国。他
们有些归国是为了就业和创业等，有些则是高端的科技人才归国效力。其中就有一位美
女科学家30岁归国，37岁率领平均年龄不到30岁的团队用6个月的时间攻克膜蛋白研究
领域50年不解，最受瞩目、国际竞争也最激烈的科学难题。
颜宁，1977年11月出身于山东章丘，小学毕业于大兴五小。
1996年考入清华大学生物科学与技术系。
2000年毕业后进入美国普林斯顿大学分子生物学系攻读博士学位。
2004年获博士学位，之后继续在该校接进行博士后研究。
2007年博士后出站后受聘清华大学医学院。
2014年12月当选教育部"长江学者奖励计划"特聘教授 。
2015年10月7日，清华大学医学院颜宁教授与德国德累斯顿工业大学Stephan Grill教授
共同获得赛克勒国际生物物理奖(The Raymond & Beverly Sackler International
Prize in Biophysics) 。
2012年1月24日，首届霍华德·休斯医学研究所国际青年科学家奖揭晓，共有12个国家
的28名科学家从760名候选者... 阅读全帖 |
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e********r
发帖数: 147 | 27 在细菌里做，打算用超离心分别分离外膜、周质和细胞质蛋白，然后用Western杂交，
这个策略分析蛋白定位的问题会遭到审稿人的反驳吗？感觉好象细菌里用GFP来定位的
研究不是很多啊，不象在真核里只要说定位，好象就是GFP似的？ |
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m*******8
发帖数: 256 | 28 最近在做某一蛋白的磷酸化实验，看了几篇文献，都是通过蛋白的迁移来做的。但是他
们在方法里对于跑胶的条件说的都不清楚，所以我想请教达人，胶的浓度，跑电泳的条
件，还有转膜需要注意什么吗？多谢了！ |
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e*r
发帖数: 103 | 29 蛋白细胞内定位的途径有哪些？ 通过内体循环。还有其他的哪些呢？ 比如蛋白合成后
定位到膜上是怎么过去的呢？ |
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g*********r
发帖数: 9366 | 30 我是做结构的，但是不是牛人， 只能说说自己的看法
结构解决的是大分子体系基本的作用机理， 是通过结构-功能关系确定系统机理的最原
始途径， 寻找药物靶点只是其中一个功能，其实在pharm中已经采用高通量筛选来替代
靶点的搜寻了。
到结构大牛组里并不一定是好事， 结构的大牛组里很多人都是默默的死掉的-- 蛋白结
晶的风险比别的领域都大， 如果它不结晶 你就死定了
膜蛋白的表达纯化中需要detergent保持可溶性，但是即使这样，也比可溶性蛋白工作
量大得多，
结构反应的是一个个snapshot， 而不是连贯的过程，所以即使得到结构仍要其他手段
进行辅助进行推测才能知晓整个动态过程。
国内找施一宫就是为了CNS和名气，解决不了任何实际应用
钱学森实际上是搞科学-工程的， 施一宫是搞纯science的，离应用还差的远， |
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s******y
发帖数: 28562 | 31 MCE (mixed cellulose ester) 是给含蛋白的溶液用的
NYLON, PTFE, PVDF 都不能用在含蛋白的溶液上，具体要用哪一种要看你
是不是要过滤有机溶剂,如过只是一般的水溶液而且不含蛋白，那么随便哪个都行。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 32 没有具体转过utrophin，不敢打包票，但是我们转poly-ubiquitinylated protein都是
用这个condition.
其他蛋白？其他蛋白50伏转三到五个小时。但有时候我们要偷懒的时候也会统统30伏转
过夜。 |
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r******a
发帖数: 31 | 33 同一个蛋白complex纯化后分别做silver stain，coomassie stain以及转膜后的
ponceau stain，结果差异很大。具体点说在silver stain上可以看到所有subunit，而
且都是equal intensity的非常strong的band，但是在coomassie stain和ponceau
stain上只可以看到2条，另一条消失了？silver stain条带的强弱和蛋白量的多少关系
不大，band强不一定代表量多对吧，但是不至于在coomassie stain和ponceau stain上
一点都看不到啊... |
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i*******n
发帖数: 48 | 34 姑且定义bait是membrane protein A， Prey是cytosol protein B
多种可能性
1.假阳性
2.细胞内蛋白B比较abundant,而膜蛋白A比较少。
如果是这种情况，跑western的时候减少input的量，增加IP的量，也许能看到。
3.prey蛋白B抗体识别的antigen region可能是bait A的binding region，导致你用
B的抗体IP下来的只能是不结合A的那部分。
如果是这种情况，给B加个tag或者换个抗体试一试。 |
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i*****g
发帖数: 11893 | 35 既然乙肝受体这么麻烦
我认为，我认为，可能是个 柔性结合，涉及好几个膜蛋白，每一个其实都算weak
binding， 而且说不定是瞬间进入
这个实验就很难做了，need co-purification of protein complex
in vitro reconsititution
我们目前的蛋白折叠和构象预测,modeling and prediction，似乎总是不过硬
说句老实话啊，那些个物理数学家，让他们来解决这个蛋白构象预测问题，说不定需要
一门新的数学，而不是依赖computer power，傻呼呼死算
这么多年过去了，显然他们没有这个能力， |
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i*****g
发帖数: 11893 | 36 既然乙肝受体这么麻烦
我认为，我认为，可能是个 柔性结合，涉及好几个膜蛋白，每一个其实都算weak
binding， 而且说不定是瞬间进入
这个实验就很难做了，need co-purification of protein complex
in vitro reconsititution
我们目前的蛋白折叠和构象预测,modeling and prediction，似乎总是不过硬
说句老实话啊，那些个物理数学家，让他们来解决这个蛋白构象预测问题，说不定需要
一门新的数学，而不是依赖computer power，傻呼呼死算
这么多年过去了，显然他们没有这个能力， |
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q******g
发帖数: 3858 | 37 对于cryo-electro，这个精度绝对算突破了。而且可以用于很多不容易得到晶体的蛋白
，特别是膜蛋白和蛋白复合体。很好奇，他的技术有什么特点。因为一般来说， cryo-
electromicroscopy就是拍很多电镜照片，按照不同方向，进行叠加。叠加越多，清晰
度越高。不知道他是否用这个办法。 |
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q******g
发帖数: 3858 | 38 我们的合作者已经拿到了纯化的蛋白。但transporter是膜蛋白，很难得到晶体，他们
做了一年还没有结果。
wangjingsioc说的ITC， SPR，Thermal shift，FA或许可以试试。合作者好像试过MTS
，但没有变化。
化合物衍生物是准备做。但还没有开始。
我曾经用MODEL来预测蛋白结构，将化合物docking，显示有一个binding pocket, 突变
了其中一个氨基酸，可以降低50%活性。准备做化合物和突变体的活性实验。但一个合
作者说，你需要把binding pocket所有的氨基酸都突变了，才有说服力。就没往下做，
而是直接交了。如果有个一个突变的结果，估计编辑这关或许能过去。 |
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b*******0
发帖数: 507 | 39 您好！
看到您在生物版上发帖说有圣地亚哥生物公司工作的机会，
不知能否来信告知工作要求的细节。如果能代为推荐，一定
万分感谢！
我在圣地亚哥SCRIPPS研究所已经做了快５年的薄厚了，主要
研究方向是细胞生物学，遗传病。接触了各种的细胞生物学相关
的技术，以及掌握各种老鼠有关的实验技术。博士是在美国中部
一个大学学习，期间主要研究蛋白结构，所以会熟练纯化蛋白，包括
膜蛋白。
请发详细资料给我，如果愿意内推，我可以把我的简历发给您！
不胜感激！
BJLTJS100 |
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z*****g
发帖数: 2 | 40 如果是靶向一个酶的话，可以设计它底物的类似物，从而开发成底物竞争性的
inhibitor，像一些kinase的inhibitor都是ATP的类似物；即Mechanism-based
inhibition，共价和非共价结合的都有，academic groups 开发比较多。但这类
compounds选择性可能不好，对同类型的酶都或多或少有抑制作用。
另外，从已经报道的ligand去设计similar analogs，可能很难跳出别人compound的骨
架(scaffold)，发文章的novelty或专利申请受影响。
如果是靶向protein-protein interaction 的话，尤其是你知道它们的complex
structure，以其中一个为receptor，另一个的peptide为ligand，不断优化（突变和/
或改变长度）这个peptide，使其达到活性达到最优；并且可以再对这个peptide进行化
学modification，提高其透膜性或水溶性。
zjianyun (Four) 提到的假阳性结果，是指Pan Assay Interference Compounds
... 阅读全帖 |
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i***l
发帖数: 1656 | 41 楼上都对，
可能是蛋白有修饰
或者寡聚了
如果怀疑磷酸话，用磷酸酶消化，比较前后变化来证明； 怀疑糖基化，就用糖基酶处
理，处理前后跑胶比较。
但是一般糖基化的也不会100%，我做O LinK的糖基化，大多是其中一条本身的带，另一
条大些的糖基划的带；好像磷酸化也是一条本身大小的，一条或几条磷酸化的带，取决
于到底几个磷酸化位点，效率多少。
OLIGOER的问题 在高温下，穿膜区有非特异性疏水作用，导致聚合。这时候反而37度变
性更好。
但是，感觉从你描述来看，这个不太像，一般寡居的蛋白会形成Ladder，单体
，二聚，四聚，等等，不只两条带。 |
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k*****e
发帖数: 372 | 42 样本问题：
1. 是不是全程直到上样前都在冰上呢？包括PBS，medium，lysis buffer
2. 为了避免化学试剂干扰，我一直用最原始的方法：注射器，去裂解细胞
跑胶：
如果前导的dye没有跑出去的话，应该小分子蛋白也不会跑出去的吧？如果真的太小，
下次留心，别让蓝色条带太靠底了。（个人觉得不像是这个问题）
转膜：
温度过高？ |
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r*****2
发帖数: 2682 | 43 颜宁 1977年11月生，1996年进入清华大学生物科学与技术系，2000年获学士学位，并
被授予“清华大学优良毕业生”称号。
同年9月赴美国普林斯顿大学分子生物学系学习，在清华大学讲席教授、生物系1990届
本科毕业生施一公教授的指导下获得分子生物学博士学位。
获得2005年由Science杂志和GE Healthcare评选的“青年科学家奖”（北美地区）。该
奖项专门用来奖励每年最优秀的生命科学博士毕业论文，在全球范围内每年只有5人入
选。颜宁在博士后期间继续从事结构生物学研究，重点研究膜蛋白的结构与功能，成功
解析一个重要膜整合蛋白酶的高分辨率原子结构，揭示了它的作用机理。
2007年7月,不满30岁的普林斯顿大学博士颜宁,受聘清华大学医学院教授,成为清华大学
最年轻的教授和博士生导师。
首届霍华德·休斯医学研究所国际青年科学家奖2012年1月24日揭晓，共有12个国家的
28名科学家从760名候选者中脱颖而出，我国清华大学教授颜宁等7名优秀科学家入围，
是获奖人数最多的国家。 |
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n***c
发帖数: 7400 | 44 湖北奥赛得奖这者都投奔哪了
王菘 第31届国际数学奥赛金牌 美国普林斯顿大学数学博士、普林斯顿高等研究中心
博士后、美国耶鲁大学助理教授、中科院数学研究所研究员、数论专家
库超 第31届国际数学奥赛金牌 美国加州理工学院数学博士
杨克 第34届国际数学奥赛金牌 美国卡内基美隆大学计算机科学博士
朱辰畅（这位是湖北第一位获得国际奥数金牌的女学生） 第36届国际数学奥赛金牌 美
国加州大学伯克利分校数学博士
倪忆第38届国际数学奥赛金牌 美国普林斯顿大学数学博士
袁新意第41届国际数学奥赛金牌 美国哥伦比亚大学数学博士
曾宪乙 第43届国际数学奥赛金牌 美国斯坦福大学数学博士
夏煜 第22届国际化学奥赛金牌 美国耶鲁大学化学博士后
谢佳 第30届国际化学奥赛金牌 美国斯坦福大学化学博士
陈恂 第18届国际物理奥赛金牌 华尔街闻名投资银行摩根大通知名分析师
段志勇 第21届国际物理奥赛金牌 美国耶鲁大学物理博士后
张霖涛 第23届国际物理奥赛金牌 美国普林斯顿电子工程博士、微软硅谷研究所研究员
张俊安 第24届国际物理奥赛金牌 美国加州大学圣地亚哥分校电子工程博士、美国杜克
大学博士后(... 阅读全帖 |
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z****d
发帖数: 1761 | 45 膜性肾病在所有的病理类型中有一点好 就是有一定几率的自愈性 而且年龄大的病人的
膜性肾病似乎很少会进展到肾功能不全期 真没啥好治的 反正对激素也不敏感 中医有
效性一般般 唯一一点是不要瞎吃药 吃到肾损就不值了 |
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p*****c
发帖数: 20445 | 46 http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2013/11/285026.shtm
序号 项目编号 项目名称 承担单位 预算周期 专项经费
X1 2014CB046200 大型风力机的关键力学问题研究及设计实现 南京航空航天
大学 前两年 1090.00
X2 2014CB046300 深部危险煤层无人采掘装备关键基础研究 中国矿业大学
前两年 1245.00
X3 2014CB046400 大型飞机电液动力控制与作动系统新体系基础研究 北京航
空航天大学 前两年 1424.00
X4 2014CB046500 大型航空复合材料承力构件制造基础 大连理工大学 前
两年 1303.00
X5 2014CB046600 新一代超大型运载火箭薄壁结构制造的科学问题 上海交通
大学 前两年 1314.00
X6 2014CB046700 高服役性能海洋动力定位装备制造的基础研究 ... 阅读全帖 |
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b*****g
发帖数: 91 | 47 研究方向是计算模型和计算结构生物物理和化学，特别是膜蛋白的结构与功能关系以及
多肽与膜的结合过程和机制。非常感谢。
请站内联系或直接email: z*******[email protected] |
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s*******m
发帖数: 2572 | 48 不知道你所谓平时的护理是指的什么，头发指甲，想保持光鲜，都会是价格不菲。自己
在家里做发膜，也不便宜啊，一瓶发膜几十刀，用不了几次，每次持久度也就是下一次
洗发的时候。去salon省事而已，贵出来的就是人工，那也没办法。 |
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m*******2
发帖数: 121 | 49 ft, 这也要试试。
饱和盐水渗透压大，加酒让膜蛋白部分变性促进钠离子穿膜，温度影响不大。
另外，吃permanent marker的染料很有献身精神。
法。 |
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h*d
发帖数: 19309 | 50 【人才引进】颜宁受聘清华大学医学院教授
【新闻中心讯】颜宁 1977年11月生，1996年进入清华大学生物科学与技术系
，2000年获学士学位，并被授予“清华大学优良毕业生”称号。同年9月赴美国普
林斯顿大学分子生物学系学习，2004年12月获分子生物学博士学位。
攻读博士期间，颜宁主要运用结构生物学、生物物理和生物化学手段研究肿瘤
发生和细胞凋亡的分子调控机制，由于对线虫及果蝇细胞凋亡通路工作机理的杰出
研究成果，获得2005年由Science杂志和GE Healthcare评选的“青年科学家奖”（
北美地区）。该奖项专门用来奖励每年最优秀的生命科学博士毕业论文，在全球范
围内每年只有5人入选。颜宁在博士后期间继续从事结构生物学研究，重点研究膜
蛋白的结构与功能，成功解析一个重要膜整合蛋白酶的高分辨率原子结构，揭示了
它的作用机理。
近5年来在国际学术杂志发表学术论文及综述文章17篇，其中作为共同通讯作
者发表综述文章于Annual Reviews、Cell，第一作者文章8篇，包括1篇Nature，4
篇Nature Structural & Molecular Biology，1篇 |
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