s******y
发帖数: 220 | 1 转膜后，在page 胶的顶部（分子量大的蛋白部分）总是残留在膜上，下部很快就能弄
下来。
为什么会这样呢？
跑得是biorad的4-20%梯度胶，
我要看的一个目标蛋白正好还在有胶残留的那块，会影响下游的WB结果吗？ 用的那个
一抗本来就有点tricky，有这个残留的胶估计更讨厌了。
有什么办法能把膜弄得更加干净点吗？
谢谢。 |
|
m**u
发帖数: 3348 | 2 我最近用酵母表达一种膜蛋白，表达的量还可以，detergent 我尝试过用DDM或者DM，
大概每5g-7g yeast用50mM的DDM 50ml,但每次solubilization 4度过夜，第二天离心的
时候仍然可见很多似乎未完全溶解的膜，查了一些资料，没有看到有人提到到底应该用
多少detergent，甚至有时候再加倍也能看到不少膜沉淀。不知道哪位大虾这方面的经
验吗？一般什么样的detergent最有效，能做到完全溶解膜从而减少蛋白的损失呢？非
常感谢！ 呵呵 |
|
k*****1
发帖数: 454 | 3 （继续）
（4）统计物理的“魔术”。
在很长一段时间内，我都认为统计物理的思维方式就像魔术一样：1）用“概率”来描
述某个事件的存在，2）只关心某个事件的初始状态和最终状态，而不关心中间状态的
细节。举个例子，假设某个分子在初始位置A的概率为P0，如果该分子遵循玻尔兹曼分
布，那么该分子在另外一个位置B的概率就是
P0*exp（函数）；至于该分子是如何从位置A“跳到”位置B的，这并不重要。正是统计
物理模型的这个特点，回过头来体会推导H-H模型的思路，才能明白为什么H-H模型在中
间状态假设出现错误的情况下也能完美的反映出事物的本质。
而现实当中的离子电流是这样的：1，voltage-sensor 感应细胞膜的电荷被charge->2
，voltage-sensor形变->3，离子通道形变，能够让离子通过的pore打开->4，自由离子
移动。
所以从统计物理的角度上，同时又最贴近实际情况来理解 H-H 模型，就是 首先确定了
钠离子在细胞内部的概率为P1，细胞外的概率为P0，其中P1+P0=1 并且 P1/P0=exp（函
数）；而至于钠离子是怎么进行跨膜运动的？ H-H做出的假设有带... 阅读全帖 |
|
b*****g
发帖数: 91 | 4 每类膜蛋白都只是运输特类的小分子，比如钾离子通道蛋白就只运输钾离子，它们的功
能肯定不是通过解结构确定。
研究关心的是这膜蛋白如何运输小分子／离子，那有了蛋白结构，就能给出很多重要的
信息，在原子水平上能直接阐述 |
|
f********n
发帖数: 6465 | 5 测蛋白质早就可以了.
你没有搞清出,测之前对蛋白质样品的结晶程度的区别.
原来对蛋白质结晶颗粒要求大,有的蛋白质结晶要10年左右都搞不定,很难很难.
现在却不需要高质量的结晶颗粒,测定样品很容易就可以稍微结晶就可以得到.
至少节约几年的时间.而且很多蛋白,例如我自己做的一个就是个膜蛋白,非常难得到高
质量的结晶蛋白.而且绝大部分的药物靶点都是膜蛋白,都很不好得到大的结晶颗粒,表
达量少,而且不稳定. |
|
S*****s
发帖数: 287 | 6 不应该。有很多文章用 GFP 标记膜蛋白。不过用 GFP 标记蛋白合成出来之后就有信号
，很多荧光信号在 ER 里面。我更喜欢用 HA 或者 FLAG tag 标记蛋白，然后用荧光标
记的抗体做染色，这样能看膜表达也能看全细胞表达。要是你用 GFP 标记蛋白可以直
接做 live cell imaging，看你具体要做什么实验了。 |
|
a*******a
发帖数: 4233 | 7 湿转260-270kd的蛋白没什么问题。。当然肯定会有不少蛋白还残留在胶上的，buffer
里面少加一点甲醇就是了。甲醇的作用之一是清除同蛋白结合的SDS， SDS多的话转膜
速度很快，不小心就转到膜后面的纸上了。
个人经验。。 |
|
s******y
发帖数: 28562 | 8 0.1um的PDVF膜会更好。
另外，可以把甲醇浓度调高一些。可以调到30~40%。最低也得用20%。 甲醇的功能是：
1。洗脱蛋白上多余的SDS，让蛋白跑得不要太快； 2。让蛋白充分变性，能和膜结合得
更紧。 |
|
e********r
发帖数: 147 | 9 背景是：
1. 这是一个细菌的膜受体激酶，结晶测三维结构是不可能的，同类蛋白从来没人搞出
过全长的结构。
2. 我们发现它能够直接bind一个ligand。受体上来后，这个激酶的活性大大上升。
3. 通过alanine-scanning mutagenesis，发现了一些重要的位点。其中一个氨基酸突
变后，解除了其对酶活性的抑制
。
4. 我们现在的working model是：ligand与receptor结合以后，通过构象变化和上述关
键氨基酸介导的某种机制，解除了autoinhibition，从而使这个激酸的活性区在dimer
中更靠近，从而提高了酶活性。
5.实验过程中必须用全长蛋白，也就是说得用liposome这一类的东西。截短蛋白木有活
性，也不能结合ligand.....
问题是：在结构生物学不可能实行的情况下，只能用遗传或生化的方法，咋去证明或否
定上面这个model呢？
谢谢！ |
|
d*******w
发帖数: 45 | 10 看到大家说的这么热烈，对这个领域的一些东西有点了解，补充几句。
cheng的发迹主要得益于最新的camera，DDD，K2系列。cheng属于前几批和这个仪器打
交到的组了，貌似是因为开发这个camera的公司需要UCSF有人帮他们测试这个仪器。
DDD这种camera的精度和敏感性都比现在通常采用的CCD要高了不知道多少楼。通俗来说
，CCD可能需要1-2秒左右的曝光时间才能得到比较好的图像，但是DDD可以一秒内得到
40-50张的图像。Cheng之前在Nature methods上发了一篇文章就是关于用DDD可以提高
质量的文章。之前，在用cryo－EM照相的时候，人们对于电子光束是否会导致物体的
drift是很有争议的。DDD出来以后，cheng和一个MRC的组就发现了，电子光束确实能够
导致drift，他们通过把一定时间内同一区域的照片进行修正，发现能够在很大程度上
提高图像的质量。在DDD出现之前，主要是通过CCD来收集相片，然后从中挑出几万个蛋
白particle进行平均，得到3D，这种方法极其枯燥，也非常耗时。但是DDD出现后，得
出一个3D就只需要几千个particle... 阅读全帖 |
|
c***l
发帖数: 2490 | 11 8月31日，中国科学院发布“十三五”发展规划纲要，未来五年，中科院将围绕基础前
沿交叉、先进材料、能源、生命与健康、海洋、资源生态环境、信息、光电空间等八大
领域，提出60项有望实现跨越发展的重大突破和80项重点培育方向（均不含国防科技创
新），涉及器官修复与再造、大气灰霾追因与控制等多项与民生直接相关的创新方向。
有望实现创新跨越的重大突破（60 个）
（一）基础前沿交叉（8 个）
. 数学与交叉方向
（1）Langlands 纲领和千禧数学问题。通过数论、表示 论、代数几何和调和分析等多
个分支交叉融合研究，培育凝练 能够引导数学方向发展的数学问题与猜想，争取在
Langlands 纲领、Riemann 猜想、BSD 猜想等重大数学难题的若干方向上 取得与国际
数学科学大奖同等水平的成果。
. 物理与交叉方向
（2）凝聚态物质科学若干前沿问题。探索新型高温超导 材料，深入研究超导机理，发
展高温超导新理论；探索新型拓扑绝缘体、拓扑半金属和拓扑超导体，发现新现象、建
立新理 论。遵循“新现象、新效应、新理论、新算法”理念，发展凝聚 态物理新的生
长点，持续产出具有国际重要影响的重大成... 阅读全帖 |
|
t********h
发帖数: 456 | 12 贺某自己在基因编辑峰会上公布的结果
https://m.weibo.cn/status/4311271006839536?
查了贺某的所谓测序结果，气得睡不着。
上半部分应该是胚胎1、胚胎2“可能脱靶区域”的测序结果，“无证据”、“低证据”
。什么个低法？这么敷衍的写几个基因，你吹上天的全细胞测序呢？
下半部分无疑是CCR5的区域，excuse me? 这个根本不是CCR5 delta32基因型啊，根本
没有“柏林病人”的抗艾能力好吗？
1号胚胎（1号女婴）应该是贺某嘴里的“杂合子”了。（是的把活生生的人用这种术语
称呼非常不正确，但我也没办法。）1号女婴缺失了15个碱基对，编译氨基酸182-186（
序列HFPYS）。这个刚好在是膜外的关键linkerECL2上，不仅是HIV病毒gp120结合位点
，也是很多趋化因子结合位点。然而截短5个氨基酸后（即使是在linker）的膜蛋白会
不会正常折叠上膜？何况是杂合体，女婴体内突变蛋白量到哪个程度？这会对人体造成
什么影响？？
2号胚胎是两个不同的移码突变。这既不是CCR5 delta 32的基因型，也不是纯合子。如
果... 阅读全帖 |
|
t********h
发帖数: 456 | 13 https://m.weibo.cn/status/4311271006839536?
查了贺某的所谓测序结果，气得睡不着。
上半部分应该是胚胎1、胚胎2“可能脱靶区域”的测序结果，“无证据”、“低证据”
。什么个低法？这么敷衍的写几个基因，你吹上天的全细胞测序呢？
下半部分无疑是CCR5的区域，excuse me? 这个根本不是CCR5 delta32基因型啊，根本
没有“柏林病人”的抗艾能力好吗？
1号胚胎（1号女婴）应该是贺某嘴里的“杂合子”了。（是的把活生生的人用这种术语
称呼非常不正确，但我也没办法。）1号女婴缺失了15个碱基对，编译氨基酸182-186（
序列HFPYS）。这个刚好在是膜外的关键linkerECL2上，不仅是HIV病毒gp120结合位点
，也是很多趋化因子结合位点。然而截短5个氨基酸后（即使是在linker）的膜蛋白会
不会正常折叠上膜？何况是杂合体，女婴体内突变蛋白量到哪个程度？这会对人体造成
什么影响？？
2号胚胎是两个不同的移码突变。这既不是CCR5 delta 32的基因型，也不是纯合子。如
果这就算“成功”，那搞生物都失业好了。
这不是一次对基因剪... 阅读全帖 |
|
g**1
发帖数: 10330 | 14 《返朴》创刊！文小刚、颜宁联袂出任总编辑
2019-02-25 09:42:31 来源: 《返朴》编辑部 举报
1
易信
微信
QQ空间
微博
更多
（原标题：『返朴』创刊！文小刚、颜宁联袂出任总编辑）
“灵魂的欲望是命运的先知。”（The desire of his soul is the prophecy of his
fate. ）对于以科学或任何一门学问为志业的人来说，灵魂的欲望都是个必要的问题，
但未必每个人都意识到并思考过这一问题。至少100年前，科学的专业化和细化程度已
经达到很高的层次，当代中国的科研从业人数也大幅增长，但这并不意味着，科学和科
学精神已扎根深固。
处在现实社会里，科学人总会面临来自文化传统、社会体制，以及学术竞争等方面的种
种影响，因此一路走来难保不会遗失科学事业所需的赤诚之心。只有对自然秉勇毅求真
之精神，不懈地追问和质疑，我们才能在科学的道路上走得更远。
此外，科学人必须直面另一个问题：科学知识总是面临挑战的。1917年，社会学家马克
斯·韦伯（Max Weber）在其著名演讲《以学术为业》（又译《科学作为天职》）中说
道：“每一位科学家都知道，一... 阅读全帖 |
|
h********0
发帖数: 12056 | 15 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: cfcyl (残废草原狼), 信区: Military
标 题: 中科院要5年在这60项取得重大突破。这是要创造神话？
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Sep 2 06:09:07 2016, 美东)
8月31日，中国科学院发布“十三五”发展规划纲要，未来五年，中科院将围绕基础前
沿交叉、先进材料、能源、生命与健康、海洋、资源生态环境、信息、光电空间等八大
领域，提出60项有望实现跨越发展的重大突破和80项重点培育方向（均不含国防科技创
新），涉及器官修复与再造、大气灰霾追因与控制等多项与民生直接相关的创新方向。
有望实现创新跨越的重大突破（60 个）
（一）基础前沿交叉（8 个）
. 数学与交叉方向
（1）Langlands 纲领和千禧数学问题。通过数论、表示 论、代数几何和调和分析等多
个分支交叉融合研究，培育凝练 能够引导数学方向发展的数学问题与猜想，争取在
Langlands 纲领、Riemann 猜想、BSD 猜想等重大数学难题的若干方向上 取得与国际
数学科学大奖同等水平的成果。
. 物理与交叉方向
（... 阅读全帖 |
|
x**********8
发帖数: 8 | 16 公司现有部门介绍：
化学制药部门：旨在为国内外制药行业客户提供临床前药物筛选和研发服务。我们可为
客户提供 GMP级原料药和中间体定制生产,在制剂开发、药物分析和质量研究方面均已
得到了国内外客户的广泛认可。我们有能力为我们的客户提供包括化合物合成、手性分
析、结构解析等在内的技术支持,满足客户的R&D研究要求。
抗体药物开发部门：为来自全球各地的科研机构和药企提供不同物种的单克隆抗体和小
分子抗体等的研发和优化,抗体人源化、抗体亲和力成 熟、抗体的大规模生产(cGMP)、
抗体测序等最全面的抗体药物研发领域相关技术服务。
动物模型部门：为全球新药的开发提供一站式动物模型定制和药物筛选服务。我们具有
多年临床前动物实验和科研经验, 目前已经跟全球多家知名药厂和科研机构合作, 主要
提供动物基因编辑、动物模型构建、药理药代(PK/PD)、毒理学和多种疾病动物模型定
制服务。致力于成为国际领先的模型动物产品与服务供应商，我们与时具进，在传统的
化学药物的基础上，提供当下生物药，尤其是癌症抗体和免疫治疗领域新药临床申报前
的针对性动物实验服务。
工业酶部门：利用其在蛋白酶生产方面的先进技术,... 阅读全帖 |
|
发帖数: 1 | 17 公司现有部门介绍：
化学制药部门：旨在为国内外制药行业客户提供临床前药物筛选和研发服务。我们可为
客户提供 GMP级原料药和中间体定制生产,在制剂开发、药物分析和质量研究方面均已
得到了国内外客户的广泛认可。我们有能力为我们的客户提供包括化合物合成、手性分
析、结构解析等在内的技术支持,满足客户的R&D研究要求。
抗体药物开发部门：为来自全球各地的科研机构和药企提供不同物种的单克隆抗体和小
分子抗体等的研发和优化,抗体人源化、抗体亲和力成 熟、抗体的大规模生产(cGMP)、
抗体测序等最全面的抗体药物研发领域相关技术服务。
动物模型部门：为全球新药的开发提供一站式动物模型定制和药物筛选服务。我们具有
多年临床前动物实验和科研经验, 目前已经跟全球多家知名药厂和科研机构合作, 主要
提供动物基因编辑、动物模型构建、药理药代(PK/PD)、毒理学和多种疾病动物模型定
制服务。致力于成为国际领先的模型动物产品与服务供应商，我们与时具进，在传统的
化学药物的基础上，提供当下生物药，尤其是癌症抗体和免疫治疗领域新药临床申报前
的针对性动物实验服务。
工业酶部门：利用其在蛋白酶生产方面的先进技术,... 阅读全帖 |
|
C*******e
发帖数: 4348 | 18 正想说这个呢
我想补充一下的是你说的孔不是“打”出来的
其实是一个膜蛋白六聚体
中间会形成一个孔
然后有东西从里面穿过的时候在膜上能测到不同的电流变化
他们公司上有两种构想
一种就是这个用外切酶切的
一种也是放一个DNA聚合酶在六聚体膜蛋白的顶上
DNA模板从孔中穿过
不过我没有弄明白那个是怎么来测序的
因为其实一直孔里都有东西
电流变化就没有了
（http://www.nanoporetech.com/sequences) |
|
V********n
发帖数: 305 | 19 多谢。
这个蛋白一般情况下在膜上均匀分布。刺激后聚集。我尝试过刺激前后的细胞抽提膜蛋
白，然后IP，跑电泳，银染色。可惜没有特异性东西出来。如果CROSSLINK，不知道能有多大改善。
IF图片里现象很明显。每次我和老板都对着图片感慨，要是能一刀把聚集区切出来就好
了。 |
|
j****x
发帖数: 1704 | 20 差别在于，HCV的膜蛋白E1/E2可以完全类似HIV GPs那样呈现在细胞质膜上，或者称之
为“泄露表达”，没有任何问题；而HBV的膜蛋白L/M/S则无法像HCV E1/E2那样非常容
易的借助HIV budding pathway。
我也知道07年有来自宾大的一篇JV报道了lentiviral pseudotyped HBV，能成功感染
PHH,我和第一作者有过沟通，实际上他们的包装效率非常的低，基本没办法实际应用。
HCV pseudotype有多少人在应用，HBV pseudotype有多少人在应用，稍微了解一下，就
应该很清楚了吧。
anyway，我前面帖子的核心在于，HDV作为HBV的“假病毒”，已经足足够好了，不需要
另外的假病毒再重复验证了。
对于你小鼠肝细胞体外感染及转基因小鼠模型上的观点，我完全同意。
to |
|
j****x
发帖数: 1704 | 21 差别在于，HCV的膜蛋白E1/E2可以完全类似HIV GPs那样呈现在细胞质膜上，或者称之
为“泄露表达”，没有任何问题；而HBV的膜蛋白L/M/S则无法像HCV E1/E2那样非常容
易的借助HIV budding pathway。
我也知道07年有来自宾大的一篇JV报道了lentiviral pseudotyped HBV，能成功感染
PHH,我和第一作者有过沟通，实际上他们的包装效率非常的低，基本没办法实际应用。
HCV pseudotype有多少人在应用，HBV pseudotype有多少人在应用，稍微了解一下，就
应该很清楚了吧。
anyway，我前面帖子的核心在于，HDV作为HBV的“假病毒”，已经足足够好了，不需要
另外的假病毒再重复验证了。
对于你小鼠肝细胞体外感染及转基因小鼠模型上的观点，我完全同意。
to |
|
|
t****t
发帖数: 86 | 23 我转小蛋白，看你上面建议0.1um PVDF膜。
另外bio-rad没有0.1um的膜啊。只看到whatman有
【 在 tyzhet (开吉普的金田一) 的大作中提到: 】
: 有不有推荐的 0.1um PVDF膜？ |
|
w********h
发帖数: 12367 | 24 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: cfcyl (残废草原狼), 信区: Military
标 题: 鳖国科学院规划的有望实现创新跨越的重大突破（60 个）
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Sep 2 06:09:07 2016, 美东)
8月31日，中国科学院发布“十三五”发展规划纲要，未来五年，中科院将围绕基础前
沿交叉、先进材料、能源、生命与健康、海洋、资源生态环境、信息、光电空间等八大
领域，提出60项有望实现跨越发展的重大突破和80项重点培育方向（均不含国防科技创
新），涉及器官修复与再造、大气灰霾追因与控制等多项与民生直接相关的创新方向。
有望实现创新跨越的重大突破（60 个）
（一）基础前沿交叉（8 个）
. 数学与交叉方向
（1）Langlands 纲领和千禧数学问题。通过数论、表示 论、代数几何和调和分析等多
个分支交叉融合研究，培育凝练 能够引导数学方向发展的数学问题与猜想，争取在
Langlands 纲领、Riemann 猜想、BSD 猜想等重大数学难题的若干方向上 取得与国际
数学科学大奖同等水平的成果。
. 物理与交叉方向
... 阅读全帖 |
|
w********h
发帖数: 12367 | 25 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: cfcyl (残废草原狼), 信区: Military
标 题: 鳖国科学院规划的有望实现创新跨越的重大突破（60 个）
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Sep 2 06:09:07 2016, 美东)
8月31日，中国科学院发布“十三五”发展规划纲要，未来五年，中科院将围绕基础前
沿交叉、先进材料、能源、生命与健康、海洋、资源生态环境、信息、光电空间等八大
领域，提出60项有望实现跨越发展的重大突破和80项重点培育方向（均不含国防科技创
新），涉及器官修复与再造、大气灰霾追因与控制等多项与民生直接相关的创新方向。
有望实现创新跨越的重大突破（60 个）
（一）基础前沿交叉（8 个）
. 数学与交叉方向
（1）Langlands 纲领和千禧数学问题。通过数论、表示 论、代数几何和调和分析等多
个分支交叉融合研究，培育凝练 能够引导数学方向发展的数学问题与猜想，争取在
Langlands 纲领、Riemann 猜想、BSD 猜想等重大数学难题的若干方向上 取得与国际
数学科学大奖同等水平的成果。
. 物理与交叉方向
... 阅读全帖 |
|
c***s
发帖数: 70028 | 26 颜宁是谁？圈外人大都陌生。媒体一炒起来，就说是“美女教授”。正经一点的，如光明日报这样介绍：“世界顶尖结构生物学家、清华大学生命科学学院教授颜宁近日受聘美国普林斯顿大学分子生物学系雪莉?蒂尔曼终身讲席教授。”
但是，颜宁的终身讲席教授职位4月27日就已在普林斯顿大学董事会通过，5月3日国内微博也已传出消息。这本来是一条大长中国人志气的好消息啊，这么牛的普林斯顿，给予这么年轻的中国教授这么顶级的终身教授职位，中国人难道不该自豪吗？但奇怪的是，众多媒体大都讳莫如深，连清华大学和颜宁本人都很没吭声，其中到底有什么隐情？
看看颜宁在科学网的博客，再结合新华社简短的消息，就一目了然：颜宁是因为连续两年拿不到自然科学基金委的科研项目，负气而去。
2014年9月2日，颜宁刊发了题为《一份失败的基金申请》的长篇博文（链接：http://blog.sciencenet.cn/blog-65865-824367.html），详述自己向国家自然科学基金委申请“葡萄糖转运蛋白的结构与机理”项目失败的过程。她自认为像她这样在结构生物学领域的顶尖科学家，申请一个很可能做出世界前沿成果的项目，哪有不批准、不给钱的道... 阅读全帖 |
|
r*****m
发帖数: 3619 | 27 根本就没有原创的动机，没有原创的训练。接受的就是剽窃训练。
凋亡，晶体，信号，这几个在中国热的变形的领域，基本上就是类似剽窃的领域。
原创的就那么几个概念，TNF－alpha 通路，Fas ligand 通路，线粒体机制，G 蛋白受
体，第一个膜蛋白。
除了膜蛋白这个概念，施一公曾经尝试过，失败了，这几个概念和中国人其实没有任何
关系。
居然有几十万的千老在这些已经没有原创性的领域送死，确实是后30年中国大学教育的
奇葩。
这几个领域，就应该办成几个庞大的华大基因公司。有什么需要测的信号，付点钱去测
一下。还可以防止造假。 |
|
r*****m
发帖数: 3619 | 28 方肘子留美期间，没有很好的 ethics training
方周子剽窃密歇根州立大学一教授，被教授痛殴现行。教授贴了一个美国化学会对剽窃
的定义，方黑一直自己藏着，不肯拿给大家看。
最常见的剽窃，其实是写文章时，不作为的剽窃，就是不承认，不引用别人已经有的发
现，好象你这个文章是第一次原创的一样。这个行为属于剽窃，而且是最常见的剽窃。
化学，生物的千老，很少有正规的写文章的训练。脑子里对谁是原创，根本是无所谓的
。千老的脑子里，第一是院士，第二是数文章。数文章，就和美国爹指导的GDP一样。
千老也很少在会议上和原创的学者交流，别人也懒得去理这些只知道哪里有好吃的，哪
里有便宜货的人类。
懒得去问他们剽窃的事情。
凋亡，晶体，信号，这几个在中国热的变形的领域，基本上就是类似剽窃的领域。
原创的就那么几个概念，TNF－alpha 通路，Fas ligand 通路，线粒体机制，G 蛋白受
体，第一个膜蛋白。
除了膜蛋白这个概念，施一公曾经尝试过，失败了，这几个概念和中国人其实没有任何
关系。
居然有几十万的千老在这些已经没有原创性的领域送死，确实是后30年中国大学教育的
奇葩。
这几个领域，... 阅读全帖 |
|
u***n
发帖数: 10554 | 29 mark
"凋亡，晶体，信号，这几个在中国热的变形的领域，基本上就是类似剽窃的领域。原
创的就那么几个概念，TNF－alpha 通路，Fas ligand 通路，线粒体机制，G 蛋白受体
，第一个膜蛋白。除了膜蛋白这个概念，施一公曾经尝试过，失败了，这几个概念和中
国人其实没有任何
关系。居然有几十万的千老在这些已经没有原创性的领域送死，确实是后30年中国大学
教育的
奇葩。这几个领域，就应该办成几个庞大的华大基因公司。有什么需要测的信号，付点
钱去测
一下。还可以防止造假。" |
|
d****n
发帖数: 10034 | 30 这究竟是人才的流失还是人才的流动？
2017年5月7日，颜宁受普林斯顿邀请，离开了清华大学前往美国任教。引发人们纷纷猜
测。2019年4月30日，在两年前落选中科院院士的颜宁，时任美国普林斯顿大学分子生
物学系雪莉·蒂尔曼终身讲席教授，当选为美国国家科学院外籍院士。消息一出，顿时
间一石激起千层浪。
外界开始质疑颜宁选择离开中国是不是有其他不为人知的原因。然而她本人却三缄其口
，只说是因为希望自己在学术道路上有所突破，换一个新的环境，在科研上创造出更好
的成绩。
颜宁出生于山东章丘，于六岁同家人迁至北京。高中时候便因为学习成绩突出而受到老
师的重视。原本是志向是北大的她，在老师的建议下选择了清华大学生物科学与技术系。
老师的建议是正确的。在清华这段时间，她的才华得到展现。最终取得优异的成绩。清
华毕业以后选择保送普林斯顿大学读博。
四年后，颜宁于普林斯顿大学获取了分子生物学博士学位，毕业只是一个新的起点，颜
宁所在的课题小组决定研究膜蛋白的项目，这个全世界的学术界公认的难题就在颜宁与
她带领着的学弟学妹手中开始了。正所谓初生牛犊不怕虎，他们的研究取得了进展，这
一消息震惊了美国学术界的... 阅读全帖 |
|
R********n
发帖数: 5904 | 31
那是人裴校长的聘礼吧，这之前混得很灭。
发信人: zhongguo2 (ee), 信区: ChinaNews
标 题: 谢欣 and 裴钢
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jun 21 15:37:17 2011, 美东)
中国学术界的不良之风还有一种比较诚实的没有被大家关注过，可是很行之有效。那就
是合作。
这里就是一个学术造诣颇深的院士和一个混迹学术界想要出头的高干千金的两厢情愿的
合作。
我们先来看一下一个手里控制着上亿元科研经费的中国最年轻的973首席科学家，973胚
胎发育干细胞项目首席科学家的基本情况：
谢欣研究员，现任中国财政部长谢旭人之女
现任 中国科学院上海药物所 研究员、 国家新药筛选中心模型建立 II 部主管、 课题
组长 。
下面是她所有的有名字的文章，还算诚实，没用同名同姓的凑数。
可是大家已经要问这样的条件够中科院研究员、百人计划择优资助吗？那些录用的评委
和百人计划的专家组这么一反以严格著称的常态了呢？
1.Chen D, Liao J, Li N, Zhou C, Liu Q, Wang G, Zhang R, Zhang S, Lin
L,... 阅读全帖 |
|
T*********r
发帖数: 11175 | 32 你说中国的同步辐射装置看不了蛋白质结构？
不至于吧
我刚google了下上海光源
就看到一条新闻
http://www.sinap.ac.cn/content/ShowDetail.aspx?id=bff52e3d-f489-4555-a58c-337c1f1ab17f
上海光源（SSRF）生物大分子晶体学线站用户、清华大学医学院教授颜宁领导的研究组
与生命学院王佳伟博士、龚海鹏博士，合作开展大肠杆菌岩藻糖（L-fucose）转运蛋白
（FucP）结构与功能的研究，揭示了FucP在底物识别和转运，以及质子传递偶联过程中
起关键作用的残基D46和E135，为理解MFS家族提供了一个新的重要研究系统。相关论文
于9月27日在线发表在Nature杂志。文章报道两个结构，其中一个结构（FucP-N162A）
的数据完全在SSRF上收集。
FucP从属于Major Facilitator Superfamily (MFS)超家族。MFS超家族转运蛋白是
一类非常古老、在各个物种中都起着重要作用的转运蛋白，目前已知一级序列的家族成
员超过一万个，它们在营养物质和代谢产物的转运、细菌抗药性以... 阅读全帖 |
|
t******k
发帖数: 553 | 33 我不发表对二人是否结婚事情的任何意见，也不想知道，这个世界为博出位出名，手段多了去了。
裴院士，以前听过报告，有所认识。对于谢欣，这位最年轻的973首席科学家，海龟博士。开红色Audi TT的973兽吸，我还是第一次听说，无聊间，google了一下。
以下是转帖
引用:
这里就是一个学术造诣颇深的院士和一个混迹学术界想要出头的高干千金的两厢情愿的合作。
我们先来看一下一个手里控制着上亿元科研经费的中国最年轻的973首席科学家，973胚
胎发育干细胞项目首席科学家的基本情况：
谢欣研究员， 现任中国财政部长谢旭人之女
现任 中国科学院上海药物所 研究员、 国家新药筛选中心模型建立 II 部主管、 课题
组长 。
下面是她所有的有名字的文章，还算诚实，没用同名同姓的凑数。
可是大家已经要问这样的条件，没有一篇CNS系列的文章，1st-authored paper只有3篇
，够中科院研究员、百人计划择优资助吗？
那些录用的评委和百人计划的专家组，都糊涂了吗？这么一反以“严格”著称之常态了
呢？
1.Chen D, Liao J, Li N, Zhou C, Liu Q, Wang G, Zh... 阅读全帖 |
|
f*********r
发帖数: 1233 | 34 场强不是唯一的影响因素。
只有在平行板电容（面积无限大，板间距无限小，中间为完全绝缘介质）的理想状态下
，才可以单纯讨论场强。
而湿转环境完全不同。别说无限大无限小，面积和间距根本就在同一个数量级。介质也
是导电性极好的电解质溶液，通电后有很强的电流。还要考虑到蛋白在胶里以及在
buffer里穿行的流体动力学因素。
太多参数，我不会列这个方程。但我用过不同大小的转膜设备，在相同buffer和电流/
电压情况下，转大蛋白，效率随面积增加而呈几何提升。 |
|
A*******e
发帖数: 284 | 35 趁着这个帖子，请教结构的牛人。
做结构到底有什么作用？ 找潜在的药物靶点，大家都这么说，牛人们能给点具体例子
吗？ 曾经有个到结构牛人实验室的机会被我放弃了，但现在一点都不后悔。 感觉做结
构很难做出story。整天表达纯化结晶，会把我郁闷死。 还有看施做很多膜蛋白，一位
做结构的哥们跟我说他用除垢剂处理就能溶解结晶。我又有一个问题，这些发表的结构
真的能反应蛋白在体内的结构状态吗？ 特别是那些膜蛋白。 国内化大力气把施请回去
，除了指望CNS外，还指望其他的吗？ 比如解决什么具体问题，如找到某个疾病的治疗
方法。
想当年钱学森回去解决多少国内难题，这才是真的有用之才， 而生物学， 我觉得这样
的有用之才是非常少的，就实际情况来说很多目前都是没用的。 有人将施和钱放在同
一等级，我实在是难以理解。 |
|
b****n
发帖数: 311 | 36 11公三年前才开始做膜蛋白， Eric是做膜蛋白成名的。
11公做的主要是bacteria transporter， Eric做的是神经生物学和药理学里重要的递
质受体，从蛋白的大小到重要和受关注程度Eric都胜出。
Eric已经是院士了，相比较而言，11公的受承认程度还达不到人家的水准。
和2人没接触，没恩怨，不做structure,仅是一点个人看法。 |
|
a***y
发帖数: 19743 | 37 更新, clarify了一下情况。
选择一的老板是assistant
目前tenure在审，实际上我博士导师参加校外评估，但是是confidential。
tenure没问题，事实上学校让他提前申请tenure评估。
选择二的老板也是有钱的，差别可能不大。
二确实没有研究生。不过很多牛校老板不是经常没有吗？
以下是之前的描述。
选择一
综合大约前20，专业前三的学校。
教授比较聪明，也还算nice，经费较充足，实验室大小总共约10人，力求研究生和博后
对半。文章大约常发10分左右的。比较新的实验室，业内声誉挺好。有senior博后在中
国找到faculty。
研究项目会用到：RNAseq，蛋白组，MS，大部分常用的蛋白分析手段。研究膜上膜蛋白
。不属于医学，但是有NIH的经费。
选择二
top 3大学旗下最好的医院里的实验室
教授人品不错，成长背景历程和我类似，估计所以才给我面试。去年面试的，今年再联
系，有额外的经费了，有意收我。实验室大小差不多，没有研究生，全是postdoc和
senior的fellow，手下fellow拿到一些fellowship概率不错。副教授，还没有转正。文... 阅读全帖 |
|
l**x
发帖数: 52 | 38 我大部份的蛋白用这个条件转膜，原来utrophin也可以啊.
你一般大小的蛋白是用什么条件？谢谢sunnyday |
|
q*******8
发帖数: 768 | 39 哦。。。我看了TRANSPORTER帖再看这个。。。脑子里都是膜蛋白了。。。不好意思~~
你的蛋白是膜蛋白咩？ |
|
s******y
发帖数: 28562 | 40 会不会是你把膜粉碎的时候把两种来源的膜都弄碎了然后弄到了一起？
ER 在mitochonrida 分裂的时期好像是有结合的。但是这个互相作用貌似
只对于线粒体外膜蛋白有效。
另外一个可能性就是你过表达的蛋白太多了，出现了aggregate or misfolding,
然后把本来应该sort 到线粒体里的蛋白给留住了。
contamination， |
|
e***o
发帖数: 344 | 41 不能进细胞靶点就少了很多。但作用于膜蛋白的话是不是非特异结合的机会更少，side
effect 就小了？现在有很多的要都是针对膜蛋白的。主要是G蛋白和一些离子通道和
几个receptor.
Penetrating pepetie 的效率不知道有多高？
多肽生产的成本相对筛选和临床试验而言还是算不得大头。多肽应该也能用酵母什么的
合成吧。记得见过类似的专利。 |
|
c********p
发帖数: 1 | 42 工作地点:上海浦东张江
年薪: 20-25万
学历和研究方向:博士以上有两年以上的博士后经验
招聘岗位: 研究助理教授
学校名称: 上海科技大学
网址: www.shanghaitech.edu.cn
联系方式: l*********[email protected]
本人运气，准备加入新建的上海科技大学生命科学与技术学院。课题组以X-射线晶体学
和电生理学为主要手段研究膜通道蛋白和次级转运蛋白的底物选择性、门控特性和底物
转运耦合机制。现邀请志同道合者以研究助理教授的职位加盟本课题组。研究助理教授
将获得上海科大正式员工的编制，享受上海户口和进一步成长为独立PI的待遇。
招聘条件：
1)生物化学，分子生物学，医学，药学或相关专业博士毕业后两年以上相关专业科研经
历；在国际刊物上以第一作者发表过论文；
2)具有良好的人际关系和团队协作精神，工作努力，作风踏实，能够适应具有较高竞争
性的环境，团队协作能力佳；
3)具有良好的中英文口头表达和写作能力；
4)身体健康，能长期稳定工作。
岗位职责：
1)协助PI组建膜蛋白结构生物学实验室。
2)负责实验室的常规技术工作,协助培养研究生。
3)积极参与或独... 阅读全帖 |
|
r*****m
发帖数: 3619 | 43 方肘子留美期间，没有很好的 ethics training
方周子剽窃密歇根州立大学一教授，被教授痛殴现行。教授贴了一个美国化学会对剽窃
的定义，方黑一直自己藏着，不肯拿给大家看。
最常见的剽窃，其实是写文章时，不作为的剽窃，就是不承认，不引用别人已经有的发
现，好象你这个文章是第一次原创的一样。这个行为属于剽窃，而且是最常见的剽窃。
化学，生物的千老，很少有正规的写文章的训练。脑子里对谁是原创，根本是无所谓的
。千老的脑子里，第一是院士，第二是数文章。
千老也很少在会议上和原创的学者交流，别人也懒得去理这些只知道哪里有好吃的，哪
里有便宜货的人类。
懒得去问他们剽窃的事情。
凋亡，晶体，信号，这几个领域，基本上就是类似剽窃的领域。
原创的就那么几个概念，TNF－alpha 通路，Fas ligand 通路，线粒体机制，G 蛋白受
体，第一个膜蛋白。
除了膜蛋白这个概念，施一公曾经尝试过，失败了，这几个概念和中国人其实没有任何
关系。
居然有几十万的千老在这些已经没有原创性的领域送死，确实是后30年中国大学教育的
奇葩。
这几个领域，就应该办成几个庞大的华大基因公司。有什么需要测的信号... 阅读全帖 |
|
x**********7
发帖数: 973 | 44 水溶蛋白不是不好结晶，而是重要的，稳定的，好结晶的已经被玩遍了，呵呵
剩下的基本都是硬骨头或者没用的
做膜蛋白绝对属于钻牛角尖， 绝对不适合博士生和博士后去做 ，因为时间效费比的问
题（ 可以让PI自己去玩，他们的时间周期更长）
另外做结晶这一行工业界基本没有职位， 膜蛋白更没有。 想找工作的千万别跳这个坑，
任他忽悠个天花乱坠，NSC满天飞，也别跳 |
|
j**i
发帖数: 89 | 45
你的点突变是不是在调节区域呀?怎么会有那么大的影响?
偶的蛋白是线粒体的膜蛋白,没有颜色,
偶每次就用线粒体直接测活性,
因为该酶脱离了膜就没有活性了.
这样一来我测的是总蛋白浓度,
我又不能确定酶在线粒体里的百分含量.
你说怎么办呀? |
|
y****l
发帖数: 1 | 46 大家好，我最近拿到了一个十二个跨膜结构膜蛋白的晶体，正在做SeMet标记晶体。
我用的菌株是：B834（DE3）
培养基：M9+19个氨基酸+0.5%glycerol+ 5%glucose +Thiamine+1mM MgSO4+0.1mM
CaCl2+0.05mg/ml selenomethionine+amp
温度：37°
培养时间：24小时
用这样的方法，没4L菌可以大概拿到3毫克的蛋白。
现在问题是3毫克蛋白根本不够我用来长晶体。
问题：
1.在养细胞的时候我发现离心以后上清还是很浑浊，还有大量的菌在上清中无法被离下
来。我
加大了离心的速度和时间，还是无法离下来。有好多菌附着在离心管壁上。不知道这是
为什
么？
2.离下来的菌有一些黄黄的东西，而且是比较多的。通过我的纯化，我发现这些黄黄的
东西是
不能被detergent溶解的，里面没有我的目的蛋白。不知道这些黄黄的东西是什么？
3.离下来的菌在悬在buffer的时候，我发现很粘稠，和我用与表达非标记蛋白用到的菌
的时候
是完全不一样的。是不是菌破裂了，dna跑了出来。很奇怪。
4.长SeMet derivative pro... 阅读全帖 |
|
b*****g
发帖数: 91 | 47 这个跟物质特性有什么关系。研究蛋白是研究蛋白的功能机制，比如膜蛋白，研究它们
怎么把小分子从细胞外运输到细胞内或者从细胞内pump到细胞外。从单纯的一个静态结
构是很难完整得出运输机制，但从结构中还是能提取出很多机制相关的信息。如果能从
同一个蛋白解出多个不同的态下的结构，当然就能很完整的阐述蛋白的运输机制，如果
在配合生化／生理实验和计算机模拟，就能完整的描述出运输机制 － 运输过程中蛋白
构型变化以及所需的能量。但是，怎样刺激／触发蛋白运输的原因／机制，那就是另外
一回事了 |
|
i***s
发帖数: 39120 | 48 在今天这篇文章里，你将认识她——颜宁。当今最受瞩目的女科学家，清华大学和普林斯顿的学术女神，30岁成为清华最年轻博导，37岁率领平均年龄不到30岁的团队攻克困扰结构生物学界半世纪的科学难题。
先来看看她的简历：
颜宁，1977年生于山东莱芜；1996年进入清华大学生物科学与技术系；2000-2007年在普林斯顿大学分子生物学系攻读博士学位并进行博士后研究；30岁不到受聘成为清华大学生命科学学院最年轻的教授和博士生导师；37岁率领平均年龄不到30岁的团队用6个月的时间攻克膜蛋白研究领域50年不解，最受瞩目、国际竞争也最激烈的科学难题；2015年获国际蛋白质学会“青年科学家奖”、“赛克勒国际生物物理奖”。
2016年9月，颜宁受邀在央视开讲，畅谈自己的科研经历和人生感悟。演讲全文如下：
刚才，我们已经谈到了葡萄糖转运蛋白。而在过去两年，我和人谈起这个转运蛋白，就好像我跟我爸爸说转运蛋白，他会立即想到转运气。我就意识到可能我们日常所进行的这些工作对于大多数不同的学科的人来说，是一个很陌生的世界，很遥远的世界。所以，我也想借这个机会和大家分享一下我眼中的这个世界。
金钱不是衡量幸福感的唯一标准... 阅读全帖 |
|
