u*********1
发帖数: 2518 | 1 估计每个学校都有自己的sequencing core；但测序的质量和产量都ok吗？
有人去找别的学校之外的地方测序么？比如BGI？ BGI都开到boston来了。有人去BGI测
过么
另外不晓得Hiseq2000的100PE的一条lane一般的产率是多少？我在网上看的也众说纷纭
。我两个sample，一个是95 million read pairs；另外一个只有65 million read
pairs
如何提高产率啊？学校的sequencing core扯了半天，测一次我说低，然后他们就再想
办法提高一下。难道sequencing core不是用standard pipeline么？还要通过每个不同
的library来做不同的尝试？
另外自己做的library construction，有什么需要注意的么？如何才能达到optimal啊
。。。
因为要做high-coverage的whole genome的测序，所以对一条lane的产率还是要求很高
的，不想浪费钱 |
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w*****s
发帖数: 230 | 2 谢谢。他的测序在这个地方做的，
https://www.bcm.edu/research/medical-genetics-labs/index.cfm?PMID=21319
我们家宝宝6个多月被医生诊断为晚期肝硬化，必须换肝。从PICU回家后改为食用高MCT
奶粉在家等待换肝期间， 身体状况不断改善，目前不需要立即换肝。根据我们观察，
感觉宝宝身体积累长链脂肪酸到一定程度就开始伤害他的肝。可是医生不这么认为，认
为我们观察到的只是偶然巧合，可我们认为三次了不算巧合：
第一次在PICU， 食用长链脂肪酸非常高的奶粉病情急剧恶化。
第二次回家换奶粉后，病情改善完全出乎医生预期。
第三次最近食用鸡蛋半个多月，结果去年住院前的症状重现。
在我们尽力争取下做了全基因组测序，可是没有任何有用的结果。就报告来看，孩子应
该一切健康。我们怀疑的NICCD基因报告里没有显示任何不正常。
可是有的文章说这个基因的genotype和phenotype没有确定联系。而ncbi那里似乎东西
也挺全的，没有道理不报告出来。我们是在baylor medical center做的。目前还没有
要到原始数据，而根据他... 阅读全帖 |
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t********h
发帖数: 456 | 3 贺某自己在基因编辑峰会上公布的结果
https://m.weibo.cn/status/4311271006839536?
查了贺某的所谓测序结果，气得睡不着。
上半部分应该是胚胎1、胚胎2“可能脱靶区域”的测序结果，“无证据”、“低证据”
。什么个低法？这么敷衍的写几个基因，你吹上天的全细胞测序呢？
下半部分无疑是CCR5的区域，excuse me? 这个根本不是CCR5 delta32基因型啊，根本
没有“柏林病人”的抗艾能力好吗？
1号胚胎（1号女婴）应该是贺某嘴里的“杂合子”了。（是的把活生生的人用这种术语
称呼非常不正确，但我也没办法。）1号女婴缺失了15个碱基对，编译氨基酸182-186（
序列HFPYS）。这个刚好在是膜外的关键linkerECL2上，不仅是HIV病毒gp120结合位点
，也是很多趋化因子结合位点。然而截短5个氨基酸后（即使是在linker）的膜蛋白会
不会正常折叠上膜？何况是杂合体，女婴体内突变蛋白量到哪个程度？这会对人体造成
什么影响？？
2号胚胎是两个不同的移码突变。这既不是CCR5 delta 32的基因型，也不是纯合子。如
果... 阅读全帖 |
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e*********0
发帖数: 79 | 4 基因组学/高通量测序项目经理
岗位职责：
1. 负责DNA或RNA样品高通量测序技术项目的开发，维护和发展海外客户关系；
2. 从事基因组学相关项目的研发及服务;，负责项目跟踪和技术支持；
3. 为海外客户提供优质高效的产品服务售前售后技术支持工作
4.. 做好项目的基础管理工作,保存各文件,记录,数据等资料;
5. 制定工作计划，定期进行工作总结. 完成公司规定的国际业务相关的各项工作任务；
职位要求：
1. 基因组学、生物信息学、微生物学、生物技术、医学检验等相关专业，硕士及以上
学历；
2. 熟悉新一代DNA/RNA测序、DNA/RNA合成、质谱分析和生物芯片技术者优先；
3. 具有较强的专业理论知识；
4. 英语六级水平以上，能够熟练进行英语交流和报告写作，能以英语作为工作语言与
国外客户进行无障碍交流，熟练掌握Office 2010办公软件；
5. 具有较强的责任感. 组织管理能力. 协调沟通能力. 分析和解决问题能力及创新和
团队协作精神；性格稳健. 认真踏实. 积极肯干。
安必奇生物科技有限公司是一家新兴的生物产品研发服务的公司，成立于2005年，总部
Creat... 阅读全帖 |
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c*********9
发帖数: 2 | 5 职位：分子生物学实验室主管（二代测序/定量PCR方向）
职位月薪：面议
工作地点：南京-高新区
工作性质：全职
工作经验：3年以上
最低学历：博士（特别优秀者可放宽）
招聘人数：1人
岗位职责：
1 建立二代测序实验平台
2 协助实验室管理，执行并优化现有定量PCR技术流程
3 负责技术问题的发现，反馈以及研究解决
4 协调实验室器材日常维护
任职要求：
1 具备良好的英文听说读写能力；
2 有相关二代测序/定量PCR工作经验，熟练使用分子生物学知识和技能
3 有医学检验经验、英语水平优秀者优先。
4 有基因组学，肿瘤分子遗传学知识背景者优先。
有兴趣者，请联系email: [email protected]
/* */ |
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e*********0
发帖数: 79 | 6 基因组学/高通量测序项目经理
岗位职责：
1. 负责DNA或RNA样品高通量测序技术项目的开发，维护和发展海外客户关系；
2. 从事基因组学相关项目的研发及服务;，负责项目跟踪和技术支持；
3. 为海外客户提供优质高效的产品服务售前售后技术支持工作
4.. 做好项目的基础管理工作,保存各文件,记录,数据等资料;
5. 制定工作计划，定期进行工作总结. 完成公司规定的国际业务相关的各项工作任务；
职位要求：
1. 基因组学、生物信息学、微生物学、生物技术、医学检验等相关专业，硕士及以上
学历；
2. 熟悉新一代DNA/RNA测序、DNA/RNA合成、质谱分析和生物芯片技术者优先；
3. 具有较强的专业理论知识；
4. 英语六级水平以上，能够熟练进行英语交流和报告写作，能以英语作为工作语言与
国外客户进行无障碍交流，熟练掌握Office 2010办公软件；
5. 具有较强的责任感. 组织管理能力. 协调沟通能力. 分析和解决问题能力及创新和
团队协作精神；性格稳健. 认真踏实. 积极肯干。
安必奇生物科技有限公司是一家新兴的生物产品研发服务的公司，成立于2005年，总部
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j*******e
发帖数: 23 | 7 我们在深圳开了一家小公司( www.pacgeno.com)，刚刚起步，已经拿到了风投。现在主
要的目标是开发基因测序仪。目前公司的CTO职位还是空缺，国内找不到合适的人。如
果各位网友中有二代基因测序仪器开发经验，或者做过基因芯片，或者对单分子荧光检
测有经验的优秀PHD，欢迎加入。公司刚开始，CTO会有股份期权。
基因测序是国内外最热最有前途的领域，因此欢迎回来和我们共同创业 |
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j*******e
发帖数: 23 | 8 我们在深圳开了一家小公司( www.pacgeno.com)，刚刚起步，已经拿到了风投。现在主
要的目标是开发基因测序仪。目前公司的CTO职位还是空缺，国内找不到合适的人。如
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C*G
发帖数: 7495 | 9 DNA测序设备的革命。
RNA的直接测序，精度高，长序列上千个碱基，
进入医学应用的时机已经成熟。DNA测序会是病理学一样的服务业。
DNA解码未来5年高成长行业，1000亿美刀的未来市场？！
IPO新股，太平洋生物科学公司，下一个Illumina？！
产品上市前进入最后冲刺。
减仓Illumina，加仓PACB。
hiahia
请大牛，专家们补充评价排砖。 |
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x*******o
发帖数: 2581 | 10 RNA如何直接测序？个人感觉凡是和RNA沾边的，都超贵，超麻烦。
DNA测序不是很便宜，很常见吗？4刀就能测上7-800个碱基？美国大学都有吧。我以前
在德国，一个大实验组都配有一台DNA测序仪。 |
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E*********r
发帖数: 4984 | 11 简单看了一下那个公司，湾区这边类似的公司很多，都号称可以诊断癌症。在公司的介
绍中，注意一句句子...often expands treatment options by matching each
patient with targeted therapies that are relevant to the molecular changes
in their tumor. 尤其特别注意Molecular这个词。肿瘤的形成原因很多，至今还无法
搞清，DNA上的变化当然是比较基本的，包括突变、重组、增加或减少某个片段等。这
些可以通过测序发现，但是这些变化并不一定会形成肿瘤，同样的变化，有些人得了肿
瘤，有些人没有，这当中包括一些抑癌基因的表达增强，或者免疫系统杀死肿瘤细胞等
等。还有不少肿瘤是属于Epigenetics范畴，譬如甲基化和乙酰化等，还有在蛋白水平
的变化，和病毒引起的肿瘤等等，总之，测序仅仅提供了基因的序列，至于这些基因如
何表达，基因和基因之间的相关性和调控而引发肿瘤，测序是无法提供信息的。目前测
序还是停留在学术领域，进入临床有一些，还未普及，停留在初期阶段，应该... 阅读全帖 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 12 传统sequencing好像都是这样，primer后面的20bp甚至我见过到50bp左右的噪音都很大
，读不出准确的序列来，我觉得跟测序胶的制备质量有关系。但是开始15到20个bp读不
出来是很正常的。解决方法很容易，在insert两端再往外20个bp左右设计一个新的测序
引物就好了。
第二个问题，如果你几次测序结果都肯定了那个是突变而不是误测的话，那应该就是突
变了。。。用site-directed mutagenesis把它变回来就好了。 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 13 只能答一下第二个问题：
sanger测序用的引物是质粒测序的标准引物还是自己设计的？你说的往后隔了好远是多
远？Sanger测序的前30-50个base基本都是乱的，没有太大参考意义。所以一般设计测
序引物都会在插入位点的前后至少隔开50bp以上的距离，否则你就要损失一段序列读不
出来了。 |
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s***o
发帖数: 1189 | 14 请问测序高手，
construct 经限制性酶切后 做胶回收 然后 酶切片断 可否测序？？
课题需要，在construct里构建double sequence （～2.5kb）。测序遇到麻烦。
谢谢 |
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d******8
发帖数: 1972 | 15 刚刚拿到了表达质粒的序列结果，发现起始密码ATG 变成了ATC，而且这个起始密码是
引物的一部分，其他所有序列都完全符合。觉得这个测序结果很诡异，基因是用高保真
的PFU扩增的，里面基因无一变异，所以怀疑是引物合成的问题，仔细查看了OPRON的单
子，也没有错。
正好这个起始密码是NCO I 的酶切点，酶切也能线性化，现在我有个疑问，酶切的识别
序列CCATGG（测序是CCATCG)是应该完全符合才能切吧？那测序结果又怎么解释？ |
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n**a
发帖数: 212 | 16 做了一个knock-in construct，全长13kb的genomic DNA, 单克隆，maxi-prep , 酶切
都是正确的，送去测序却20个引物只能有6个正常测序，其他要么扩增奇短，要么不反
应，要么杂峰。
大家给看看，是不是genomic DNA测序有什么要注意的？多谢! |
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f*******e
发帖数: 628 | 17 如果不扩增，很难保证能够重复多次的测某个特定分子的某个特定片段吧，这样就很难
判断错误是来源于测序错误或者 real 吧？
看了看好像不能像 PacBio 一样不停的轮回对同一个分子测序。Nanopore 的技术好像
至少用那个 exonuclease 的是测序同时也摧毁分子。Strand sequencing 也许还行，
不过很难保证这次测了之后还能再 capture 到同一个 strand 来测啊？
到最后 error 大概只能靠 coverage 来解决。
了。 |
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f*******e
发帖数: 628 | 18 都有错误，所以 illumina 454 啥的都要事先 sample amplification。这个 nanopore
既然号称不需要 sample prep, 就需要解决单分子测序的 error 问题。当然如果
sample 本来就是 amplicon 就无所谓了。
哪个文章？他们网站上说是有两种 mode，其中一种是用 exonuclease 的。我理解那个
strand sequencing 不用 nuclease，但是具体怎么 把 double strand 弄成 single
strand，然后 single strand 通过了之后如何 recover 不是太明白。
我没以为是单细胞测序，所以才说 error 要通过 coverage 来解决。而 PacBio 的某
个解决 error 方法是循环的重复测某一个单分子，这一点 Nanopore 好像做不到，因
为我的理解是某个 strand 通过测序之后被重复测的几率很低很低。这个 error 的问
题，特别在 sample 本身很少的情况下，比如一个 finger stick 的血样，不能解决的
话就是个问题。 |
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a****k
发帖数: 1130 | 19 sunny哥哥说的和我最开始听说这玩意是同样的反应哎。。。
再说这个计划本身，他们现在是去阿根廷采样回来测，然后每次要经过大量的分离提纯
，用各种最先进的kit才能让那些样品足够被测序出来。这进度离真正弄个robot到火星
上直接采样完成测序差了好大一截子呢。我觉得真要弄个这计划，还是先发展发展分离
提纯测序的一整套系统，比他们背着一堆仪器跑去阿根廷，还被当作间谍靠谱的多。。
偷偷的说。。。 |
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s******s
发帖数: 13035 | 20 常规测序只要一个pcr，测序的时候引物不一样就可以了，当然8k不好批。
这种multiplex我也用过，觉得比这个情况更合适。当时是检测三种状况
下十几个基因甲基化情况。甲基化一般每段都要是克隆测序，比较烦，但是
同时不关心具体是哪个克隆。所以，我的做法是，每个基因选个两三段pcr
出来，混一起，然后用某种dnase打成小片段，然后每种状况加一个barcode,
最后就只是triplex。 |
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y*****u
发帖数: 31 | 21 用TRIZOL同时提临床得来的病人组织的RNA和DNA.之前一直觉得RNA很稳定没问题，在好
不容易凑足了DNA后送出测序，结果回馈说RNA降解了，而DNA浓度和我们测出的浓度相
差100倍。惊呆了。
1. DNA浓度我是用NANODROP测了好几次，不明白为啥测序公司测出来的数值会和我测出
来的差100倍？？？
2.RNA我后来把剩下的跑了胶，发现的确降解。现在又得到新的组织再提，还是发现有
降解情况。我以前都是做现杀的老鼠组织提RNA,手法我也一直没问题。这个新的临床标
本据说是病人手术切下之后一直低温保存，有实验需要就用干冰运来。第一次是保存在
TRIZOL里运来，第二次是直接运组织，我用液态氮碾碎了。但是都提出了降解的RNA.
我现在打算用细胞用同样的手法提RNA作为对比，看是否我的实验有问题？还是标本已
经降解的了。请问细胞提出的RNA对于组织RNA是否有参考性？
如果标本有问题，我现在提出的已经降解的RNA是否也能进行测序呢？效果如何？ |
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j*******e
发帖数: 23 | 22 我在深圳开了一家小公司( www.pacgeno.com)，刚刚起步，已经拿到了风投。现在主要
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基因测序是国内外最热最有前途的领域，因此欢迎回来和我们共同创业 |
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m********2
发帖数: 317 | 23 要写文章了，我做了几个基因组测序，请问需要将测序的原始数据提交吗?有这样的数
据库接受吗?
我知道Genearray的原始数据是需要提交到一个数据库的，不知道测序是不是也是这样
有了解的同学给个建议，谢谢 |
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j******i
发帖数: 939 | 24 这哥们专业个屁 刚开始看到pcr就说very effcient 别人提出其他可能时 他很自信的
说 不可能！现在又自抽耳光了 他的测序应该是sanger测序 3和8可能只是测序质量不
好 否则即使messy也是可以很确定的看出indel的
3
a |
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T**********e
发帖数: 29576 | 25
测序都是玩了十几年的事情，谢小亮一直在搞单细胞测序。 |
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S**********e
发帖数: 433 | 26 他来硅谷旅游，听说基因测序比香港便宜，让我给他查查遗传病。
这个事情靠谱么？听说很贵，美国的测序便宜是不是因为跟贵的不一样呢？ |
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W*****B
发帖数: 4796 | 27 你告诉他，唾液不行。得精液才行
：他来硅谷旅游，听说基因测序比香港便宜，让我给他查查遗传病。
：这个事情靠谱么？听说很贵，美国的测序便宜是不是因为跟贵的不一样呢？ |
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x********e
发帖数: 35261 | 28 生物千老告诉你，用唾液测序这手段很成熟了，不管哪里测的结果都不会有太大差别。
钱其实是花在数据分析比对上面。有些测序公司有大的数据库，成熟pipeline，有的跟
我们千老小作坊分析似的。然后就是如何把专业结果转换成门外汉能听懂的语言，并给
出建议。这个叫遗传咨询服务。 |
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a******d
发帖数: 955 | 29 湖北测序的确太少，尸检也做得很晚。不知道他们有没有起码保留一点样品，可以回溯
回去测序。 |
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u***r
发帖数: 4825 | 30 https://news.sina.com.cn/w/2020-03-12/doc-iimxyqvz9912935.shtml
2020年03月12日 17:16 观察者网
（文/观察者网 郭涵）意大利作为欧洲新冠肺炎疫情最严重国家，其传染源“零号
病人”至今仍是个谜。但该国研究人员近日通过基因测序发现，病毒可能早在1月份经
德国，而非中国，直接传入意大利。
截图：路透社截图：路透社
路透社11日报道，米兰大学传染病学教授、路易吉·萨科医院传染病科主任马西莫
·加里（Massimo Galli）的团队，对意大利患者的病毒样本进行基因测序，发现与一
名1月份在德国被感染的患者高度匹配。
“与毒株最接近的序列，来自一名最有可能是1月19日至22日在慕尼黑被感染的患
者，他可能是最早的。”加里说，该德国患者接触一名自上海回来的同事后感染，随后
将病毒带到意大利。
“我们可以想象，一个在慕尼黑被感染的人来到意大利首先出现疫情的地区，在毫
无症状的情况下传播了病毒。”
他认为，疫情可能早在1月25日至26日就已经在意大利蔓延，明显早于2月中旬该国
出现的首例本土确诊。
米兰大学传染病学教授马西莫... 阅读全帖 |
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m********2
发帖数: 317 | 32 我按照你的要求用方形矩阵展示测序结果，请你指出来北美国的测序结果（红色）的源
头是哪个？ |
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x****x
发帖数: 6 | 33 北美欧洲新冠不是来源于中国, 来源于你家?
发信人: mousemice2 (micemouse2), 信区: Military
标 题: Re: 基于当前测序结果20200324，北美欧洲新冠不是来源于中国
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Mar 24 20:56:27 2020, 美东)
另外，请注意我的结论：基于当前测序结果20200324，北美欧洲新冠不是来源于中国 |
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发帖数: 1 | 34 意大利在去年12月前就有零星不明肺炎感染者，或早于武汉暴发，这个没有问题。武汉
在去年11月前或更早就有不明感染者了。问题是为什么别的国家都后于武汉暴发，土共
还把华南海鲜市场洗了又洗，还把首个上传新冠病毒基因测序的上海研究所关掉了？
你这自干五太累了，土共不啥不上传早期病例基因测序？真是急死太监！
：意大利知名医学专家朱塞佩·雷穆齐更做出一个重要判断：本国疫情，或早于中国传
播！
：雷穆齐在接受美国国家公共广播网（NPR）采访时表示，他听到过来自医师的消息，“ |
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J******m
发帖数: 97 | 35 谁能推荐一个好的PCR 产物(DNA)测序公司？我作了24个样品，浓度大约100ng/ul，可
是测结果让我想哭，只有一个反应测出了500bp，我纯化后，跑了胶，是非常漂亮的单
一的带。我的DNA长度是800bp。还是我的方法有问题，要克隆到Vector里，然后测序？
大牛，救救我！哪里有可以讨论或请教的地方？ |
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d**********2
发帖数: 12 | 36 中山大学中山眼科中心是国家985重点大学中山大学的附属医院, 为国家三级甲等医院
，是国内唯一的眼科学国家重点实验室的依托单位。 因工作需要，眼科学国家重点实
验室转化系统生物学实验室现招聘计算类和实验类科研人员若干名，具体职位包括(1)
副教授(2)博士后。
实验室简介：
转化系统生物学实验室(Laboratory for Translational Systems Biology)试图用计算
结合实验的手段从系统水平探索人体疾病机理。我们通过高通量测序和计算生物来分析
人类基因组，转录组，结合临床数据，建立生物及疾病网络，分析疾病和正常人体的差
异性。实验室将以眼科疾病作为主要研究对象，所开发的计算和实验手段也会应用到其
他非眼科疾病。实验室大型设备包括大型电脑计算服务器(理论峰值计算能力11万亿次)
和高通量测序仪。
实验室负责人：
谢志教授现任中山大学眼科学国家重点实验室转化系统生物学实验室负责人。原任美国
国家癌症研究院研究员(Investigator)，有医学和计算双重背景，长期从事系统生物学
研究。2012年获得第三批国家“青年千人计划”资助。以第一作者和通讯作者发表的文... 阅读全帖 |
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j*******e
发帖数: 23 | 37 国内尚无真正的自主知识产权测序仪。国家一直呼吁和支持中国自己的测序仪研发和产
业化。 |
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d**********7
发帖数: 17 | 38 基于NGS测序和单细胞测序的GENTEICS TEST现在不是一般的火，不管是中国还是美国，
而且新的检测项目，新的技术还在层出不穷的出来。前途一片光明。
本人现在一个大学的NGS中心做主管，有10多年实验操作经验，有技术也有资源，一直
考虑QUIT自己创业，但是苦于单枪匹马。
希望能和同样有强烈创业冲动，最好已经准备行动，并有一定资源的朋友多交流。
题外话，如果您只是有初步的想法，或者只是想打听点这方面的消息，请勿扰。因为最
近中心的事太多，时间实在有限。
谢谢！ |
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i***R
发帖数: 663 | 39 现在的DNA shotgun 技术测序很快。
测序一个应用就是找孩儿他爹，见过路边一广告, 姑娘抱着个孩子，
下面写： Who is the father ？ |
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g**a
发帖数: 2129 | 40 基因测序的结果用SNP-array来做质控？为啥？这个质量怎么控？难道他们自己做了一
个含有1 billion SNP的芯片？既然可以用SNP-array来做质控，为啥不直接用全基因组
的SNP-array来直接检测可能的潜在位点？单细胞（或者少量细胞）全基因组测序的结
果怎么样？这个技术能够实现确实很不错，问题是在无法验证的情况下，起到了什么正
面作用？ |
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b*****h
发帖数: 783 | 41 Helico是目前商业化仪器种最好的，不过估计很快就要被这些新的仪器所超过。
更远的还有nanopore sequencing。
Oxford Nanopore 正在开发一种全新的测序系统。大概原理是在一个特殊板上打满了
nano尺寸的小孔，每个孔上面有一个dna外切酶，可以把测序样品dna一个一个碱基切割
下来。切下来的碱基会通过nano孔，而孔中是有微电流的。不同碱基通过孔时对电流的
改变是不同的，通过检测电流的变化来确定dna序列。（http://www.nanoporetech.com/sequences) |
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k*******s
发帖数: 214 | 42 这种情况下要重新测序，如果一定要make sure.
要是测序有困难我帮你测吧。 |
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t****o
发帖数: 442 | 43 我把一段DNA转染到真核细胞，建立了稳定细胞株。有没有直接的测序方法，可以确定
这段DNA插在了哪里？
我试过INVERSE PCR。因为细胞株太多，所以一一做来很麻烦，成功率也很低。
能推荐一个公司直接测序吗？ |
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X***n
发帖数: 366 | 44 这个要克隆测序才行。一株细胞至少要十几个单克隆测序吧。
是lentivirus整合和是质粒？ |
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R****g
发帖数: 110 | 45 我在做illumina测序的样品，胶上切下来后再Qiagen column纯化的250bp的条带用
Bioanalyzer检测就成了350－
400bp了，不知道相信胶还是Bioanalyzer了。版上有没有朋友碰到过同样的问题，怎么
解决的？能直接送去测序吗？多
谢。 |
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K**********e
发帖数: 188 | 46 在细胞系里面敲掉某个基因，然后用新一代测序技术测mRNA， 跟野生型相比较，看看
有哪些基因转录上调哪些下调，上调下调多少倍，可以做吗?
是不是现在没有这样的软件可以分析测序出来的数据?
谢谢 |
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v***a
发帖数: 1242 | 47 拿有我insert DNA的plasmid去测序，用的是在vector上的primer（在insert的两边）
来读序列（是测序公司提供的T7和T3 primer），结果insert的头和尾总是有大概15～
20个bp读不出，都是N（我的insert有1.5kb左右），不知道这个问题该怎么解决好？
还有一个问题，发现这个plasmid在insert DNA的大约970bp处有一个碱基突变，由A/T
突变为G/C，就这一个不符，不知道这个是因为什么原因呢？
谢谢高手们回答吖 |
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s********2
发帖数: 138 | 48 嗯,oldmonster 批评的是，我总觉得自己现在的表达水平骤降。我用的是BigDye
teminator cycle sequencing kit进行测序。试剂盒里面自带一个质粒和引物，作为
control，产物和引物比例是200ng：3.2pmol（因为是双链质粒，所以用量大）。我用
的是纯化后的PCR产物和自己的引物，并且产物纯化后的A260/A280也是1.7-2.0。产物
和引物的比例是50ng：3.2pmol。进行cycle 标记，进行了25个循环。然后将标记后的
产物用Ethanol/EDTA 进行纯化。结果是：control出来结果很好，而自己的产物却只有
在很前面的地方有很高的几个峰，根本不是产物。所以我怀疑我的产物根本没有标记上
？不知道这样是不是还是不够详细。希望大家能够帮帮我！ |
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s********2
发帖数: 138 | 49 嗯，是phD。不过我不拿美国的学位，我只拿国内的学位。我只是作为交流学生来美国
待两年。我不是全职做测序，呵呵。我接触过next generation sequencing。并且我还
做过一部分这方面的工作。主要是我现在的工作是需要知道基因的一些序列。如果送给
公司测得话，必须凑够一板（96个）才可以，即使不够一板，也要charge一板的钱，所
以老板就不愿意浪费了。让我自己鼓捣着测测。从自己测得control来看，仪器，药品
都应该没有问题。就是要看自己的样品的了。一定得争气，希望能够测出来，呵呵。
better
hotter |
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s********2
发帖数: 138 | 50 这个就是我得到的两个结果。sample就是自己的样品，另外一个是control。希望大家
能够帮帮我！谢谢了。
质粒和引物，作为control，产物和引物比例是200ng：3.2pmol（因为是双链质粒，所
以用量大）。我用的是纯化后的PCR产物和自己的引物，并且产物纯化后的A260/A280也
是1.7-2.0。产物
产物纯化试剂盒，利用了专门用于测序的那种纯化试剂盒。第二，我尝试着用了DNA浓
度梯度。但是出来的结果都是一样的。只是在最前面有几个峰。我真是不知道到底是哪
里出问题了。希望大家能够帮我分析一下。 |
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