d******8
发帖数: 1972 | 1 刚刚拿到了表达质粒的序列结果，发现起始密码ATG 变成了ATC，而且这个起始密码是
引物的一部分，其他所有序列都完全符合。觉得这个测序结果很诡异，基因是用高保真
的PFU扩增的，里面基因无一变异，所以怀疑是引物合成的问题，仔细查看了OPRON的单
子，也没有错。
正好这个起始密码是NCO I 的酶切点，酶切也能线性化，现在我有个疑问，酶切的识别
序列CCATGG（测序是CCATCG)是应该完全符合才能切吧？那测序结果又怎么解释？ |
r***e
发帖数: 2539 | 2 看看测序的chrome图，有没有G的信号。
【在 d******8 的大作中提到】
: 刚刚拿到了表达质粒的序列结果，发现起始密码ATG 变成了ATC，而且这个起始密码是
: 引物的一部分，其他所有序列都完全符合。觉得这个测序结果很诡异，基因是用高保真
: 的PFU扩增的，里面基因无一变异，所以怀疑是引物合成的问题，仔细查看了OPRON的单
: 子，也没有错。
: 正好这个起始密码是NCO I 的酶切点，酶切也能线性化，现在我有个疑问，酶切的识别
: 序列CCATGG（测序是CCATCG)是应该完全符合才能切吧？那测序结果又怎么解释？
|
d******8
发帖数: 1972 | 3 看了，C很明显，没有G
【在 r***e 的大作中提到】
: 看看测序的chrome图，有没有G的信号。
|
j****x
发帖数: 1704 | 4 这个位点在测序结果中的什么位置？不是在首尾两端吧？
【在 d******8 的大作中提到】
: 看了，C很明显，没有G
|
d******8
发帖数: 1972 | 5 谢谢，不是两端，是中间。刚才又看了NCO I酶切结果，非常明显线性化。 准备正向重
测，再加反向引物
【在 j****x 的大作中提到】
: 这个位点在测序结果中的什么位置？不是在首尾两端吧？
|
j****x
发帖数: 1704 | 6 呵呵，合成引物时出错酶切位点发生突变，PCR时又出错在序列中引入了另一个NcoI位
点。。。
你可以去买彩票先
【在 d******8 的大作中提到】
: 谢谢，不是两端，是中间。刚才又看了NCO I酶切结果，非常明显线性化。 准备正向重
: 测，再加反向引物
|
d******8
发帖数: 1972 | 7 呵呵。看来的去买彩票了，这手气也太背了。
【在 j****x 的大作中提到】
: 呵呵，合成引物时出错酶切位点发生突变，PCR时又出错在序列中引入了另一个NcoI位
: 点。。。
: 你可以去买彩票先
|
