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h******y
发帖数: 351 | 2 用TALEN和ZFN的话off target的可能性也是有的。TALEN单侧靶位点一般设计16-18个碱
基，但是由于任何一个TALEN domain对相邻TALEN domain与靶碱基的结合是有影响的，
所以TALEN是可能结合到imperfect match的位点上去的。
由于TALEN的设计要在蛋白质水平进行，可以想象合成4^16种TALEN蛋白，从而对TALEN与
靶位点之间的特异性结合进行完全充分的研究是不可能的。所以实际上还没有文章像CR
ISPER那样对TALEN靶位点的每个碱基的重要性进行过系统的研究。相反，CRISPER只需要
合成oligo，单个碱基的突变很容易实现，所以能发现前面12-14个碱基最重要。但是这
并不等于说CRISPER只需要12-14个碱基，只是其余碱基的重要性相对较低而已。 |
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p*****m
发帖数: 7030 | 3 那就变成彻底跟风了 呵呵 我要做的时候毕竟talen还没有in vivo验证过。
不过我确实还要搞一些talen的升级版 |
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s*****g
发帖数: 87 | 4 TALENs function in pairs，所以总的识别长度要乘以2，非常的长，即使有的RVD特异
性不够高，但也基本上不可能有off-target effect
TALEN与
CR
需要 |
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g*********5
发帖数: 2533 | 6 想用talen技术deletion一个基因内含子的一段序列，50-100bp,
是不是要用两对talen质粒？如何设计？online的网站好像都是对外显子的？
我市菜鸟，请问addgene那个kit比较好？
如果找公司做，那家好些？费用呢？有人有经验吗?谢谢 |
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m*********D
发帖数: 1727 | 7 简单地说，就是ZFN和 TALEN利用蛋白质上AA和DNA的Nt的相互作用来识别DNA的序列,一
般识别的长度在9-18bp。它们往往是两个domain--一个用于DNA序列的识别，一个是切
割双链DNA。
CRISPR/Cas是一个蛋白-RNA complex.RNA用配对来识别特定的DNA序列，蛋白用来切割
双链DNA。识别的长度在20Nt。
切割完后，产生double strand break(DBS)。修复都靠细胞里面自己的系统。在有修复
模板（可以人工提供）的情况下，找模板来，你要提供就可以按你的设计引入mutation
等等；没有模板，细胞就自己连接两头，顺便会插入/删掉几个bp（indel)，这就导致
reading-fram-shift,基因失活。
CRISPR就目前来看，操作容易，识别的特异性高（长度大）。估计会取代前两个。
你可以详细读这篇：ZFN, TALEN, and CRISPR/Cas-based methods for genome
engineering
http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S... 阅读全帖 |
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p*****m
发帖数: 7030 | 8 TALEN还是很不错的 我本来要做个proof of principle的 想抢个小paper，结果还没开
做就被screwed up了。其中有一片文章一共就一个实验，可能都用不了一个月 |
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z*t
发帖数: 863 | 9 上次记得板上有讨论talen的时候提到了抑制NHEJ，后来我在问一个搞yeast HR的人时
，他不建议抑制NHEJ，因为这是对细胞生存必须的，抑制后可能会sth wired happen。
大家有什么看法？ |
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b*******2
发帖数: 52 | 10 can anyone explain how to use talen to knockout a gene? |
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L*****t
发帖数: 56 | 11 想要研究某个蛋白的功能，HepG2里有这个蛋白完整的代谢通路但是这个蛋白本身也有
表达。现在想敲除本底表达后用Flp-FRT引入突变体。只是单纯的敲除，TALEN和CRISPR
哪一个更合适？ |
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s*****g
发帖数: 87 | 12 用TALEN吧，敲除单个基因的话CRISPR没有优势，而且还可能有off-target |
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s*****g
发帖数: 87 | 14 不太可能，CRISPR的特异识别序列只有14bp，很容易target到其他genomic region
TALEN的特异识别序列有30-60bp,远远高于CRISPR |
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s********x
发帖数: 472 | 15 我个人倾向于crispr ， 速度比talen快很多 ， 不用合成那些dna repeats。
说到突变，细胞培养的突变恐怕更多，而且也没有那么巧就影响实验。
我做遗传，用enu ems 化学诱变 背景突变不知道多少，还不是一样分析。 |
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h******y
发帖数: 351 | 16 理论上当然是这样，但是两个TALEN可以形成三种二聚体（AA,AB,BB)，在极端条件下，
一端位点强结合，另一端弱结合也能造成Off-Target的剪切。 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 17 Mark again and thx.
--from FDU Alumni
发信人: giantbird05 (大鸟), 信区: Biology
标 题: Re: 想在HepG2细胞系里敲除一个基因，用TALEN还是CRISPR容易？
发信站: BBS 未名空间站 (Sun May 26 01:39:25 2013, 美东)
mark;求科普 |
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g*********5
发帖数: 2533 | 18 talen质粒addgene上有好几个实验室提供，哪家的质粒好些？谢谢 |
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a****l
发帖数: 125 | 19 请问有人用TALEN 在细胞里做一个gene 的mutation (不是敲除）吗？有没有文章可以
科普一下。
多谢。 |
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m*p
发帖数: 226 | 20 有商业化的用CRISPR 或者 TALEN 来做knockin 吗？请给个链接或电话。 谢谢！ |
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s******y
发帖数: 28562 | 21 楼主说的是用那种做老鼠KO 的方法来做细胞，对，就是用那种１万多bp 长的质粒来做
，不是指CRISPR或者TALEN
arm |
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s******r
发帖数: 1245 | 22 传统做法的筛出来的基本都是random的integration，跟药量没关系，光用暴力筛选是
做不出来的
crispr和talen的发展对做editing的作用非常大，原来不能做的基本现在都能做了 |
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A****A
发帖数: 16 | 23 实际上，目前大部分证据表明TALEN的off target效应要小于ZFN. TALEN现在的主要缺
点在于size太大，一个TALEN coding sequecne 至少要4kb, 而ZFN则只要1kb左右。而
且从目前以发表的和我们自己的数据来看，TALEN的剪切活性可能要低于ZFN。现在一些
实验室都在进一步优化TALEN的size以及活性，希望以后能有大幅度的提高。TALEN相对
于ZFN目前最大的优势是位点的选择范围更大。基本上每5-10bp就可以找到一个好的
TALEN位点。ZFN目前是200bp-500bp. 另外TALEN的出现打破了ZFN在genome
engineering领域的垄断地位。将大大降低reagent的价格。现在法国的Cellectis就提
供$5000TALEN的订制服务。Sigma的ZFN价格也会跟着降下来。 |
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g****0
发帖数: 425 | 24 Can I get the abstract as well?
How do you comment on this report?
Nucleic Acids Res. 2013 Mar 1;41(5):e63. doi: 10.1093/nar/gks1446. Epub 2012
Dec 28.
Differential integrity of TALE nuclease genes following adenoviral and
lentiviral vector gene transfer into human cells.
Holkers M, Maggio I, Liu J, Janssen JM, Miselli F, Mussolino C, Recchia A,
Cathomen T, Gonçalves MA.
Source
Department of Molecular Cell Biology, Leiden University Medical Center,
Eithovenweg 20, 2333 ZC Leiden, The Nether... 阅读全帖 |
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h******y
发帖数: 351 | 25 For the second question, the answer is Yes we can. There are several ways
to achieve this - Meganuclease such as ZFN or TALEN, or homologous rAAV
recombination.
Both ZFN and TALEN can make incisions on the chromosome DNA and then employ
non-homologous end-joining repair, which normally result in small deletion
in the endogenous loci to achieve knockout effect. But it is difficult to
knockin. For ZFN or TALEN, the biggest concern is off-target effect due to
the nature of these technologies.
rAA... 阅读全帖 |
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i***s
发帖数: 39120 | 26 韩春雨实验室所在的四层老楼新安装上智能门。
韩春雨论文中的关键实验环节。
韩春雨瘦了，一位接近他的人说，最近韩春雨经常做实验到凌晨两三点钟。
他的实验室在河北科技大学一座四层老楼里，红色的外墙伏满了爬墙虎，韩春雨在这一待就是10年。今年5月2日，一篇关于新基因编辑技术NgAgo的论文在国际顶级期刊《自然·生物技术》（Nature Biotechnology）在线发表（后在该刊第34册7月号纸质版发表），作者是河北科技大学副教授韩春雨领衔的课题组。发表后，不仅他个人，连他所在的实验室，都获得了前所未有的关注。为了安全，学校不得不给实验楼安装上刷卡入内的智能门，还布了摄像头。
韩春雨有两间研究室在三楼走廊的尽头。在接待过一波又一波记者，甚至有长江学者来访的房间里，一张白色纸片嵌在插座缝里，上面写着“Arrival of the Argonautes 1.0T and 2.0 Smart! （Ago1.0T和2.0Smart版本的到来！）”，后缀为两个笑脸。实验室在等NgAgo优化版2.0尽快问世。
但NgAgo1.0仍然摇摇欲坠。由于多个实验室无法重复实验，被认为可以超越时兴的CRISPR... 阅读全帖 |
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j******i
发帖数: 939 | 27 TALEN之前的ZFN已经可以做到定点修饰了 差不多有十年了吧 但是 没火起来 因为zfn
巨难设计 一个repeat识别三个bases 但是 对应性很差 成功率很低 普通实验室根本耗
不起时间 sigma虽有卖 但是一对一万人刀吧 买不起 买了也不是百分百能用 talen才
出现几年 但是因为容易设计 一个repeat识别一个base 对应性很好 自己addgene买个
kit就能鼓捣了 一个星期就能拿到一对有效的talen 当然 那是得有相当经验的人
crispr的文章去年才出来了 敏感的人去年就意识到这个东西厉害了 现在 也不算晚 拿
来放到自己的project里 应该还能发好文章 crispr厉害的地方只要合成20个bases的
oligo就够了－当然为了方便克隆还是两头要加一些东西的 这太逆天了 比较明显的缺
点就是只能识别23个bases 更多缺点还有待发现 |
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T****u
发帖数: 424 | 28 不敢妄评。
我觉得科研应用方面，本质上和TALEN是一样的，最大的好处是比TALEN容易做。
尤其是做animal work,非常受益，基本3个月就可以拿到小鼠。另外做Rat也更
方便了。
你说的生产biosimilar,瓶颈不在这里。对大公司来说，不差钱，用TALEN，Crisp都
是一样的，反正都是从外面买。
也许干细胞治疗或者肿瘤免疫可能会有应用。
humanized mice更容易了。etc |
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l**********k
发帖数: 189 | 29 自从ZFN（后来的TALEN, CRISPR)开始应用以来，大家一直在找一种好的办法做基因敲
进。以大鼠为例，如果没有一系列的CRE工具鼠，大家就不会去做条件性基因敲除。但
除了小片段（或ODN)以外，大片段的基因敲进一直没有成功的报道。
这几年我自己也一直在想如何能够在这方面做点事情。做公司跟做科研不一样。科研实
验室里对效率不是很关心。比如可以通过注射几百上千的受精卵，最后只要有成功的就
算成功，然后发文章。而做公司更关心的是技术的稳定性，也就是除了高效率，还要重
复性好。所以我们就组建了一个研发团队，专门做大鼠的基因敲进研究。
经过一年多的摸索，最后终于找到了一种通过受精卵注射做基因敲进的方法。这个方法
的原理是通过利用ZFN/TALEN/或CRISPR先在染色体上切一刀，然后让带有同源臂的打靶
载体在切割位点进行同源重组。我们先在细胞系上进行摸索，最后得到了一个很有效的
基因组编辑系统。然后我们就看这个系统是不是可以在大鼠上用。因为信心比较大，我
们就直接进行双基因敲进实验了。分别是在大鼠CD4基因后面加上DsRed，在FoxP3后面
加上 IRES-DTR-2A-EGFP-p... 阅读全帖 |
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l**********k
发帖数: 189 | 30 稍微回答一下各位的问题。就象我讲的，公司做科研跟科研机构做科研不是一会事。从
很多回复来看，许多朋友可能知道ZFN/Talen/Crispr这些技术，也知道很多文章出来，
但实际上可能并不了解这些方法在基因敲进／条件性敲除方面的应用现状。
其实不管是ZFN, Talen还是Crispr，技术一出来大家就开始在想利用这些方法在没有ES
细胞的物种（比如大鼠）上做基因敲进和条件性基因敲除了，算算已经有至少5年了（
我记得2009年我去圣路易斯的Sigma公司的时候，他们就已经用ZFN做了很多敲除大鼠了
）。比如模式大鼠，为什么没有得到大范围的应用？ 实际上很多做神经研究的人都想
用基因敲进大鼠（比如加Reporter的），和条件性基因敲除大鼠。就是因为目前的所谓
ZFN／Talen/Crispr＋打靶载体注射受精卵的效率太低，没有哪家公司能够真正规模化
的提供稳定的技术服务。
我们用Jaenish文章里的方法也做不出来，但我听说他们有非常好的显微注射高手，所
以我们怀疑可能是我们公司的注射手艺还不够好。但不管好不好，总要把这个项目做起
来呀。所以我们一直在研发新方法。而这种方法我们觉得效率... 阅读全帖 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 31 if by TALENs, ZFNs and >CRISPR/Cas
pls check below database at least three month one time:
>EENs (Engineered EndoNucleases) are artificial endonucleases designed to
target special DNA sequences. TALENs, ZFNs and >CRISPR/Cas systems are the
most frequently used EENs.
http://eendb.zfgenetics.org/index.php
EENdb is a database collecting reported TALENs, ZFNs and CRISPR/Cas systems
targeting organism. EENdb also provides a knowledge base of EEN engineering
and other utilities of EENs.
rabbit:
http:... 阅读全帖 |
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j******i
发帖数: 939 | 32 ZFN, TALEN, CRISPR我都在用。挑最喜欢的，还是ZFN，因为他小，很容易放到viral
vector里边。但是它贵啊，自己合成的话，成功率又不高。TALEN克隆费力了一点，不
过熟练的话，一周就能拿到了。CRISPR定oligo, 克隆，怎么也要一周了吧。TALEN的专
一性很好，CRISPR的潜在off-targets一搜能搜出一大堆，吓死人。
shRNA是RNA识别RNA, CRISPR是RNA识别DNA+cas9识别DNA, 所以你不能简单的说都是RNA
guide. Cas9没有gRNA就没有办法cut on target了。当然，不知道cas9本身有没有细
胞毒性。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 33 事情发展到这个地步，其实对张峰，多得娜和教堂都不利。因为如果最后大家都不用
Cas9了，就不会给这个技术单独发奖，那么发奖的时候就只会发给卡朋特一个人，另外
几人都没有份。就象前年发那个超微成像的时候，如果是单独发PALM, 就没有办法绕过
晓薇的STORM，结果人家一下子拉来另外两个技术一起发，每个技术只发一个人，所以
就理直气壮的把晓薇踢出去了。如果这个事情也是出现这个思路的话，那么如上面有人
指出的那样，四个技术（ZFN,TALEN,Cas9,NgAgo) 只能发三个。这样的话很可能牺牲的
是TALEN。因为TALEN 技术生不逢时，既不是最早的，也不是最好用的，对生物技术的
进展几乎没有特别显著的贡献。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 34 嗯，你和zxt说的有一定道理，NaAgo的确不适合用来做筛选，而且不像Cas9／gRNA可进
可退既然用RNP也能用病毒。不过你说的那个转干细胞效率低的问题，难道不能直接用
基因枪（金颗粒裹上核酸和蛋白）来暴力转么？因为其实考虑到将来的医疗前景，对于
转干细胞，才是最需要用瞬转的场合。从原理角度上来说，NaAgo适合瞬转，而且适合
针对特定部位进行改造，不是指简单的切除，而是指Knock-In，因为筛选的标记放在
Knock-In片段上即可。NaAgo因为不需要PAM序列，而且脱靶率低，用来做 Knock-In最
合适。
对于你说的小片段DNA被捕捉，我猜你的意思是说那个小片段不小心贴错在什么地方然
后被某个不长眼的聚合酶当成primer 来用了？这个取决于哺乳动物的系统如何处理5'-
phosphate, 因为哺乳动物内部是用的３'-phosphate。那么上游的聚合酶合成到那个被
当成primer的gDNA那里的时候，会出现5', 3'段都有磷酸基的情况。系统如何处理这个
是一个有趣的问题。但是我想应该以前就有人研究过这种情况了。
对于你说的医学前景，我不同意你说的cas9/cpf... 阅读全帖 |
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l***y
发帖数: 638 | 35 你lab现在有哪个系统，没有现成talen的还是先用crispr试试看，毕竟简单多了，不行
的话再换好在donor通用的，从头养一套talen系统太麻烦了，花在上面的时间说不定用
crispr克隆都出来了。
off-target谁都说不清楚，其实你要的knockin出来了没人关心怎么来的，反正
reviewer从来不问
听得我很犹豫。本来我们想用CRISPR 做的，但是听大家这么一说，看来我们还是用
talen做算了。因为反正我们要做的是定点突变，所以off-target 对于我们来讲不是特
别大的问题，因为切错的地方又正好给重组上去的概率应该很低吧？而且反正我们要加
筛选标记的，一开始切的效率高不高并不是一个特别大的考虑。 |
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t**m
发帖数: 158 | 36 13位科学家实名呼吁对韩春雨启动调查：为了中国学界的名声
澎湃新闻记者 王盈颖 康宁 王灿 虞涵棋
2016-10-10 23:17 来自 能见度
这是一场和时间的赛跑。这场赛跑赌上的，是中国学术界在国际上的名声。
一切源于2016年5月2日，河北科技大学副教授韩春雨课题组在国际顶级期刊《自然-生
物技术》上发表了NgAgo基因编辑技术的论文。刚发表时，NgAgo被认为是新一代基因编
辑工具，可媲美此前有“基因魔剪”美称的CRISPR技术，被国内部分媒体誉为“诺奖级
”学术成果。 然而，之后的故事急转直下，全球数百家实验室，历时5个月的时间，没
有一家宣布能重复成功。质疑声越来越大，韩春雨不作正面回应，却收获接连的荣誉：
河北科协副主席、美丽河北最美教师、100万元国家自然科学基金……受惠于NgAgo技术
，河北科大获得了河北发改委2.24亿元的财政拨款，用于建设河北科技大学基因编辑技
术研究中心。
“是时候了，”北京大学生命科学学院教授魏文胜对澎湃新闻（www.thepaper.com）、
中国青年报表示，科学家有必要站出来表达看法。“处理不好的话，会严重影响中国科
学家的声誉。”魏... 阅读全帖 |
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e*******6
发帖数: 72 | 38 北京安必奇生物科技有限公司是一家新兴的生物产品研发服务的公司，成立于2005年，
总部Creative Dynamics 位于美国纽约州，是一家创新型企业。公司依托深厚的国际资
源背景、经验丰富的留美科研人员致力于生物产品和化学产品的研发服务，在北京、成
都、西安、兰州均设立有子公司，并继续在全国各地（如天津、武汉等城市）兴建子公
司，最终做到公司布局全国化。公司坚持以美国总公司为主导，子公司专业经营的联合
运营体系作为公司高效运营的组织基础，经过几年的不懈努力，公司已初具规模，目前
已为300多家国际领先的制药公司和科研机构提供产品和服务，客户遍布欧美、日本、
新加坡等各个国家，我们奋斗的目标是创立自己的企业品牌，成为全球知名药企。
在这里，您能用您所长，也能补您所短；
在这里，您能赢得现在，也能成就未来。
无论您初出茅庐，还是行家里手，只要您出类拔萃，这里有无数精英共成长；
无论您远渡重洋，还是心系家乡，只要您志存高远，这里有广阔天地任翱翔！
员工福利待遇：
1、享受公司各项福利补贴；
2、享受五险一金；
3、享受年假；
4、员工活动、员工聚餐
5、员工体检
6、定期组织海外实习培... 阅读全帖 |
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e*******6
发帖数: 72 | 39 北京安必奇生物科技有限公司是一家新兴的生物产品研发服务的公司，成立于2005年，
总部Creative Dynamics 位于美国纽约州，是一家创新型企业。公司依托深厚的国际资
源背景、经验丰富的留美科研人员致力于生物产品和化学产品的研发服务，在北京、成
都、西安、兰州均设立有子公司，并继续在全国各地（如天津、武汉等城市）兴建子公
司，最终做到公司布局全国化。公司坚持以美国总公司为主导，子公司专业经营的联合
运营体系作为公司高效运营的组织基础，经过几年的不懈努力，公司已初具规模，目前
已为300多家国际领先的制药公司和科研机构提供产品和服务，客户遍布欧美、日本、
新加坡等各个国家，我们奋斗的目标是创立自己的企业品牌，成为全球知名药企。
在这里，您能用您所长，也能补您所短；
在这里，您能赢得现在，也能成就未来。
无论您初出茅庐，还是行家里手，只要您出类拔萃，这里有无数精英共成长；
无论您远渡重洋，还是心系家乡，只要您志存高远，这里有广阔天地任翱翔！
员工福利待遇：
1、享受公司各项福利补贴；
2、享受五险一金；
3、享受年假；
4、员工活动、员工聚餐
5、员工体检
6、定期组织海外实习培... 阅读全帖 |
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D*****r
发帖数: 1239 | 40 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: longwoodwalk (长木行走), 信区: Biology
标 题: 讲讲我的生物创业过程
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Apr 8 09:21:11 2013, 美东)
我因为最近一直在中国，所以来这里很少了。这次回美国来再到这个版，读帖子觉
得非常亲切，不管是积极的还是消极的，都还是那样熟悉。一时心血来潮就想写点自己
的经历，希望对学生物的朋友有点帮助，或者至少知道还有别的路可以试试。没想到会
有这么多的网友读了，并得到了这么多的祝福与鼓励。非常感谢大家。尤其是好多朋友
还给了非常具体的建议，包括知识产权建议（这些我们已经意识到并跟一个知识产权律
师事务所签订了服务协议）、公司运作方法建议、未来公司应该发展的方向等等。这些
都让我受益匪浅。现在不是我的帖子给大家鼓励了，而是我从大家的回复中获得了很多
的灵感，这对我后面把公司做好非常有益处。
本来在这里是写着玩儿的，以我以前的经验来看，读者应该不过几百人或最多1、2
千人。现在看到这么多人来读，并已经有人把这个帖子转到了国内微博上，我还真有... 阅读全帖 |
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p*****m
发帖数: 7030 | 41 ZFN+TALEN做KO还是可以的 不过就像Morphin说的，光KO感觉并没啥太大意思了。 要说
fish mutants也大把大把的了 现在缺的并不是一个简单的KO工具感觉。有KI和cKO也许
能好一点
TALEN本来我想在鱼里做一下来着 就当练手 结果还没谈好合作就被发掉了(上周scienc
e, barbara Meyer在线虫里做了) 我就没兴趣在fish里再proof of principle一把了。
。而且也听说有别的fish lab做 |
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n********k
发帖数: 2818 | 42 其实随着ZFIN和TALEN的出现，看不到基因治疗的未来的潜能那绝对是短视，最终成不
成，成到什么程度，没人敢断言，但是这种时候还在犹豫进不进入，如果是兴趣等原因
那没得说，如果是上面说的，那真的是太。。。当然我也不是鼓励大家蜂拥而上，现在
进入的人其实不少了，竞争可能会很大，而且ZFIN和TALEN的潜能有多大，什么时候可
以实现，什么样的途径DELIVER等等仍然存在太多的不确定，也不是任何人任何实验室
短时间内可以做到， 就像RNAi一样。但是，懂工具，又懂病的有能建立动物模型，又
有临床资源的肯定
有优势，所以需要很好的整合资源，中国的很多方面提供更大的可能和机会，我绝不是
鼓吹大家胡搞（看一看我对干细胞治疗的态度就应该知道这点哈）。好像不应该在这给
自己号召竞争对手哈。。。
一个 |
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l*******i
发帖数: 153 | 43 现在基因治疗的第一问题都存在争议：安全性第一还是有效性第一？
参加过几次欧洲基因治疗的会议，很多人focus有效性上，但是最近的几个clinical
trial都是死在安全性上。
德国的WAS trial，10个孩子中现在4个都有大问题。几年前的CGD trial，两例病人两
年后都出现问题。
这些主要与目前用的病毒载体有关系，一是病毒载体的bcakbone本身有强的promoter/
enhancer的作用，而且病毒载体有偏向于插入TSS附近，一旦整合进基因组中，就很可
能影响neighboring gene的表达，这也是为啥造成oncogene激活的很重要一个原因。尽
管现在开发了第三代病毒载体（SIN）,但是这个效应还是存在。
第二，random insertion的问题。现在的技术方法，并不能保证病毒载体的单拷贝或两
拷贝插入基因组中，在造血干细胞上，甚至连确切的拷贝数都难于计算，只能用平均拷
贝数平评价。这样，在动物身上安全，translated 到人身上，整合就不一定就是相似
的模式；第一次试验和第二次试验 insertion profile也不一样。结果，有点像撞运气。
... 阅读全帖 |
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n********k
发帖数: 2818 | 44 其实随着ZFIN和TALEN的出现，看不到基因治疗的未来的潜能那绝对是短视，最终成不
成，成到什么程度，没人敢断言，但是这种时候还在犹豫进不进入，如果是兴趣等原因
那没得说，如果是上面说的，那真的是太。。。当然我也不是鼓励大家蜂拥而上，现在
进入的人其实不少了，竞争可能会很大，而且ZFIN和TALEN的潜能有多大，什么时候可
以实现，什么样的途径DELIVER等等仍然存在太多的不确定，也不是任何人任何实验室
短时间内可以做到， 就像RNAi一样。但是，懂工具，又懂病的有能建立动物模型，又
有临床资源的肯定
有优势，所以需要很好的整合资源，中国的很多方面提供更大的可能和机会，我绝不是
鼓吹大家胡搞（看一看我对干细胞治疗的态度就应该知道这点哈）。好像不应该在这给
自己号召竞争对手哈。。。
一个 |
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l*******i
发帖数: 153 | 45 现在基因治疗的第一问题都存在争议：安全性第一还是有效性第一？
参加过几次欧洲基因治疗的会议，很多人focus有效性上，但是最近的几个clinical
trial都是死在安全性上。
德国的WAS trial，10个孩子中现在4个都有大问题。几年前的CGD trial，两例病人两
年后都出现问题。
这些主要与目前用的病毒载体有关系，一是病毒载体的bcakbone本身有强的promoter/
enhancer的作用，而且病毒载体有偏向于插入TSS附近，一旦整合进基因组中，就很可
能影响neighboring gene的表达，这也是为啥造成oncogene激活的很重要一个原因。尽
管现在开发了第三代病毒载体（SIN）,但是这个效应还是存在。
第二，random insertion的问题。现在的技术方法，并不能保证病毒载体的单拷贝或两
拷贝插入基因组中，在造血干细胞上，甚至连确切的拷贝数都难于计算，只能用平均拷
贝数平评价。这样，在动物身上安全，translated 到人身上，整合就不一定就是相似
的模式；第一次试验和第二次试验 insertion profile也不一样。结果，有点像撞运气。
... 阅读全帖 |
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l*********1
发帖数: 351 | 46 外行小白请教下：
RNA-programmed genome editing in human cells
RNA-Guided Human Genome Engineering via Cas9
Multiplex Genome Engineering Using CRISPR/Cas Systems
“It’s too early to declare total victory” over TALENs and zinc-fingers,
Church said, “but it looks promising.”
是不是说TALEN engineering的坑就不用跳了啊？多谢指教。 |
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A****A
发帖数: 16 | 47 物种不同难度也不同。TALEN自己做不贵。
可以参考最近的Zebrafish的文章
Nature Methods | Brief Communication
TALEN-mediated precise genome modification by homologous recombination in
zebrafish
Nature Methods
(2013)
doi:10.1038/nmeth.2374 |
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A****A
发帖数: 16 | 48 物种不同难度也不同。TALEN自己做不贵。
可以参考最近的Zebrafish的文章
Nature Methods | Brief Communication
TALEN-mediated precise genome modification by homologous recombination in
zebrafish
Nature Methods
(2013)
doi:10.1038/nmeth.2374 |
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j******i
发帖数: 939 | 49 Sangamo抱着zfn的专利，客观上促使了其他人寻找更容易更便宜的基因编辑方法。
TALEN出现，还没来得及享受欢呼，就突然又杀出来个crispr, 风头都被抢走了。公平
发诺奖的话，zfn, talen, crispr，应该一起发。但如果只发CRISPR也并不太意外，诺
奖失误的次数也不少。 |
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j******i
发帖数: 939 | 50 基因编辑的诺奖可能性比较大的情况是 1.ZFN,TALEN,Cas9各找一个发（没有NgAgo,
cpf1,以及以后将发现的各种RNA, DNA引导的细菌蛋白的事－因为它们都可算做Cas9的
延伸）2. 基因编辑共发两个诺奖－ZFN, TALEN加上更少见的Meganuclease各找一个发
；然后Cas9系列再发一个奖（卡彭特，多纳，张峰均分)。NgAgo得奖的可能性不大，因
为一是可以算作CRISPR/Cas9的延伸，二是gDNA不大适合病毒载体装载，大大限制的它
的用途，应用范围上比不过CRISPR/Cas9。 |
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