i******n
发帖数: 538 | 1 Yes, that's amazing. From wiki:
"Although Dionisi provided the speaking voice, Farinelli's singing voice was
provided by a soprano, Ewa Malas-Godlewska and a countertenor, Derek Lee
Ragin, who were recorded separately then digitally merged to recreate the
sound of a castrato.
Its musical director was the French harpsichordist and conductor Christophe
Rousset. The musical recording was made at the concert hall, the Arsenal in
Metz, with the orchestra Les Talens Lyriques." |
|
e*******6
发帖数: 72 | 2 公司介绍
Creative Dynamics 是一家新兴的高科技公司，总部位于纽约，公司致力于生命科学及
生物医药行业相关的产品和服务。随着公司业务的不断扩大，现急需一批优秀的人才加
入我们的团队。
发布职位具体如下：
一、 诊断试剂及基因工程抗体项目经理
职责描述：
1、为海外客户提供优质高效的产品和服务(如试剂盒、抗体、胶体金等)的售前售后技
术支持工作，开发并维护目标客户。
2、立足欧美市场，从客户需求出发，带领团队收集市场信息，积极开拓发展新的业务。
3、组织诊断产品或者技术服务国际业务的市场活动，对市场敏感，以敏锐的市场意识
推动客户需求的调研和分析工作。
4、有效激发团队的工作积极性，增强团队凝聚力，达到公司业绩指标。
5、执行本部门日常管理工作，包括员工的指导、培训、绩效的评估等。
职位要求：
1、生物相关专业硕士及以上学历，拥有优秀的英语表达能力，有分子生物学、生物化
学等学科科研背景。
2、对抗体制备、胶体金试纸、ELISA试剂盒、化学发光试剂盒、或核酸诊断试剂盒以及
相关的原料有较深了解。
3、或熟练掌握噬菌体表面展示与基因工程抗体等实验技能，如噬菌体抗体库构... 阅读全帖 |
|
A****A
发帖数: 16 | 3 具我所知，几个fish labs正在联合用ZFN搞大规模的knock out resources。ZFN以及相
关技术最近会有比较大的进展。大家如果感兴趣，可以关注一下最近的TALEN技术。在
最近1-2年内，估计任何试验室都可以自己合成reagent去target任何基因。cost不会比
买限制性内切酶高太多。
model
transpare
rep
to
很多
serious的
大好 |
|
p*****m
发帖数: 7030 | 4 最近很有几篇TALEN的应用 看起来效率至少不比ZFN差啊 programability更是远胜 |
|
u**********d
发帖数: 573 | 5 talen一定要那么多的手指吗？手指多了off target会不会反而多啊？ |
|
|
e**e
发帖数: 614 | 7 这个东西效率到底有多高，问个几个做这个的实验室都是一脸苦相 |
|
p*****m
发帖数: 7030 | 8 看了。。
话说这本来是我做fish想要试的第一个project 还没开始试就听说有文章nature
biotech接收了 当时还想是不是那帮做fish ZFN的人干的 没想到看了文章 居然是我同
学。。。这世界真奇妙。。。 |
|
c********r
发帖数: 189 | 9 至少应该比zinc finger nuclease要好吧 |
|
j*****d
发帖数: 787 | 10 you can switch to try Chick or Pig :-) |
|
|
p*****m
发帖数: 7030 | 12 张锋做的难道不是tale-based？zfn我觉得很快就会被talen彻底淘汰了 |
|
e*******s
发帖数: 140 | 13 恩，问了个问题没想到学习了.
TALEN有试剂盒吗？里面都有些啥？ |
|
a*****x
发帖数: 901 | 14 更快的方法是用Talen或者ZFN knock-in GFP，我们做过不会影响ES分化的。还可以
knock-in在gene A的locus同是做knockout,这样连knockout老鼠都不用了。
GFP
gene |
|
a*****x
发帖数: 901 | 15 你有想法很不错，但是你的论据大多离事实太远。比如说你对蛋白质检测技术的认识还
停留在Western上，完全忽略了各种proteomics的手段包括Mass-spec，iTraq, Silac，
TR-FRET，Alphalisa等等。可以说最近生物学技术手段是爆炸性增长的，至少在
genetics（比如ZFN, Talen)和proteomics两个方面。
你说生物学对疾病毫无作用，更不用提癌症，糖尿病，高血压等疑难杂症。Glivec，
VEGFi之类难道不是生物学家发现的? 新兴的干细胞也在blindness和hearing loss取得
了很好的效果。医药界现在大约一半的药知道其作用的生物机制，其中大约95%是根据
生物医学文献得到的靶位点，5%是医药企业自己筛选得到的。另一方面，我还不知道任
何一个新药和生物完全无关。光是药安全性必过的有关就是hERG离子通道阻断性检测，
就是纯生理。
生物表面上也许不要很强的逻辑推理，是因为生物的逻辑太复杂，好像没有明确的推理
。事实上，逻辑性很重要，而且要发挥它的作用需要你积累足够的信息。我一般做实验
前都会做理想实验，假设得到各种结果分别会... 阅读全帖 |
|
|
a*****x
发帖数: 901 | 17 1.5 fold好像太小了。是用fibroblast吗？一般我们Affy都能得到几百上千个变化超过
2倍的。
还有一种方法是做KO human cells，比如用Talen. |
|
j******i
发帖数: 939 | 18 很多人对gene therapy谈虎色变 因为十年前的事故 其实就两起嘛 一起是美国的一个
男孩因为adenovirus 引起自身强烈的免疫反应 死掉了 这个叫做Anti virus immune
response
还有就是 欧洲retrovirus 治疗免疫缺陷症（气泡男孩？）大概十个里边3个病人引发
了白血病 因为retrovirus刚好插入到癌基因边上去了 这个叫做insertional
mutagenesis
这两个问题经过十来年的研究 不能说完全解决 但是可以说成就很大
比如说 insertional mutagenesis 现在都可以用 ZFN/TALEN 定点插入外援基因了 或
者直接修复突变的那个基因 |
|
j******i
发帖数: 939 | 19 很多人对gene therapy谈虎色变 因为十年前的事故 其实就两起嘛 一起是美国的一个
男孩因为adenovirus 引起自身强烈的免疫反应 死掉了 这个叫做Anti virus immune
response
还有就是 欧洲retrovirus 治疗免疫缺陷症（气泡男孩？）大概十个里边3个病人引发
了白血病 因为retrovirus刚好插入到癌基因边上去了 这个叫做insertional
mutagenesis
这两个问题经过十来年的研究 不能说完全解决 但是可以说成就很大
比如说 insertional mutagenesis 现在都可以用 ZFN/TALEN 定点插入外援基因了 或
者直接修复突变的那个基因 |
|
|
S*********s
发帖数: 304 | 21
可以。但很多实验室都是要老鼠，看表型
try TALEN |
|
C********4
发帖数: 308 | 22 用TALEN是可以
但是
用老鼠基因敲除的targeting construct不能用在普通细胞系吗 |
|
s********r
发帖数: 312 | 23 TALENs是最好的，如果转染效率还可以的话，homozygous的克隆不难拿到。AAV的话好
处是转染效率高，但是实验室自己做病毒拿不到那么高的titer，那个纯化的kit也不便
宜，跟公司送过来的比titer差远了。 |
|
u**********d
发帖数: 573 | 24 正如楼上们所说，要拿到-/-的细胞，可靠的方法就是两轮转染筛选，这还是一个费时
费力的活的。还没有用过talen系统。
ES细胞系在传代过程中会因为压力小逐渐含有一些genome的变异，包括染色体的
deletion，translocation和aneuploid非整倍体，而两轮的克隆筛选很可能会得到一个
不正常的ES系，光做核型分析还是不够的。
希望KO是ES表型变化的唯一原因，必须rescue实验。
很多KO可能对ES的维持是没太多影响的，起作用是在分化阶段，要用in vitro方法分析
就需要建立不同的分化体系。
用+/- 老鼠配对就反而显得简单了，得到的ICM基本都是没有大的genome缺陷的，-/-的
表型也很好观测了。 |
|
|
Z****o
发帖数: 999 | 26 这个我知道, Talen KO技术，2011年才正式出来，但是他肯定是在原始组里做过千老的
，否则不可能上手这么快。 |
|
Z****o
发帖数: 999 | 27 生物体的复杂程度远远超过普通物体天体等等，现在花这么多钱研究生命是值得的。
最近新发现的Talen技术就是以前没有人想到的自然界居然会存在这么一种两个氨基酸
对应一个核苷酸序列的配对密码方式，这个技术现在已经火得不得了，外面的人不知道
而已。
还有最近刚刚得诺贝尔奖的从小鼠的皮肤细胞再加四个转录因子就能还原成干细胞的技
术也是可以很快看到对疾病治疗有很大的用处。
厚积薄发，有时候需要耐心而已。TG现在也开始投那么多钱在生物上面，都是明白人才
这么做。
生物核心技术上如果落后今后可能会造成种族灭亡，这个真不是危言耸听。 |
|
J**a
发帖数: 215 | 28 那要jump到哪里比较好？展开讲讲。。。
optogenetics? TALEN? |
|
m*******a
发帖数: 29 | 29 最近TALEN不是一般的火，求专业或相关人士系统介绍一下。 |
|
s*****g
发帖数: 87 | 30 请参见最近的一篇review
TALENs: a widely applicable technology for targeted genome editing
Nat Rev Mol Cell Biol
2013 |
|
K**4
发帖数: 1015 | 31 Genome Editing: searching for Deaminase or DNA methylase or Tet1 in PubMed
The TALEN paper listed is about DNA nuclease, for cutting, not editing.
The authors seem to lack an good understanding on DNA modifications, hehe. |
|
s*****g
发帖数: 87 | 32 Reprod Fertil Dev. 2012 Dec;25(1):312. doi: 10.1071/RDv25n1Ab328.
328 versatile transcription activator-like effector nuclease (talen)-
mediated engineering of ossabaw miniature Swine.
Carlson DF, Tan W, Fahrenkrug SC.
----------------------------------------------------------
Reprod Fertil Dev. 2012 Dec;25(1):316. doi: 10.1071/RDv25n1Ab337.
337 nonmeiotic introgression of quantitative trait nucleotides and
correction of congenital mutations in livestock with transcription activator
-like effect... 阅读全帖 |
|
C********4
发帖数: 308 | 33 想敲除看抑制／上调哪些基因，不是应该看mRNA的变化吗？应该做RNA seq？
ChIP seq是看该蛋白的直接target基因，也就是说该蛋白在chromatin上，绑在哪些基
因上。
如果你RNAseq和ChIP seq都做，就可以知道该蛋白直接抑制或者上调某些基因了；如果
只做RNA seq，可能是secondary effect。
做ChIP seq最关键的是有好的抗体，好的knock down用来control。
如果你有ChIP级别的抗体，和没有off target的shRNA，那你自己要做的就是养细胞，
敲低，做ChIP，得到的DNA送给公司建库测序。
不知道哪里买敲除基因的细胞。敲低的话就shRNA咯。敲除的话，得看有没有人做过，
人家给不给／卖不卖吧。或者TALEN自己敲除？这些都很花时间吧。
如果有很好得抗体，光shRNA敲除，养细胞到ChIP，两周足以。自己没做过，还是别自
己建库了，得到的DNA直接给公司，让他们做，分析好。
后面就看公司多快了。华大BGI据说把图画好，文章写好，给你最后结果。
价格不知道。
一般实验室有体系的话，一般是自己做到建库那一步；自己有... 阅读全帖 |
|
C********4
发帖数: 308 | 34 一个条件性细胞剔除模式小鼠的诞生 (2013-02-22 18:10:22)转载▼
标签： talen 创业 大鼠基因敲除 基因敲除 杂谈 分类： 个人随笔
对于基因敲除（gene knockout）小鼠大家并不陌生，比如我们想要研究一个基因
在体内的功能，我们就可以把这个基因从小鼠体内敲除掉。而有的时候我们除了关心一
个基因的功能外，还想知道表达这个基因的细胞在体内是干嘛的。比如，我们想知道B
细胞是干什么的，胰岛细胞是干什么的？我们可以从小鼠体内把这些细胞清除掉（也叫
细胞剔除，cell depletion），一看不能产生新抗体了，或是胰岛素没了，血糖升高器
官衰竭了，我们就可以恍然大悟说：“你看，胰岛细胞是产生胰岛素的，B细胞是产生
抗体的”。然后就可以发文章到CNS（Cell, Nature, Science）了。当然这些都被别人
发现过了，是我们没有赶上好时代呀。
那怎样才能在体内把一群细胞清除掉呢？方法可能很多，但也真不多。这里我讲一
个非常简单的方法，就是白喉毒素介导的细胞剔除。白喉毒素（Diphtheria toxin, 简
称DT）大... 阅读全帖 |
|
A****A
发帖数: 16 | 35 给你篇review看看：
Nature Reviews Molecular Cell Biology 14, 49-55 (January 2013) | doi:10.1038
/nrm3486
TALENs: a widely applicable technology for targeted genome editing
J. Keith Joung1 & Jeffry D. Sander1 |
|
z*t
发帖数: 863 | 36 问个问题哈，talen切割后不是通过引入的片段同源重组来edit genome么？
楼主若是相加个gfp在同时转针对特定序列的taln + 两侧用同源片段flank的GFP
plasimid就可以了？ |
|
f**u
发帖数: 346 | 37 我记得在哺乳细胞里面已经做到用GFP去tag内源蛋白了，
忘了是ZFN还是TALEN了，不过应该差不太多吧。
其他物种好像还没看到。 |
|
A****A
发帖数: 16 | 38 给你篇review看看：
Nature Reviews Molecular Cell Biology 14, 49-55 (January 2013) | doi:10.1038
/nrm3486
TALENs: a widely applicable technology for targeted genome editing
J. Keith Joung1 & Jeffry D. Sander1 |
|
z*t
发帖数: 863 | 39 问个问题哈，talen切割后不是通过引入的片段同源重组来edit genome么？
楼主若是相加个gfp在同时转针对特定序列的taln + 两侧用同源片段flank的GFP
plasimid就可以了？ |
|
f**u
发帖数: 346 | 40 我记得在哺乳细胞里面已经做到用GFP去tag内源蛋白了，
忘了是ZFN还是TALEN了，不过应该差不太多吧。
其他物种好像还没看到。 |
|
s********8
发帖数: 619 | 41 懂行的来说说这个Crispr相比Talen来说的优点是? |
|
b******k
发帖数: 2321 | 42 crispr确实神。要是再有几篇各种动物里PoC的paper出来，TALEN可能也要像ZFN一样进
博物馆了，呵呵
zfn |
|
o**4
发帖数: 35028 | 43 没太明白，crispr比talen好在哪儿呢？
操作简单一些吗？ |
|
b******k
发帖数: 2321 | 44 talen的cloning还是稍微麻烦了点，因为同源重复序列特别的多。目前有几种不同的克
隆路径，大家都能用但是还是花时间比较长，印象里要几周？。crispr基本就是几天的
工作量 |
|
b******k
发帖数: 2321 | 45 这个有paper么？我记得ZFN有，TALEN和crispr还没有吧？
话说我曾经的一个想法是ZF/TALE后面接recombinase, transposase,或者别的啥酶替代
nuclease，这样也许可以提高KI的效率。最近1年没怎么跟这方面的工作了，不知道有
没有类似的办法出来 |
|
|
g*********5
发帖数: 2533 | 47 one more question, does Talen break all two allele genes? |
|
s********x
发帖数: 472 | 48 周围有人做TALEN，在fish里面同源重组效果好像还可以，但是会引入mutation，就是
说要做protein fusion的小心了。在果蝇里前一阵子听talk说HR效率非常低，比ZNF的
HR低很多，不知道什么机制。
总之现在最看好CRISPR。 |
|
z********n
发帖数: 13 | 49 你说的关于CNS关于给人打工的情况都是事实，但是我觉得问题在于是不是不发CNS不做
独立PI的就该被打上loser的标签，或是妄自菲薄。我不是大牛门徒，刚入行的时候待
的组要自己装枪头自己给细胞培养瓶泡酸高压，但是还是觉得在享受科研。后来不用花
时间在这些事情上就更开心。读到好文章就恨不得要拍案叫绝，像是当时学数学看到的
漂亮的证明。做实验哪怕自己合成个TALEN这种纯technique，也觉的妙趣横生，因为觉
得很巧妙。我的朋友里还有从北医三院的临技型研究生专门要求转到科研型后来出来念
PHD的，现在还是谈起做的科研就眉飞色舞。我想做科学是需要点理想主义和浪漫主义
的，真正的热情不会那么容易退去。 |
|
o*****m
发帖数: 981 | 50 差不多两年前设计了个生物信息学方法，构建了全基因组的ZFA结合位点的设计，已经
做完数据库，但迟迟未发表。期间被其他project中断。所以到了今天。。
于是在完成project后想重新回来吧ZFA这个做好以发个数据库paper，不料竟有新技术
出现，如CRISPR 和 TALEN。
本人对生物这块理解尚没那么深入。请大侠指点一下，继续做ZFA设计是否还有意义，
是否还能发个差不多的paper？
十分感谢。 |
|
