b********e
发帖数: 50 | 1 这是本版名ID微博上的一段话。这几年Talen和Cas9很火，想知道这个技术现在到什么
地步了？ 会不会最终完全取代胚胎干细胞方法呢？ 有没有牛人评一下？
“这两天真是太兴奋了。基于EGE系统的大片段基因敲进成功了，使基因敲进和条件性
基因敲除动物制备过程缩短到两三个月，成本也大大降低，使得模式动物能够走入几乎
所有实验室。同时，我们实现了在两个不同基因位点实现同时敲进，使得在动物体内研
究基因相互作用变得更容易。而且，可做物种更多了”。 |
y***i
发帖数: 11639 | 2 去他的微博看了一下，好像是他们公司自己发展出来的技术
“我们用Extreme Genome Editing (EGE)系统通过基因敲进的方式，分别跟ACTB（细胞
骨架）和LMNB1（核蛋白）加上GFP标签。可以看到其效率比CRISPR/Cas9高很多倍。而
且，通过各种检测，发现90％以上是同源重组，随机插入很少。现在我们正在做多基因
敲进，这对于研究细胞内蛋白相互作用非常有帮助。”
“这是在两个不同基因上分别敲进了DsRed和DTR-EGFP，并做成融合蛋白。这次敲进不
是用ODN, 而是比较大的DNA片段敲进。看来我们的EGE系统真的非常好用。是不是应该
发一篇文章。”
【在 b********e 的大作中提到】
: 这是本版名ID微博上的一段话。这几年Talen和Cas9很火，想知道这个技术现在到什么
: 地步了？ 会不会最终完全取代胚胎干细胞方法呢？ 有没有牛人评一下？
: “这两天真是太兴奋了。基于EGE系统的大片段基因敲进成功了，使基因敲进和条件性
: 基因敲除动物制备过程缩短到两三个月，成本也大大降低，使得模式动物能够走入几乎
: 所有实验室。同时，我们实现了在两个不同基因位点实现同时敲进，使得在动物体内研
: 究基因相互作用变得更容易。而且，可做物种更多了”。
|
w***a
发帖数: 4361 | 3 这个先申请专利吧，发了文章被别的公司抢注专利，回头不让你原创作者用了。。。
【在 y***i 的大作中提到】
: 去他的微博看了一下，好像是他们公司自己发展出来的技术
: “我们用Extreme Genome Editing (EGE)系统通过基因敲进的方式，分别跟ACTB（细胞
: 骨架）和LMNB1（核蛋白）加上GFP标签。可以看到其效率比CRISPR/Cas9高很多倍。而
: 且，通过各种检测，发现90％以上是同源重组，随机插入很少。现在我们正在做多基因
: 敲进，这对于研究细胞内蛋白相互作用非常有帮助。”
: “这是在两个不同基因上分别敲进了DsRed和DTR-EGFP，并做成融合蛋白。这次敲进不
: 是用ODN, 而是比较大的DNA片段敲进。看来我们的EGE系统真的非常好用。是不是应该
: 发一篇文章。”
|
j******i
发帖数: 939 | 4 什么原理，我原来以为是依赖非同源重组机制，不过看来还是靠同源重组。效率提高很
诱人啊。可以发个nature methods 或 nature biotech吧。 |
b********e
发帖数: 50 | 5 应该发个文章，怎么着对公司也是一个正面宣传吧。比如华大。
【在 j******i 的大作中提到】
: 什么原理，我原来以为是依赖非同源重组机制，不过看来还是靠同源重组。效率提高很
: 诱人啊。可以发个nature methods 或 nature biotech吧。
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r***z
发帖数: 19 | |
l**********k
发帖数: 189 | 7 自从ZFN（后来的TALEN, CRISPR)开始应用以来，大家一直在找一种好的办法做基因敲
进。以大鼠为例，如果没有一系列的CRE工具鼠，大家就不会去做条件性基因敲除。但
除了小片段（或ODN)以外，大片段的基因敲进一直没有成功的报道。
这几年我自己也一直在想如何能够在这方面做点事情。做公司跟做科研不一样。科研实
验室里对效率不是很关心。比如可以通过注射几百上千的受精卵，最后只要有成功的就
算成功，然后发文章。而做公司更关心的是技术的稳定性，也就是除了高效率，还要重
复性好。所以我们就组建了一个研发团队，专门做大鼠的基因敲进研究。
经过一年多的摸索，最后终于找到了一种通过受精卵注射做基因敲进的方法。这个方法
的原理是通过利用ZFN/TALEN/或CRISPR先在染色体上切一刀，然后让带有同源臂的打靶
载体在切割位点进行同源重组。我们先在细胞系上进行摸索，最后得到了一个很有效的
基因组编辑系统。然后我们就看这个系统是不是可以在大鼠上用。因为信心比较大，我
们就直接进行双基因敲进实验了。分别是在大鼠CD4基因后面加上DsRed，在FoxP3后面
加上 IRES-DTR-2A-EGFP-pA。每次注射之后移植受精卵80－100个，出生大鼠30－40只
。我们发现大概25－30％的pups成功，而且这其中的50％以上是双敲进。到现在可以看
得出，其实不管是做cre工具大鼠，还是做条件性敲除（比如做一个长打靶载体或分别
对应两个loxP位点的打靶载体），都会很容易了。不仅时间可以缩短到2、3个月，而且
因为没有抗性基因，也不需要去掉NeoR等步骤，以及担心嵌合体鼠germline
transmission。应该是一个很好的方法。我们也准备在今年将这个技术用到小鼠上。这
样做小鼠的速度会快很多，而且价格也会大大地下降。
不管是ZFN、TALEN、还是CRISPR，其脱靶的可能性是可以预测的。也需要对可能的脱靶
位点进行检测。当然也可以通过传代对潜在突变位点进行稀释。因为是通过打靶载体（
而不是ODN)同源重组来做的，所以可以通过southern blot来确定有没有随机插入。尤
其是在做条件性基因敲除的时候，不用担心如果用ODN可能会有随机插入而无法用
Southern blot检测。
现在的问题是，这个系统里面有几个关键成分，我们目前并不想透露。其实一旦透露大
家就会觉得非常简单。但如果发文章的话，或许就会要求我们透露这些？ 还是可以以
正在申请专利为由拒绝透露？
我想是不是可以发一个小文章，主要是讲大鼠Treg。因为CD4+ T 细胞是红色的，Treg
是红＋绿色的，而且因为这个FoxP3上有白喉毒素受体，可以将Treg从体内deplete掉。
这样因为重点放在了这个细胞群的功能研究上，所以可以对大鼠的制备过程不必着重提
? 至于Nature Biotech级别的文章，对于我们这样的公司，我觉得或许我们不应该很
看重？
【在 b********e 的大作中提到】
: 这是本版名ID微博上的一段话。这几年Talen和Cas9很火，想知道这个技术现在到什么
: 地步了？ 会不会最终完全取代胚胎干细胞方法呢？ 有没有牛人评一下？
: “这两天真是太兴奋了。基于EGE系统的大片段基因敲进成功了，使基因敲进和条件性
: 基因敲除动物制备过程缩短到两三个月，成本也大大降低，使得模式动物能够走入几乎
: 所有实验室。同时，我们实现了在两个不同基因位点实现同时敲进，使得在动物体内研
: 究基因相互作用变得更容易。而且，可做物种更多了”。
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j******i
发帖数: 939 | 8 你可以边申请专利边投的吧。
同源重组的效率在primary cell里边比cell line里边低不少。你们的这个技术细节我
不知道，看起来好像还是同源重组，但是利用了某种方法，使效率提高了很多。这个是
很令人兴奋的。我不是做老鼠的，但是ZFN, TALEN, CRISPR都在使用，一直苦于没有办
法提高同源重组的效率。
你们这个技术跟这遍cell应该类似吧？Cell. 2013 Sep 12;154(6):1370-9. doi: 10.
1016/j.cell.2013.08.022. Epub 2013 Aug 29. |
j******i
发帖数: 939 | 9 你可以边申请专利边投的吧。
同源重组的效率在primary cell里边比cell line里边低不少。你们的这个技术细节我
不知道，看起来好像还是同源重组，但是利用了某种方法，使效率提高了很多。这个是
很令人兴奋的。我不是做老鼠的，但是ZFN, TALEN, CRISPR都在使用，一直苦于没有办
法提高同源重组的效率。
你们这个技术跟这遍cell应该类似吧？Cell. 2013 Sep 12;154(6):1370-9. doi: 10.
1016/j.cell.2013.08.022. Epub 2013 Aug 29. |
l**********k
发帖数: 189 | 10 我们用的不是他们用的方法，而是开发了一个新方法。
【在 j******i 的大作中提到】
: 你可以边申请专利边投的吧。
: 同源重组的效率在primary cell里边比cell line里边低不少。你们的这个技术细节我
: 不知道，看起来好像还是同源重组，但是利用了某种方法，使效率提高了很多。这个是
: 很令人兴奋的。我不是做老鼠的，但是ZFN, TALEN, CRISPR都在使用，一直苦于没有办
: 法提高同源重组的效率。
: 你们这个技术跟这遍cell应该类似吧？Cell. 2013 Sep 12;154(6):1370-9. doi: 10.
: 1016/j.cell.2013.08.022. Epub 2013 Aug 29.
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T****u
发帖数: 424 | 11 你需要先申请专利，再发表paper。
另外，还得确定你做的改进能够被patent
如果你是在别人的patented technology上做了改进，你得先license。
最好咨询real patent lawyer
另外你的client用了EGE genenrated mice是否在文章中reveal the details about
generating mice/rat? otherwise they need a paper or patent to refer to.
【在 l**********k 的大作中提到】
: 自从ZFN（后来的TALEN, CRISPR)开始应用以来，大家一直在找一种好的办法做基因敲
: 进。以大鼠为例，如果没有一系列的CRE工具鼠，大家就不会去做条件性基因敲除。但
: 除了小片段（或ODN)以外，大片段的基因敲进一直没有成功的报道。
: 这几年我自己也一直在想如何能够在这方面做点事情。做公司跟做科研不一样。科研实
: 验室里对效率不是很关心。比如可以通过注射几百上千的受精卵，最后只要有成功的就
: 算成功，然后发文章。而做公司更关心的是技术的稳定性，也就是除了高效率，还要重
: 复性好。所以我们就组建了一个研发团队，专门做大鼠的基因敲进研究。
: 经过一年多的摸索，最后终于找到了一种通过受精卵注射做基因敲进的方法。这个方法
: 的原理是通过利用ZFN/TALEN/或CRISPR先在染色体上切一刀，然后让带有同源臂的打靶
: 载体在切割位点进行同源重组。我们先在细胞系上进行摸索，最后得到了一个很有效的
|
T****u
发帖数: 424 | 12 我非常理解你的难处。
也许就是简单的组分的改变。
类比于drug discovery industry
发现了某个OTC FDA approved drug可以治疗另外一种疾病。
要不要申请专利其实是很头疼的问题。
因为即使申请了，你也没有办法限制其他研究者，医生使用这个compound.
但if you do not publish with paper or patent, the validity of the mice or
the data produced with the mice/rat with be challenged by the scientific
community or the reviewer, which might finally affect your market and
potential clients.
Just my 2 cents
【在 l**********k 的大作中提到】
: 自从ZFN（后来的TALEN, CRISPR)开始应用以来，大家一直在找一种好的办法做基因敲
: 进。以大鼠为例，如果没有一系列的CRE工具鼠，大家就不会去做条件性基因敲除。但
: 除了小片段（或ODN)以外，大片段的基因敲进一直没有成功的报道。
: 这几年我自己也一直在想如何能够在这方面做点事情。做公司跟做科研不一样。科研实
: 验室里对效率不是很关心。比如可以通过注射几百上千的受精卵，最后只要有成功的就
: 算成功，然后发文章。而做公司更关心的是技术的稳定性，也就是除了高效率，还要重
: 复性好。所以我们就组建了一个研发团队，专门做大鼠的基因敲进研究。
: 经过一年多的摸索，最后终于找到了一种通过受精卵注射做基因敲进的方法。这个方法
: 的原理是通过利用ZFN/TALEN/或CRISPR先在染色体上切一刀，然后让带有同源臂的打靶
: 载体在切割位点进行同源重组。我们先在细胞系上进行摸索，最后得到了一个很有效的
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w***r
发帖数: 709 | 13 申请专利是王道，发文章对你公司有啥用？发方法类文章，技术细节是一定要公布的，
要不然不就成了商业广告。
【在 l**********k 的大作中提到】
: 自从ZFN（后来的TALEN, CRISPR)开始应用以来，大家一直在找一种好的办法做基因敲
: 进。以大鼠为例，如果没有一系列的CRE工具鼠，大家就不会去做条件性基因敲除。但
: 除了小片段（或ODN)以外，大片段的基因敲进一直没有成功的报道。
: 这几年我自己也一直在想如何能够在这方面做点事情。做公司跟做科研不一样。科研实
: 验室里对效率不是很关心。比如可以通过注射几百上千的受精卵，最后只要有成功的就
: 算成功，然后发文章。而做公司更关心的是技术的稳定性，也就是除了高效率，还要重
: 复性好。所以我们就组建了一个研发团队，专门做大鼠的基因敲进研究。
: 经过一年多的摸索，最后终于找到了一种通过受精卵注射做基因敲进的方法。这个方法
: 的原理是通过利用ZFN/TALEN/或CRISPR先在染色体上切一刀，然后让带有同源臂的打靶
: 载体在切割位点进行同源重组。我们先在细胞系上进行摸索，最后得到了一个很有效的
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w***r
发帖数: 709 | 14 就说用crispr做的，不就完事了吗，
其实直接注射卵核，即使没有crispr,同源重组率也是极高的
【在 T****u 的大作中提到】
: 你需要先申请专利，再发表paper。
: 另外，还得确定你做的改进能够被patent
: 如果你是在别人的patented technology上做了改进，你得先license。
: 最好咨询real patent lawyer
: 另外你的client用了EGE genenrated mice是否在文章中reveal the details about
: generating mice/rat? otherwise they need a paper or patent to refer to.
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b****r
发帖数: 17995 | 15 基因打靶和干细胞有毛关系啊，怎么能打靶就没干细胞了，应该是打靶容易了，干细胞
更容易上临床才对 |
T****u
发帖数: 424 | 16 。。。。currently Genome editing generates KO mice without going through ES
cell stage.
You are talking different things such as hES based therapy.
【在 b****r 的大作中提到】
: 基因打靶和干细胞有毛关系啊，怎么能打靶就没干细胞了，应该是打靶容易了，干细胞
: 更容易上临床才对
|
k*****o
发帖数: 148 | 17 你们的技术重组的效率比Jaenish lab的方法高大概多少？
【在 l**********k 的大作中提到】
: 自从ZFN（后来的TALEN, CRISPR)开始应用以来，大家一直在找一种好的办法做基因敲
: 进。以大鼠为例，如果没有一系列的CRE工具鼠，大家就不会去做条件性基因敲除。但
: 除了小片段（或ODN)以外，大片段的基因敲进一直没有成功的报道。
: 这几年我自己也一直在想如何能够在这方面做点事情。做公司跟做科研不一样。科研实
: 验室里对效率不是很关心。比如可以通过注射几百上千的受精卵，最后只要有成功的就
: 算成功，然后发文章。而做公司更关心的是技术的稳定性，也就是除了高效率，还要重
: 复性好。所以我们就组建了一个研发团队，专门做大鼠的基因敲进研究。
: 经过一年多的摸索，最后终于找到了一种通过受精卵注射做基因敲进的方法。这个方法
: 的原理是通过利用ZFN/TALEN/或CRISPR先在染色体上切一刀，然后让带有同源臂的打靶
: 载体在切割位点进行同源重组。我们先在细胞系上进行摸索，最后得到了一个很有效的
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j******i
发帖数: 939 | 18 请问你们在细胞系里边的同源重组效率是多少？用的是什么细胞？我们用ZFN, 在没有
使用药物的情况下，最多只能达到8%。 如果是primary细胞，效率就更低了。
【在 l**********k 的大作中提到】
: 自从ZFN（后来的TALEN, CRISPR)开始应用以来，大家一直在找一种好的办法做基因敲
: 进。以大鼠为例，如果没有一系列的CRE工具鼠，大家就不会去做条件性基因敲除。但
: 除了小片段（或ODN)以外，大片段的基因敲进一直没有成功的报道。
: 这几年我自己也一直在想如何能够在这方面做点事情。做公司跟做科研不一样。科研实
: 验室里对效率不是很关心。比如可以通过注射几百上千的受精卵，最后只要有成功的就
: 算成功，然后发文章。而做公司更关心的是技术的稳定性，也就是除了高效率，还要重
: 复性好。所以我们就组建了一个研发团队，专门做大鼠的基因敲进研究。
: 经过一年多的摸索，最后终于找到了一种通过受精卵注射做基因敲进的方法。这个方法
: 的原理是通过利用ZFN/TALEN/或CRISPR先在染色体上切一刀，然后让带有同源臂的打靶
: 载体在切割位点进行同源重组。我们先在细胞系上进行摸索，最后得到了一个很有效的
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n***y
发帖数: 114 | 19 联系党生，发Cell Research就可以了，不用公布细节的，就说patent pending。专利
要申请的，在这之前，你要保证公司内部不要流出细节 |
j******i
发帖数: 939 | 20 看开点吧，就是提高了效率的而已，用的都是现有的技术，学术意义上进步不大，上
nature methods, nature biotech很难。这个crispr+同源重组插入大片段，已经发了
在cell老鼠的文章，效率10-30%。Genome Research上也发了crispr＋非同源重组在
Zerbrafish插入长基因。 |
|
|
l**********k
发帖数: 189 | 21 稍微回答一下各位的问题。就象我讲的，公司做科研跟科研机构做科研不是一会事。从
很多回复来看，许多朋友可能知道ZFN/Talen/Crispr这些技术，也知道很多文章出来，
但实际上可能并不了解这些方法在基因敲进／条件性敲除方面的应用现状。
其实不管是ZFN, Talen还是Crispr，技术一出来大家就开始在想利用这些方法在没有ES
细胞的物种（比如大鼠）上做基因敲进和条件性基因敲除了，算算已经有至少5年了（
我记得2009年我去圣路易斯的Sigma公司的时候，他们就已经用ZFN做了很多敲除大鼠了
）。比如模式大鼠，为什么没有得到大范围的应用？ 实际上很多做神经研究的人都想
用基因敲进大鼠（比如加Reporter的），和条件性基因敲除大鼠。就是因为目前的所谓
ZFN／Talen/Crispr＋打靶载体注射受精卵的效率太低，没有哪家公司能够真正规模化
的提供稳定的技术服务。
我们用Jaenish文章里的方法也做不出来，但我听说他们有非常好的显微注射高手，所
以我们怀疑可能是我们公司的注射手艺还不够好。但不管好不好，总要把这个项目做起
来呀。所以我们一直在研发新方法。而这种方法我们觉得效率非常高，结果重复性好，
跟谁注射也关系不大。
马上我们会先做出一些ROSA-loxP-STOP-loxP-EYFP类的工具大鼠，以及一些常用的Cre
大鼠，这样大家就可以做条件性敲除了。我觉得3、5个月我们就可以做出几十种Cre大
鼠出来，估计会对国内的科研有所帮助。
所有的技术都是站在前人的肩膀上，这个方法也不是大家想象中的把各种已知分子进行
组合这么简单 。我相信我们这个技术应该是可以申请专利的。就是因为太简单了，申
请专利对我们不一定是一件好事。
【在 l**********k 的大作中提到】
: 自从ZFN（后来的TALEN, CRISPR)开始应用以来，大家一直在找一种好的办法做基因敲
: 进。以大鼠为例，如果没有一系列的CRE工具鼠，大家就不会去做条件性基因敲除。但
: 除了小片段（或ODN)以外，大片段的基因敲进一直没有成功的报道。
: 这几年我自己也一直在想如何能够在这方面做点事情。做公司跟做科研不一样。科研实
: 验室里对效率不是很关心。比如可以通过注射几百上千的受精卵，最后只要有成功的就
: 算成功，然后发文章。而做公司更关心的是技术的稳定性，也就是除了高效率，还要重
: 复性好。所以我们就组建了一个研发团队，专门做大鼠的基因敲进研究。
: 经过一年多的摸索，最后终于找到了一种通过受精卵注射做基因敲进的方法。这个方法
: 的原理是通过利用ZFN/TALEN/或CRISPR先在染色体上切一刀，然后让带有同源臂的打靶
: 载体在切割位点进行同源重组。我们先在细胞系上进行摸索，最后得到了一个很有效的
|
w***r
发帖数: 709 | 22 稳定，重复性好，对于急需发文章的大牛，或博后来说不是太重要
公司就没法自己骗自己了，长木有一手资料，不是纸上谈兵，这个技术的应用价值巨大
不过从发文章角度，新颖性可能不是太强，别人一学就会，影响生意
ES
【在 l**********k 的大作中提到】
: 稍微回答一下各位的问题。就象我讲的，公司做科研跟科研机构做科研不是一会事。从
: 很多回复来看，许多朋友可能知道ZFN/Talen/Crispr这些技术，也知道很多文章出来，
: 但实际上可能并不了解这些方法在基因敲进／条件性敲除方面的应用现状。
: 其实不管是ZFN, Talen还是Crispr，技术一出来大家就开始在想利用这些方法在没有ES
: 细胞的物种（比如大鼠）上做基因敲进和条件性基因敲除了，算算已经有至少5年了（
: 我记得2009年我去圣路易斯的Sigma公司的时候，他们就已经用ZFN做了很多敲除大鼠了
: ）。比如模式大鼠，为什么没有得到大范围的应用？ 实际上很多做神经研究的人都想
: 用基因敲进大鼠（比如加Reporter的），和条件性基因敲除大鼠。就是因为目前的所谓
: ZFN／Talen/Crispr＋打靶载体注射受精卵的效率太低，没有哪家公司能够真正规模化
: 的提供稳定的技术服务。
|
w***a
发帖数: 4361 | 23 真正work得很好的技术都是超级简单的技术，比如PCR，RNAi。
还是可以申请专利赚钱的，卖专利比卖产品效率高呀。
ES
【在 l**********k 的大作中提到】
: 稍微回答一下各位的问题。就象我讲的，公司做科研跟科研机构做科研不是一会事。从
: 很多回复来看，许多朋友可能知道ZFN/Talen/Crispr这些技术，也知道很多文章出来，
: 但实际上可能并不了解这些方法在基因敲进／条件性敲除方面的应用现状。
: 其实不管是ZFN, Talen还是Crispr，技术一出来大家就开始在想利用这些方法在没有ES
: 细胞的物种（比如大鼠）上做基因敲进和条件性基因敲除了，算算已经有至少5年了（
: 我记得2009年我去圣路易斯的Sigma公司的时候，他们就已经用ZFN做了很多敲除大鼠了
: ）。比如模式大鼠，为什么没有得到大范围的应用？ 实际上很多做神经研究的人都想
: 用基因敲进大鼠（比如加Reporter的），和条件性基因敲除大鼠。就是因为目前的所谓
: ZFN／Talen/Crispr＋打靶载体注射受精卵的效率太低，没有哪家公司能够真正规模化
: 的提供稳定的技术服务。
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H*********a
发帖数: 133 | 24 有位国内显微注的高手现在在美国，她准备今年6月底开始在美国找microinjection位
置。她有7,8年的专职microinjection经历。主要从事：
Nuclear transfer cloning
intracytoplasmic sperm injection
pronuclear injection
blastocyst, 8-cell embryo microinjection of ES cells.
Rederivation
能否指点在美国如何找到专职的显微注射位置？她非常喜欢microinjection，不想找其
它位置。
ES
【在 l**********k 的大作中提到】
: 稍微回答一下各位的问题。就象我讲的，公司做科研跟科研机构做科研不是一会事。从
: 很多回复来看，许多朋友可能知道ZFN/Talen/Crispr这些技术，也知道很多文章出来，
: 但实际上可能并不了解这些方法在基因敲进／条件性敲除方面的应用现状。
: 其实不管是ZFN, Talen还是Crispr，技术一出来大家就开始在想利用这些方法在没有ES
: 细胞的物种（比如大鼠）上做基因敲进和条件性基因敲除了，算算已经有至少5年了（
: 我记得2009年我去圣路易斯的Sigma公司的时候，他们就已经用ZFN做了很多敲除大鼠了
: ）。比如模式大鼠，为什么没有得到大范围的应用？ 实际上很多做神经研究的人都想
: 用基因敲进大鼠（比如加Reporter的），和条件性基因敲除大鼠。就是因为目前的所谓
: ZFN／Talen/Crispr＋打靶载体注射受精卵的效率太低，没有哪家公司能够真正规模化
: 的提供稳定的技术服务。
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v********e
发帖数: 1597 | 25 你这么说起来，我想你们没必要申请专利，也不要发表文章，除非你觉得技术被拿走泄
密的可能性很大；而且申请专利未必能保护的了你们，你想啊，别人要是也用你的技术
做敲除，你找出证据说别人侵权的难度很大；而且，你的专利并不是单独的，你需要用
别人的专利去覆盖，不管是talen,还是cas9,现在肯定已经不少专利的，你们要花很多
钱和精力去处理专利的问题，不划算
【在 l**********k 的大作中提到】
: 自从ZFN（后来的TALEN, CRISPR)开始应用以来，大家一直在找一种好的办法做基因敲
: 进。以大鼠为例，如果没有一系列的CRE工具鼠，大家就不会去做条件性基因敲除。但
: 除了小片段（或ODN)以外，大片段的基因敲进一直没有成功的报道。
: 这几年我自己也一直在想如何能够在这方面做点事情。做公司跟做科研不一样。科研实
: 验室里对效率不是很关心。比如可以通过注射几百上千的受精卵，最后只要有成功的就
: 算成功，然后发文章。而做公司更关心的是技术的稳定性，也就是除了高效率，还要重
: 复性好。所以我们就组建了一个研发团队，专门做大鼠的基因敲进研究。
: 经过一年多的摸索，最后终于找到了一种通过受精卵注射做基因敲进的方法。这个方法
: 的原理是通过利用ZFN/TALEN/或CRISPR先在染色体上切一刀，然后让带有同源臂的打靶
: 载体在切割位点进行同源重组。我们先在细胞系上进行摸索，最后得到了一个很有效的
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w***a
发帖数: 4361 | 26 开玩笑吧，单独的实验室嫌麻烦不注册专利而去发个文章也就算了。
公司如果有核心技术不用专利保护是很危险的，让别人抢注了，你自己哭都没地方去。
至于专利怎么撰写，那是律师的事情。
【在 v********e 的大作中提到】
: 你这么说起来，我想你们没必要申请专利，也不要发表文章，除非你觉得技术被拿走泄
: 密的可能性很大；而且申请专利未必能保护的了你们，你想啊，别人要是也用你的技术
: 做敲除，你找出证据说别人侵权的难度很大；而且，你的专利并不是单独的，你需要用
: 别人的专利去覆盖，不管是talen,还是cas9,现在肯定已经不少专利的，你们要花很多
: 钱和精力去处理专利的问题，不划算
|
r***z
发帖数: 19 | 27 我猜是donor片段两端设计成带有ngg序列的，利用改造过的不会发生切割的cas9指引
donor到要替换的位点，提高效率 |
T****u
发帖数: 424 | 28 it won't work in this way
【在 r***z 的大作中提到】
: 我猜是donor片段两端设计成带有ngg序列的，利用改造过的不会发生切割的cas9指引
: donor到要替换的位点，提高效率
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j******i
发帖数: 939 | 29 我猜可能有更有效的deliver方法，比如virus. 这样显微注射的要求就降低了。 |
d*p
发帖数: 534 | 30 Nonintegrated virus?
【在 j******i 的大作中提到】
: 我猜可能有更有效的deliver方法，比如virus. 这样显微注射的要求就降低了。
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j******i
发帖数: 939 | 31 对头。我猜的。可能完全不是这样。
【在 d*p 的大作中提到】
: Nonintegrated virus?
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d*p
发帖数: 534 | 32 Unfortunately, I am working on it.
【在 j******i 的大作中提到】
: 对头。我猜的。可能完全不是这样。
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