q****g
发帖数: 129 | 1 Crispr如果插入后不乱跳还行，如果继续在人体基因组上乱跳还是很危险的。这样的话
人可能经常抽风，说不准哪天就被插死了。 |
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q****g
发帖数: 129 | 2 那问题就不太大，大家也可以把小孩的黑色素基因用Crispr打死，这样就可以自己生白
人宝宝了。 |
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g******a
发帖数: 778 | 3 塌鼻子小眼睛大饼脸外加白皮，整个一白化病
：那问题就不太大，大家也可以把小孩的黑色素基因用Crispr打死，这样就可以自己生
白人宝宝了。
：【 在 lubbock12 (非老非小将) 的大作中提到: 】 |
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w********2
发帖数: 632 | 4 比普通的crispr应用难很多。贺胆子太大了。这种动物实验做的都不充分。 |
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s*******c
发帖数: 42 | 6 旧金山湾区生物startup(位于Berkeley)招聘research associate. 公司前景广阔. 要
求非博士学位, 切实的iPSc 或CRISPR 实战经验. 有意者联系[email protected] |
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s*******c
发帖数: 42 | 7 旧金山湾区生物startup(位于Berkeley)招聘research associate. 公司前景广阔 (www
.koniku.com). 要求非博士学位, 切实的iPSc 或CRISPR 实战经验. 有意者联系[email protected]
koniku.io |
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s*******c
发帖数: 42 | 8 位于加州Berkeley 的极具潜力的生物公司(www.koniku.com)持续招聘research
associate, 要求具有全面扎实的iPS cell 制备和/或Crispr经验. 有意者联系[email protected]
koniku.com |
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z*****u
发帖数: 3010 | 10 药股上天下地 让人很恐怖啊~~
CRISPR三兄弟 如果要上的话 是不是得每个都买
押宝押中 看哪一个能够最好出来 |
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发帖数: 1 | 11 三兄弟虽然有竞争，但其实还是各司其职的。CRSP主要是中国市场，NTLA和EDIT的专利
也是植物动物里各不相同。现在EDIT离临床最近，成功率会很高。当然NTLA和EDIT有专
利纠纷，这个肯定会影响股价。在临床前这几个股应该都会在区间震荡，愿意玩而且会
玩波段的，可以去玩玩，不会玩的控制好仓位买了放那就行了。这个技术本身绝对是划
时代的，看看CART，只是用zinc finger就已经得到如此牛逼的结果，换成CRISPR那绝
对是再强很多倍。
当然，无论那个股票都有风险，那么风险在哪呢？这个股的风险不在于技术本身，唯一
的风险在于公司自己。技术好但是公司最后完蛋了的也是有不少的。但这三个公司的
founder都是这个技术最原始的发现和推广者，都在超级名校，资源无数，把公司弄崩
盘的几率还是很小的。 |
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f*******1
发帖数: 1308 | 12 Crispr gene editing这个强大的概念，疯炒起来一天涨个两三块钱小意思了。 |
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t**l
发帖数: 109 | 13 你看他们选的基因就知道了，目前TET火的不行，用CRISPR KO TET，听着就了不得。 |
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C*******e
发帖数: 4348 | 15 这个题目至少实实在在
没有噱头
Doudna组做了很多CRISPR蛋白的结构
没有这些做奠基
后来的那些应用很难建立 |
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e*******e
发帖数: 64 | 16 现在用的CRISPR（type II)到现在还真跟结构研究没多大关系
不过大家都在等她的结构，哈哈 |
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L*****t
发帖数: 56 | 17 想要研究某个蛋白的功能，HepG2里有这个蛋白完整的代谢通路但是这个蛋白本身也有
表达。现在想敲除本底表达后用Flp-FRT引入突变体。只是单纯的敲除，TALEN和CRISPR
哪一个更合适？ |
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s*****g
发帖数: 87 | 19 用TALEN吧，敲除单个基因的话CRISPR没有优势，而且还可能有off-target |
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d****i
发帖数: 2346 | 20 我也不了解，但是看文章说CRISPR的off target远远低于前者。。 |
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s********x
发帖数: 472 | 21 我个人倾向于crispr ， 速度比talen快很多 ， 不用合成那些dna repeats。
说到突变，细胞培养的突变恐怕更多，而且也没有那么巧就影响实验。
我做遗传，用enu ems 化学诱变 背景突变不知道多少，还不是一样分析。 |
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d****i
发帖数: 2346 | 22
按照碱基的长度看的话确实是CRISPR稍微差一点。我主要是看了Qi的那篇cell文章，他
们用了RFP作为target，也可能是RFP在细菌和细胞内本身就是一个外源基因，内源
genomic DNA里面同源的序列比较少或没有，，因此看起来特异性就高了很多。 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 23 Mark again and thx.
--from FDU Alumni
发信人: giantbird05 (大鸟), 信区: Biology
标 题: Re: 想在HepG2细胞系里敲除一个基因，用TALEN还是CRISPR容易？
发信站: BBS 未名空间站 (Sun May 26 01:39:25 2013, 美东)
mark;求科普 |
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t******y
发帖数: 716 | 25 我觉得CRISPR的特异性应该还行，至少从上述的Paper里20个碱基，只要3-4个以上有变
异，off target效应就急剧下降。 |
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a*****n
发帖数: 2835 | 26 做细胞的话多选几个克隆，设计2－3个CRISPR，得到一致的表型就行了
做动物的话，得到杂合体后back cross几代应该就没事了 |
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o**********n
发帖数: 2 | 27 我目前在做lncRNA，现在有的plko系统感觉效率不是很高，想用CRISPR系统来试试？
有没有哪位高人指点一下如果要使用CRSIPR去knock out或者knock down 某个lncRNA，
应该怎样操作呢？
如果在该lncRNA的启动子区域选择位点可行吗？但是又要怎样选择gRNA的序列呢？
或者是不是可以在该基因的两端各设计一条gRNA把它整段剪去呢？
谢谢各位，欢迎讨论 |
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A******y
发帖数: 2041 | 28 I thought CRISPR is not specific. You have to use TALEN. |
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o**4
发帖数: 35028 | 29 我用feng zhang实验室的网站设计的结果如下：
http://crispr.mit.edu/job/9989720016962422
all guides
scored by inverse likelihood of offtarget binding
mouse over for details ... hide legend
high quality guide
mid quality guide
low quality guide
score sequence
Guide #1 68 AGCTGTAGCATTTTCTAACT TGG
Guide #2 62 AGCTACAAACTTTAAGACAA AGG
Guide #1 44 TTACTTTCTGAAAATCATCT TGG
Guide #3 43 TTAAGCTTTCTATTGTTTGT CGG
Guide #5 40 TTTGCCTGAACAACTTAAAG AGG
Guide #4 31 CAGAAAGTAAAACTAAAAGT TGG... 阅读全帖 |
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o**4
发帖数: 35028 | 30 我用feng zhang实验室的网站设计的结果如下：
http://crispr.mit.edu/job/9989720016962422
all guides
scored by inverse likelihood of offtarget binding
mouse over for details ... hide legend
high quality guide
mid quality guide
low quality guide
score sequence
Guide #1 68 AGCTGTAGCATTTTCTAACT TGG
Guide #2 62 AGCTACAAACTTTAAGACAA AGG
Guide #1 44 TTACTTTCTGAAAATCATCT TGG
Guide #3 43 TTAAGCTTTCTATTGTTTGT CGG
Guide #5 40 TTTGCCTGAACAACTTAAAG AGG
Guide #4 31 CAGAAAGTAAAACTAAAAGT TGG... 阅读全帖 |
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b*******0
发帖数: 125 | 32 比如说 把ob ob 小鼠 （leptin 点突变）通过 CRISPR-Cas9 搞瘦？ |
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b*******0
发帖数: 125 | 33 难道这不是 CRISPR-Cas9 的终极目的吗？ |
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l******3
发帖数: 25 | 34 从合作者那里拿来了一个某个基因KO的细胞系，他们是用CRISPR系统建的细胞系。如果
我现在要在此基础上过表达该基因的一个突变体，需要先做mutation吗？ |
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a*****n
发帖数: 2835 | 35 应该不用吧，理论上来说CRISPR系统是瞬时表达的
你可以跟合作者沟通一下 |
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z*t
发帖数: 863 | 36 我觉得crispr胜在便宜易用，adv基本还是targeting vector的东西，对非es cell的
somatic细胞比较好用。
patient |
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j*b
发帖数: 341 | 37 不双筛是46%
如果不是promoter trap,用CRISPR做Knockin的效率是多少？
文章里用的可是人ESC。难度很大
不一定同源臂越长，重组越高。比如用BAC，200kb 直接做KO vector,效果很差 |
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d****i
发帖数: 2346 | 38 如果真是这样的效率，其实已经很好了，但是好几百kb的操作肯定比CRISPR的几百bp的
操作难度要大。两个技术各有优缺点。 |
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i*****i
发帖数: 154 | 39 最近在做基于CRISPR的knockout，感觉很强大啊。
而且效率也非常高，不知道以后会不会完全取代siRNA和shRNA啊？
大牛们讲讲。 |
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j******i
发帖数: 939 | 40 各有所长吧。zfn, talen, 出来也没有取代shRNA啊。CRISPR目前至少要解决两个问题
，一个是太大，难deliver, 一个是off-targeting. |
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w*****r
发帖数: 2061 | 41 CRISPR比TALEN简单多了
都是RNA guide，off-targeting跟shRNA差不多吧，不知道Cas9 nuclease没有guide的
话，活性怎么样 |
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s******s
发帖数: 13035 | 42 不过取代不容易。siRNA有点像hemizygous,
CRISPR现阶段只能homozygous。 |
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j****n
发帖数: 3370 | 43 Knock out 和 knock down的区别吧
不知道crispr用于knock down容易实现不？貌似用于gene activation已经实现了
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.6 |
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a******a
发帖数: 283 | 45 Genome editing The Berkeley and San Francisco campuses of the University of
California have announced a US$12-million project focused on the CRISPR/Cas9
gene-editing technology, the powerful technique that allows targeted
rewriting of genomes (see Nature http://doi.org/rz6; 2014). The Innovative Genomics Initiative will receive $10 million from the Li Ka Shing Foundation in Hong Kong, with the rest made up by the two universities. Jennifer Doudna, the Berkeley-based executive director of the ini... 阅读全帖 |
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d****i
发帖数: 2346 | 46 很想用CRISPR，但是担心设计，合成，连接克隆，转染进去以后发现没作用，有off
target，折腾了好长时间拿不到phenotype。
问一下楼主，你做KO有没有筛单克隆？那个过程我感觉蛮复杂的。 |
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y***y
发帖数: 709 | 47 也准备上CRISPR的人搭车问一下
怎么从设计的三个sgRNA里面筛选到效率高呢？
把gblock合成好之后，分别和cas9质粒共转染然后做RFLP吗？
还是收蛋白看目的基因的表达情况？
我要做的是成纤维细胞，转染效率很低，不知道在低转染效率的情况下如何筛选到效率
高的sgRNA，希望得到有经验人的指点。 |
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b***2
发帖数: 348 | 48 把crispr的蛋白想办法直接弄进细胞有没有可行性和优势？ |
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j******i
发帖数: 939 | 50 1. off-target 和细胞毒性 跟cas9 浓度有关。
2. 涉及dna的vector有插入到基因组的风险。是一种insertional mutagenesis.
3. 从dna表达的cas9存在时间长，筛选得到的克隆其实并非纯克隆，而是很多克隆的混
合，因为CRISPR会一直在cut.
4. Overexpression cas9 可能引起免疫反应。
5. Transfection或nucleofection在很多原代细胞效率很低，而且有毒性。
6. 蛋白不用表达，受精卵注射的时候用mRNA, 可能跟dna难表达有关。
7. 能想到的暂时只有这些了。 |
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