h******y
发帖数: 351 | 1 Jaenisch lab最新发表的利用CRISPR同时敲除5个基因的文章。CRISPR前途无限啊。再搞
出几个inducible的CRISPR就更厉害了。
One-Step Generation of Mice Carrying Mutations in Multiple Genes by CRISPR/C
as-Mediated Genome Engineering
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23643243
Cell. 2013 May 1. pii: S0092-8674(13)00467-4. doi: 10.1016/j.cell.2013.04.02
5.
One-Step Generation of Mice Carrying Mutations in Multiple Genes by CRISPR/C
as-Mediated Genome Engineering.
Wang H, Yang H, Shivalila CS, Dawlaty MM, Cheng AW, Zhang F, Jaenisch R.
Source
Whitehead Institute for Biomedical Research, Cambridge, MA 02142, USA.
Abstract
Mice carrying mutations in multiple genes are traditionally generated by seq
uential recombination in embryonic stem cells and/or time-consuming intercro
ssing of mice with a single mutation. The CRISPR/Cas system has been adapted
as an efficient gene-targeting technology with the potential for multiplexe
d genome editing. We demonstrate that CRISPR/Cas-mediated gene editing allow
s the simultaneous disruption of five genes (Tet1, 2, 3, Sry, Uty - 8 allele
s) in mouse embryonic stem (ES) cells with high efficiency. Coinjection of C
as9 mRNA and single-guide RNAs (sgRNAs) targeting Tet1 and Tet2 into zygotes
generated mice with biallelic mutations in both genes with an efficiency of
80%. Finally, we show that coinjection of Cas9 mRNA/sgRNAs with mutant olig
os generated precise point mutations simultaneously in two target genes. Thu
s, the CRISPR/Cas system allows the one-step generation of animals carrying
mutations in multiple genes, an approach that will greatly accelerate the in
vivo study of functionally redundant genes and of epistatic gene interactio
ns. |
a*****n
发帖数: 2835 | 2 需要直接给受精卵注射mRNA，技术上要求比较高，估计很快有公司会开始提供这种服务
再搞
/C
02
/C
【在 h******y 的大作中提到】
: Jaenisch lab最新发表的利用CRISPR同时敲除5个基因的文章。CRISPR前途无限啊。再搞
: 出几个inducible的CRISPR就更厉害了。
: One-Step Generation of Mice Carrying Mutations in Multiple Genes by CRISPR/C
: as-Mediated Genome Engineering
: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23643243
: Cell. 2013 May 1. pii: S0092-8674(13)00467-4. doi: 10.1016/j.cell.2013.04.02
: 5.
: One-Step Generation of Mice Carrying Mutations in Multiple Genes by CRISPR/C
: as-Mediated Genome Engineering.
: Wang H, Yang H, Shivalila CS, Dawlaty MM, Cheng AW, Zhang F, Jaenisch R.
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t**l
发帖数: 109 | 3 这个技术能做cre-flox，或者+GFPtag吗 |
o**4
发帖数: 35028 | 4 这篇文章novelty几乎没有，不知道咋发到cell上的 |
H**O
发帖数: 89 | 5 展开说说，为啥木有novelty？
敲掉Tet1&2&3本身就很牛了吧，更何况是全新的技术。
【在 o**4 的大作中提到】
: 这篇文章novelty几乎没有，不知道咋发到cell上的
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o**4
发帖数: 35028 | 6 这个敲除的文章不是发了吗，
而且这个技术也发了啊，
何况之前有个组用同样的技术也做了老鼠，发到cell research上了，
技术在人细胞已经出来了，他们只是换到了老鼠而已，没啥新颖的
【在 H**O 的大作中提到】
: 展开说说，为啥木有novelty？
: 敲掉Tet1&2&3本身就很牛了吧，更何况是全新的技术。
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a*****n
发帖数: 2835 | 7 之前那个老鼠文章不知道是从受精卵开始的还是从ES细胞开始的？我觉得这两种方式很
不一样
这篇文章是CELL RESOURCE
【在 o**4 的大作中提到】
: 这个敲除的文章不是发了吗，
: 而且这个技术也发了啊，
: 何况之前有个组用同样的技术也做了老鼠，发到cell research上了，
: 技术在人细胞已经出来了，他们只是换到了老鼠而已，没啥新颖的
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o**4
发帖数: 35028 | 8 发之前，我听过报告，感觉撑死了 nature biotech，
实在没想到，能发到cell上，
【在 a*****n 的大作中提到】
: 之前那个老鼠文章不知道是从受精卵开始的还是从ES细胞开始的？我觉得这两种方式很
: 不一样
: 这篇文章是CELL RESOURCE
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o**4
发帖数: 35028 | 9 有啥很大的差别吗？
这俩原理都一样啊，传统的knockout也都用这两种啊
【在 a*****n 的大作中提到】
: 之前那个老鼠文章不知道是从受精卵开始的还是从ES细胞开始的？我觉得这两种方式很
: 不一样
: 这篇文章是CELL RESOURCE
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X***n
发帖数: 366 | 10 off-targetting怎么解决？要真是只有前13bp是重要的话，在基因组里面13bp出现的几
率太多了。 |
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X***n
发帖数: 366 | 11 只要外加targeting vector就可以了。
【在 t**l 的大作中提到】
: 这个技术能做cre-flox，或者+GFPtag吗
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o**4
发帖数: 35028 | 12 这个确实是最大的concern
【在 X***n 的大作中提到】
: off-targetting怎么解决？要真是只有前13bp是重要的话，在基因组里面13bp出现的几
: 率太多了。
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M*****n
发帖数: 16729 | 13 I heard his talk just two weeks ago.
the method is quite useful, but without his name it may not be a Cell paper.
perhaps Nat Biotech or lower.
【在 o**4 的大作中提到】
: 这篇文章novelty几乎没有，不知道咋发到cell上的
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h******y
发帖数: 351 | 14 确实，他们在文章中也讨论了off target，而且对几个predicted的off target sites做
个检测，没有发现异常。
的几
【在 o**4 的大作中提到】
: 这个确实是最大的concern
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o**4
发帖数: 35028 | 15 一般的小lab能发到nature method就很不错了
paper.
【在 M*****n 的大作中提到】
: I heard his talk just two weeks ago.
: the method is quite useful, but without his name it may not be a Cell paper.
: perhaps Nat Biotech or lower.
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t**l
发帖数: 109 | 16 你看他们选的基因就知道了，目前TET火的不行，用CRISPR KO TET，听着就了不得。 |
m*****z
发帖数: 1451 | 17 Too good to be true a
sites做
【在 h******y 的大作中提到】
: 确实，他们在文章中也讨论了off target，而且对几个predicted的off target sites做
: 个检测，没有发现异常。
:
: 的几
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a****k
发帖数: 1130 | 18 cell想要一篇CRISPR的文章呢
【在 o**4 的大作中提到】
: 一般的小lab能发到nature method就很不错了
:
: paper.
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o**4
发帖数: 35028 | 19 也是，赶潮流，Jaenisch 确实做得快，很早就弄到他们的质粒了吧
【在 a****k 的大作中提到】
: cell想要一篇CRISPR的文章呢
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w********r
发帖数: 1431 | 20 深刻啊。
问题是和前面几片隔了有一段时间了吧，以后大家引用的时候还会引这片cell么？
【在 a****k 的大作中提到】
: cell想要一篇CRISPR的文章呢
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S*********s
发帖数: 304 | 21 这哥们还是挺厉害的
如果有resource应该能很快做起来。
同时做了很多project,真是很不容易。MIT那里的氛围也很重要。
【在 w********r 的大作中提到】
: 深刻啊。
: 问题是和前面几片隔了有一段时间了吧，以后大家引用的时候还会引这片cell么？
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w********r
发帖数: 1431 | 22 一作是位大牛么？
【在 S*********s 的大作中提到】
: 这哥们还是挺厉害的
: 如果有resource应该能很快做起来。
: 同时做了很多project,真是很不容易。MIT那里的氛围也很重要。
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o**4
发帖数: 35028 | 23 做stem cell应该会引用吧
【在 w********r 的大作中提到】
: 深刻啊。
: 问题是和前面几片隔了有一段时间了吧，以后大家引用的时候还会引这片cell么？
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s*********x
发帖数: 1923 | 24 exactly!
【在 a****k 的大作中提到】
: cell想要一篇CRISPR的文章呢
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C*******e
发帖数: 4348 | 25 还好吧
最近CRISPR比较火
很多杂志都争先恐后发这个题材的
然后用CRISPR做knock out的去年就连发了几篇
从人、老鼠、到斑马鱼
然后还有一篇是用回到细菌身上的
不过说什么“genome engineering”实在是个噱头
只能做Knock out，而且不能控制"knock out"基因的多长的一部分
不是什么想怎么加/减/替换都行的 |
s******9
发帖数: 283 | 26 Cell年初已经发过西岸几个组的CRISPR interference。西岸东岸现在是换着灌，不过
Doudna组的工作拿到主要的credit。
Repurposing CRISPR as an RNA-Guided Platform for Sequence-Specific Control
of Gene Expression
http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0092867413002
【在 a****k 的大作中提到】
: cell想要一篇CRISPR的文章呢
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C*******e
发帖数: 4348 | 27 这个题目至少实实在在
没有噱头
Doudna组做了很多CRISPR蛋白的结构
没有这些做奠基
后来的那些应用很难建立
【在 s******9 的大作中提到】
: Cell年初已经发过西岸几个组的CRISPR interference。西岸东岸现在是换着灌，不过
: Doudna组的工作拿到主要的credit。
: Repurposing CRISPR as an RNA-Guided Platform for Sequence-Specific Control
: of Gene Expression
: http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0092867413002
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m*b
发帖数: 1421 | 28 不知道这个1 co的yang hui是不是生化所一片nature一片cell的那个yang hui
如果是那这个yang hui有点牛过头了 |
e*******e
发帖数: 64 | 29 现在用的CRISPR（type II)到现在还真跟结构研究没多大关系
不过大家都在等她的结构，哈哈
【在 C*******e 的大作中提到】
: 这个题目至少实实在在
: 没有噱头
: Doudna组做了很多CRISPR蛋白的结构
: 没有这些做奠基
: 后来的那些应用很难建立
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C*******e
发帖数: 4348 | 30 谢谢纠正
【在 e*******e 的大作中提到】
: 现在用的CRISPR（type II)到现在还真跟结构研究没多大关系
: 不过大家都在等她的结构，哈哈
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a*******a
发帖数: 4233 | 31 应该是的
【在 m*b 的大作中提到】
: 不知道这个1 co的yang hui是不是生化所一片nature一片cell的那个yang hui
: 如果是那这个yang hui有点牛过头了
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P****d
发帖数: 564 | 32 这个可不可以做the minimal mammalian genome? |
s******s
发帖数: 13035 | 33 怎么感觉Jaenisch啥都能插一脚做个行业老二一类的，但是缺乏原创啊 |
H****N
发帖数: 997 | 34 同感
【在 s******s 的大作中提到】
: 怎么感觉Jaenisch啥都能插一脚做个行业老二一类的，但是缺乏原创啊
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